国家自然科学基金创新研究群体项目(30121005)
- 作品数：21 被引量：166H指数：7
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- 相关机构：中国人民解放军总医院中国人民解放军第一军医大学郑州大学第一附属医院更多>>
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- 人钠依赖性二羧酸转运蛋白2(hSDCT2)的组织表达谱分析被引量：1
- 2003年
- 利用DNA重组技术 ,构建重组表达质粒pGEX hSDCT2 .IPTG诱导其表达后 ,采用谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,获得纯化的谷胱甘肽S 转移酶 (GST) hSDCT2重组融合蛋白 .以此为免疫原免疫兔制备GST hSDCT2融合蛋白抗体 .多组织Northern印迹法结果显示 ,3 6kb的hSDCT2基因转录产物 ,在心、骨骼肌、胸腺、小肠、肺和外周血白细胞等组织中几乎不表达 ,在脑、结肠、脾、肝和胎盘中仅有少量表达 ,但在肾脏中大量表达 ;并且在肾脏和脾脏中还存在着另一种约 4 3kb的转录产物 .Western印迹法证实 ,hSDCT2蛋白以类似方式于上述组织表达 .免疫组化双重染色结果发现 ,与分布于近端肾小管刷状缘的hSDCT1不同 ,hSDCT2主要分布于近端肾小管的基底膜侧 .这些结果为进一步研究人钠依赖性二羧酸转运蛋白 2的结构和功能奠定了基础 .
- 朱晗玉陈香美刘章锁何娅妮彭丽霞洪权孙雪蜂
- 关键词：组织表达谱抗体表达质粒
- 人高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白3对人成纤维细胞衰老进程的影响
- 2004年
- 目的 探讨人高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白 3(hNaDC3)在人胚肺二倍体成纤维细胞 (WI 38)衰老中的作用。 方法 通过构建逆转录病毒载体 ,使用含有hNaDC3基因的逆转录病毒液将hNaDC3基因导入WI 38中 ,并获得表达 ,观察其对WI 38细胞衰老的影响。 结果 与对照细胞相比 ,hNaDC3基因导入后 ,WI 38细胞传代数减少 10～ 13代 ,生长速率降低 4 0 % ,细胞周期阻滞于G1期 ,细胞形态呈衰老细胞样变化 ,衰老相关 β 半乳糖苷酶 (SA β gal)染色阳性率上升 ,线粒体膜电位下降。 结论 hNaDC3可能促进人W 1 38衰老。
- 袁莉陈香美崔世维傅博李志辉冯哲王建中
- 关键词：WI转运蛋白衰老进程人成纤维细胞人胚肺二倍体成纤维细胞
- 抗氧化剂和内质网钙释放阻滞剂对老年大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中凋亡的影响被引量：2
- 2006年
- 目的探讨联合应用抗氧化剂BHA(Butylated Hydroxyanisole,叔丁基羟基茴香醚)和内质网钙释放阻滞剂TMB-8〔8-(N,N-diethyl-amino)-noctyl-3,4,5-trimethoxybenzoate)〕对老年大鼠肾脏缺血/再灌注(I/R)损伤时肾组织中细胞凋亡蛋白酶-3(caspase-3)表达及活性的影响。方法27月龄Wistar大鼠分别随机分为假手术组、I/R模型组、I/R+BHA+TMB-8组,双侧肾动脉夹闭30min/再灌注18h制作模型。观察肾功能改变,原位末端标记(TUNEL)法检测肾小管上皮细胞凋亡情况,Northern blot检测肾组织中caspase-3mRNA表达,比色法测定肾组织中caspase-3活性。结果肾脏I/R损伤时,老年大鼠肾功能明显减退,大量肾小管上皮细胞凋亡,肾组织caspase-3mRNA表达及活性增加;BHA+TMB-8能显著改善老年大鼠肾功能,减轻肾小管上皮细胞凋亡,降低肾组织caspase-3表达及活性。结论BHA+TMB-8联合治疗能明显抑制老年大鼠肾脏I/R损伤时肾组织caspase-3表达及活性,从而减轻肾小管上皮细胞凋亡,保护肾功能。
- 丁瑞乔晞陈香美吴镝师锁柱尹忠
- 关键词：BHATMB-8
- 动态检测血管紧张素Ⅱ刺激后STAT3信号核转位及其与衰老的关系
- 2004年
