霍英东青年教师基金(111027)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 小菜蛾气味受体蛋白PlxyOr83b基因的克隆及表达被引量：2
- 2011年
- 【目的】克隆小菜蛾Plutella xyostella气味受体Or83b基因,并进行原核表达,为研究小菜蛾寄主选择行为的分子机理,开发昆虫行为调节剂提供基础。【方法】提取小菜蛾的总RNA,反转录获得总cDNA,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其克隆至T载体并测序,然后将目的基因克隆到大肠杆菌Escherichia coli表达载体pET-32a(+)中表达。经酶切、PCR及测序鉴定正确后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE,Western印迹鉴定表达蛋白。【结果】获得了编码小菜蛾Or83b的cDNA序列,该基因阅读框长1 413 bp,编码471个氨基酸,预测的等电点为7.19,命名为PlxyOr83b(GenBank登录号为GQ923610);成功构建了pET-PlxyOr83b原核表达重组质粒,目的基因获得高效表达,其融合蛋白分子量为32.0 kD,Western blot检测结果进一步表明PlxyOr83b在大肠杆菌DE3中得到正确表达。【结论】成功克隆和表达了小菜蛾气味受体基因PlxyOr83b,该基因与其他昆虫Or83b基因基本一致。
- 李珣刘晶晶龚亮陈永钟国华
- 关键词：小菜蛾气味受体基因克隆原核表达
- 斜纹夜蛾线粒体复合物ⅢFe-S蛋白基因克隆、序列分析及在不同发育阶段的表达特征被引量：4
- 2011年
- Fe-S蛋白(rieske iron-sulfur protein,RISP)是线粒体复合物Ⅲ的关键蛋白亚基之一,在呼吸链电子传递中起着重要作用。本文利用RT-PCR技术和RACE方法获得了斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fab.)线粒体复合物ⅢRISP基因,该基因序列全长4413bp,含有3个内含子;开放阅读框长816bp,编码271个氨基酸。经氨基酸序列比对,与鳞翅目家蚕Bombyx mori和小菜蛾Plutella xylostella的Fe-S蛋白一致性较高,分别为83%和79%,与其他目昆虫的RISP一致性较低。qRT-PCR分析结果表明,SlitRISP基因在斜纹夜蛾不同发育阶段的表达水平存在显著差异,即幼虫期和成虫期的表达量显著高于卵期和蛹期,其中幼虫期又以第4和5龄幼虫表达水平显著高于初孵幼虫以及第1,2,3和6龄幼虫。斜纹夜蛾SlitRISP基因的克隆成功为今后对其功能研究以及作为靶标设计新型高效杀虫剂提供了基础。
- 陈永龚亮左洪亮钟国华
- 关键词：斜纹夜蛾基因结构
- 小菜蛾泛素延伸蛋白基因的克隆与原核表达被引量：3
- 2011年
- 利用RT-PCR和RACE技术,以小菜蛾(Plutella xylostella)3龄幼虫的cDNA为模板,克隆获得泛素延伸蛋白基因Px-ubi(GenBank No.FJ527489),核苷酸序列全长537 bp,其中开放阅读框全长387 bp,编码129个氨基酸残基,预测分子质量为16.7 ku,等电点为9.1,与已知真核生物泛素延伸蛋白的同源性为92%～98%。RT-PCR结果显示Px-ubi在小菜蛾不同生长发育时期均有表达,其中卵期、3龄期和预蛹期含量较高,而成虫期含量较低。同源建模显示,Px-ubi的3D结构主要由1个α螺旋、4个β折叠以及β转角和不规则卷曲组成,4个β折叠两两反向平行排列在α螺旋的一侧。将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中,获得重组载体pET32a-Px-ubi,并转入原核细胞中表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,经IPTG诱导后,Px-ubi能在大肠杆菌BL21中高效表达,电泳检测到1条约16.7 ku的外源蛋白,与预测的蛋白分子质量吻合。
- 李晓梅陈永李珣钟国华
- 关键词：小菜蛾泛素基因克隆原核表达
