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上海市卫生局科研基金([2007]26)
作品数:
1
被引量:5
H指数:1
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杨毕伟
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2011
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肿瘤坏死因子α调节人肝癌MHCC-97H细胞中白细胞介素8的分泌
被引量:5
2011年
目的研究肿瘤坏死因子(TNF)仅诱导入肝癌细胞系MHCC-97H分泌白细胞介素8(IL-8)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-KB(NF—KB)信号通路对其的调节作用。方法酶联免疫吸附法检测不同浓度的TNFα(0、1、5ng/ml)干预人肝癌细胞MHCC-97H24h和相同浓度的TNFα(1ng/m1)干预不同时间后,细胞上清液中IL-8的浓度;Westemblot和免疫荧光方法检测TNFα(1ng/m1)刺激MHCC-97H细胞后,p38MAPK磷酸化蛋白的表达及其分布;非放射性NF-κBp50/p65转录因子潘胜试剂盒检测TNFα干预MHCC-97H细胞后核蛋白中活性NF—κBp65蛋白的含量。多组均数比较采用单因素方差分析,多个样本均数间两两比较用q检验。结果TNFα明显促进肝癌细胞分泌IL-8,具有显著的时间和浓度依赖性:TNFα干预0、6、12、18、24h,IL-8的浓度分别为(47.45±9.78)pg/ml、(497.41±52.83)pg/ml、(694.14±44.43)pg/ml、(909.35土97.22)pg/ml、(1093.59±75.72)pg/ml(F=144.04,P〈0.01);TNFα0、1、5、10ng/ml干预24h,IL-8浓度分别为(47.45±9.12)pg/ml、(1093.59±75.72)pg/ml、(1372.77±85.10)pg/ml和(1614.55±153.52)pg/ml(F=364.14,P〈0.01)。TNF仅刺激肝癌细胞后,p38MAPK磷酸化蛋白表达明显上调,给予p38MAPK通路特异性抑制剂(SB203580)可以显著抑制TNFα诱导的IL-8的分泌(P值均〈0.01)且呈浓度依赖性(F=165.92,P〈0.01)。免疫荧光结果显示TNFⅨ促进肝癌细胞NF—κBp65的核转位,且呈浓度依赖性(TNFα0、1、5、10ng/ml处理肝癌细胞1h后细胞核蛋白表达NF—KBp65对应吸光度值分别为0.52±0.04、2.75±0.15、3.13±0.18、3.81±0.14(F=1266.42,P〈0.05),而SB203580则可以部分抑制NF-KBp65的核转位(F=141.20,P〈0.05)。结论TNFα通过p38MAPK—NF—κB信号途径调节人肝癌细胞系MHCC-97分泌
王耀辉
夏景林
王伟敏
杨毕伟
崔杰峰
王向东
樊嘉
关键词:
肝细胞
白细胞介素8
肿瘤坏死因子Α
P38丝裂原活化蛋白激酶类
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