- 为了动态观察复制性衰老细胞中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)激活人信号转导与转录活化因子3(hSTAT3)信号转导途径的核转位情况及该途径在细胞衰老过程中的变化。将载体pMS1-hSTAT3上的目的基因STAT3序列亚克隆到pEGFP-C3报告载体中,构建出pEGFP-hSTAT3质粒;选择人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38细胞株进行细胞培养,通过脂质体(Effectene)转染的方法,将pEGFP-STAT3质粒分别转染至19代,42代WI-38细胞中;在激光共聚焦显微镜下动态观察血管紧张素Ⅱ激活STAT3的核转位的变化及不同代数的差别.结果显示AngⅡ刺激细胞后,出现活化的STAT3在胞核内聚集现象,并且在19代细胞中15分钟开始出现,30—45分钟左右时达到高峰;42代细胞中30分钟左右开始出现,50—60分钟左右达到高峰。因此我们认为Ang Ⅱ刺激WI-38细胞,能出现hSTAT3信号转导的核内集聚现象;并且随着WI-38细胞传代数的增加,STAT3信号转导入核时间延迟。说明随着细胞的复制性衰老,通过STAT3通路转导的信号活性逐渐降低,最终影响细胞的增殖,可能是促进细胞衰老的原因之一。
- 冯哲陈香美王建中吕杨洪权
- 关键词：血管紧张素II衰老细胞激光共聚焦显微镜
- 明胶酶及其抑制物在衰老大鼠肾组织中的表达及意义被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨明胶酶 A、B(MMP- 2、9)及组织金属蛋白酶抑制剂 - 1、2 (TIMP- 1、2 )在衰老大鼠肾组织中的表达及它们在大鼠肾脏衰老过程中的作用。方法 选用 3月、2 4月龄 Wistar大鼠 ,采用 RT- PCR及 Western blot方法分别检测 TIMP- 1、TIMP- 2、MMP- 2及 MMP- 9等在大鼠肾脏中的表达 ;用明胶酶谱法检测不同鼠龄大鼠肾组织中 MMP- 2及 MMP- 9的活性。结果 与青年鼠相比 ,衰老大鼠肾组织内 TIMP- 1、TIMP- 2的m RNA的表达明显增加 (0 .2 58± 0 .0 2 9对 0 .667± 0 .0 59;0 .42 6± 0 .0 36对 0 .80 2± 0 .0 51 ,P<0 .0 1 ) ,蛋白质的表达明显增加 (0 .348± 0 .0 57对 0 .74± 0 .0 2 9;0 .488± 0 .0 80对 0 .92 8± 0 .0 31 ,P<0 .0 1 )。 MMP- 9和 MMP- 2的活性则显著下降 (1 64.35± 2 .95对 1 4 4 .2 4± 2 .77;1 50 .74± 2 .1 0对1 31 .57± 2 .2 6,P<0 .0 1 )。结论 由于 TIMP- 1、TIMP- 2的高表达及 MMP- 9和 MMP- 2的活性下降而引起的明胶酶及其抑制物表达异常可能与肾脏衰老密切相关。
- 陈荣权陈香美崔世维谢院生蔡广研吕杨
- 关键词：明胶酶衰老肾组织组织金属蛋白酶抑制剂
- 低亲和力钠依赖二羧基转运蛋白随增龄表达变化的研究
- 2003年
- 目的 研究大鼠及人类肾脏低亲和力钠依赖(Na^+/)二羧基转运蛋白(NaDC1)随增龄的表达变化规律并探讨其在肾脏衰老变化中的意义。方法 采用Northern杂交、Western印迹及免疫组化等方法对大鼠出生后1d、7d、1个月、3个月、12个月、24个月及少年、中青年、老年正常人肾脏 NaDC1的表达变化。结果 大鼠NaDC1 mRNA表达呈现随肾组织发育成熟表达逐渐增强,1个月达高峰,后随增龄表达下降的趋势(P<0.05)。Western印迹显示NaDC1蛋白随鼠龄增高表达逐渐增强,3个月达高峰,后表达渐降的趋势。免疫组化结果显示大鼠及人类肾组织NaDC1分别表达于近端小管刷状缘,大鼠生后1d表达最弱,后表达渐强,到3个月达高峰(5.30±1.52比1.40±0.43,P<0.01),后呈现渐降的趋势(P<0.05)。人类肾组织NaDC1表达呈现随增龄渐降的趋势。结论 大鼠及人肾组织进入衰老时,NaDC1 mRNA及蛋白表达均呈现下降的趋势,可作为对肾脏衰老观察的指标之一。
- 彭丽霞陈香美洪权何娅妮李建军王兆霞
- 关键词：肾脏衰老免疫组化
- 肾小球系膜细胞的分离和培养被引量：10
- 2003年
