云南省教育厅科学研究基金(03Y620C)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 幽门螺杆菌粘附素基因的原核表达
- 2006年
- 目的:构建幽门螺杆菌粘附素(hpaA)基因的原核表达载体,并诱导表达。方法:用PCR扩增hpaA目的基因片段,克隆至pQE-30表达载体中,构建含目的基因的表达质粒pQE-hpaA,转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达蛋白HpaA;Western blot分析其免疫反应性。结果:经测序hpaA基因片段由783bp组成,可编码260氨基酸残基的多肽。经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为30000。可溶性表达占全菌的42%以上。Westernblot分析能与Hp全菌抗血清反应。结论:成功构建了粘附素hpaA基因的原核表达载体并能高效表达,为研制Hp疫苗提供理论依据。
- 吴利先王国富白丽王晶郭利军
- 关键词：幽门螺杆菌
- 幽门螺杆菌融合蛋白HCTV的保护性研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨幽门螺杆菌融合蛋白HCTV(HpaA-CtxB-VacA,HCTV)小鼠口服后的免疫应答。方法以Ni2+-NTA柱纯化HCTV为抗原,与重组蛋白HpaA和VacA分别给小鼠灌胃免疫,ELISPOT检测小鼠胃黏膜和派伊尔小结(Peyer patches,PP)特异性抗体分泌细胞(Antibody-secreting cells,ASC),ELISA检测血清IgG和IgA、小肠黏液sIgA和粪便sIgA。结果ELISPOT和ELISA检测结果表明,胃黏膜和PPsIgA-ASC、IgG-ASC数量明显增加,尤以sIgA-ASC为甚,同时血清IgA和IgG、粪便sIgA、肠黏液sIgA也明显高于HpaA组、VacA组和对照组,差异均有显著意义。结论已成功获得纯化的融合蛋白HCTV,小鼠灌胃免疫可有效诱导黏膜免疫应答,产生高水平的sIgA,可作候选Hp口服疫苗。
- 王国富吴利先白丽王晶郭利军潘云华
- 关键词：幽门螺杆菌黏附素霍乱毒素B亚单位融合蛋白
- 幽门螺杆菌融合蛋白HCTV的表达及免疫原性研究被引量：1
- 2006年
- 目的构建表达幽门螺杆菌融合蛋白粘附素-细胞空泡毒素A-霍乱毒素B亚单位(HpaA-CtxB-VacA,HCTV)的原核表达载体,并诱导表达,为制备具有治疗与预防作用的多联疫苗奠定基础。方法用PCR技术从pQE-hctB扩增hpaA和ctxB目的基因片段,从pQE30-V质粒扩增出vacA基因,同时插入表达载体pQE-30,构建成pQE-hctv。再将pQE-hctv转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果。Western blotting鉴定其抗原性。结果融合蛋白的相对分子量约为68000,可溶性表达占全菌的15%以上,经亲和层析后可获得纯度为90%以上的重组蛋白。Western blotting分析其能分别与HpaA抗血清、VacA抗血清和CT抗血清特异性反应。结论重组表达质粒pQE30-hctv表达成功,而且具有各自蛋白的抗原性,为进一步研究融和蛋白的功能和制备集预防和治疗为一体的Hp候选口服疫苗提供基础。
- 王国富吴利先白丽王晶郭利军
- 关键词：幽门螺杆菌粘附素细胞空泡毒素霍乱毒素B亚单位融合蛋白
- HpaA蛋白在幽门螺杆菌感染诊断中的应用被引量：2
- 2006年
- 目的建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值。方法将从临床分离菌株中获得的HpaA基因在大肠杆菌中表达,用Ni2+-NTA柱纯化表达的HpaA作为抗原,建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,与诊断标准比较评价其应用的可行性。结果经超声破碎后,用SDS-PAGE分析显示,HpaA蛋白主要存在于上清中,纯化抗原检测临床标本中HpaA抗体的敏感性和特异性分别为100.0%和90.1%。结论以重组蛋白为抗原初步建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础。
- 吴利先王国富白丽王晶潘云华郭利军
- 关键词：幽门螺杆菌ELISA诊断试剂