- 目的分离、培养和鉴定正常人肾小球系膜细胞。方法筛网滤过分离正常人肾小球系膜细胞,同时采用免疫荧光技术,利用异硫氰酸荧光素(FITC)间接标记单克隆抗体:抗Ⅷ因子相关抗原抗体、抗结蛋白抗体、抗角蛋白抗体、抗细胞角蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体对系膜细胞特有的中间微丝进行鉴定。并采用同期培养的同一来源的肾小球内皮细胞作对照。结果抗Ⅷ因子相关抗原、抗角蛋白和抗细胞角蛋白抗体表达均为阴性,而抗结蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体为阳性,说明培养的细胞为系膜细胞。结论该种方法分离培养的细胞经过免疫荧光染色鉴定为肾小球系膜细胞。
- 孙晓艳安靓傅博李进
- 关键词：肾小球系膜细胞单克隆抗体
- 增龄引起复制性衰老细胞胞内钙信号转导的变化被引量：1
- 2003年
- 为了观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )引起复制性衰老细胞胞内游离钙的变化以及衰老对其的影响 ,初步阐明衰老引起胞内游离钙变化的机制 .选用人胚肺二倍体成纤维细胞WI 38细胞株 ,利用逆转录PCR(RT PCR)技术及Northern杂交技术检测衰老细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)、血管紧张素Ⅱ 2型受体 (AT2R)mRNA水平的表达 ;利用激光共聚焦显微成像技术 (LSCM )观察WI 38细胞在AngⅡ刺激 ,Valsartan阻断条件下细胞内钙离子荧光强度的改变 .AngⅡ通过AT1受体介导增加WI 38细胞内游离钙的水平 ,并随着WI 38细胞传代增加至衰老状态 ,AT2受体高表达 ,AT1受体介导的钙离子信号转导的活性逐渐降低 .提示WI 38细胞衰老过程中钙离子信号的转导活性降低 ,并且AT1R和AT2R在血管紧张素Ⅱ介导的细胞内钙信号活性中具有不同的作用与机制 .为探讨WI
- 冯哲陈香美洪权王建中
- 关键词：衰老细胞血管紧张素共聚焦显微镜
- 外源性人TIMP-1基因在转基因小鼠染色体上的整合及定位被引量：3
- 2006年
- 为探讨外源基因人基质金属蛋白酶组织抑制物-1（human tissue inhibitor of metalloproteinase-1，hTIMP-1）基因在转基因小鼠家系染色体上的整合和精确定位，应用Southern印迹检测外源基因在染色体上整合的位点及拷贝数，结果表明，外源基因是以单拷贝、单位点形式整合；应用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术检测F4～F20代转基因小鼠中外源基因的整合．结果证明，该家系转基因小鼠自F4代起是纯合子，外源基因整合在17号染色体E区；反向PCR法（Inverse PCR，IPCR）克隆出约3．8kb外源基因整合位点处的侧翼序列．分析表明，外源基因整合在17号染色体E1.3区，ALK（anaplastic lymphoma kinase，ALK）基因第23个内含子区域、结果提示，获得的转基因小鼠为纯系，外源基因hTIMP-1已稳定整合在转基因小鼠染色体上，并能遗传给后代．
- 朱晗玉陈香美马润林张冬芬任建功
- 关键词：转基因动物模型基质金属蛋白酶组织抑制物-1荧光原位杂交反向PCR
- 2001例血液透析患者病因分析及高血压和贫血治疗状况被引量：82
- 2005年
- 目的为初步调查我国血液透析患者的主要病因及治疗状况,对分布全国28个省市自治区的部分军队医院现有血液透析患者共2001例的病因、目前促红细胞生成素使用及贫血治疗、高血压治疗状况、血浆白蛋白及血脂水平等进行了调查。结果2001例血液透析患者中原发性肾小球肾炎占49.07%、高血压肾损害占16.99%、糖尿病肾病占12.04%,在2001例血液透析患者中,高血压患者的比率达81.51%,高血压控制常需多种降压药联合应用。血压控制低于140/90mmHg(1mmHg=0.133Kpa)水平者占58.98%。有85.51%的透析患者使用了促红细胞生成素,血红蛋白(Hb)≥90g/L的患者占使用促红细胞生成素患者的54.18%,Hb>110g/L者为16.78%。有33.33%患者血浆白蛋白水平低于35g/L,有12.14%患者血浆白蛋白水平低于30g/L。结论我国血液透析患者的病因主要是原发性肾小球肾炎、高血压肾损害、糖尿病肾病,高血压和贫血治疗效果欠满意。
- 中国人民解放军肾脏病专业协作组
- 关键词：血液透析病因血压促红细胞生成素贫血
