重庆市科技攻关计划(CSTC2008AB7132)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王大勇张春秀谢朝新方振东敖漉更多>>
- 相关机构：国家工程研究中心中国人民解放军后勤工程学院更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划重庆市建设科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 水体中致病菌快速检测的基因芯片技术研究被引量：5
- 2010年
- 目的探讨基因芯片技术行水体致病菌快速检测的方法。方法采用基于单碱基延伸标签反应的基因芯片方法,对金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、志贺菌、军团菌、肺炎克雷伯菌、肠出血性大肠埃希菌O157:H7、幽门螺杆菌、大肠埃希菌、霍乱弧菌、结核分枝杆菌、鼠疫耶尔森菌、炭疽芽孢杆菌等13种可能存在于水体中的致病菌进行检测。结果该基因芯片可同时特异性地检测13种致病菌,基因组DNA检测灵敏度可达0.2pg,以肠炎沙门菌为单一检测对象的细菌纯培养物灵敏度可达1.0×103cfu/ml;配合浓缩集菌设备,整个检测时间可缩短至8h以内;用所制备的基因芯片检测模拟和实际水样,准确率达100%。结论该基因芯片检测水体致病菌操作简单,速度快,灵敏度高,稳定性和重复性好。
- 王大勇方振东谢朝新敖漉肖进文张春秀
- 关键词：细菌寡核苷酸序列分析
- 十三种致病菌多重PCR技术检测被引量：4
- 2011年
- 目的探讨致病菌多重PCR检测方法。方法利用13种在突发公共事件中可能出现在饮用水水源水体中的致病细菌的特异性序列为靶序列,设计了14对特异性引物并分成3组进行多重PCR反应,建立并优化了多重PCR检测体系。结果通过实验确定适宜的退火温度为66-68℃;3组检测引物的添加比例分别为：第1组引物添加比例为Shi∶Sa∶O157∶Ec∶Sen=1∶1∶1∶2∶3-1∶1∶1∶3∶4,第2组引物添加比例为Lm∶Lp∶Kp∶Hp=1∶1∶4∶1,而第3组引物添加比例为MT∶VC∶BA∶YP∶16S=8∶1∶8∶4∶4;混合引物的用量为0.6~0.8μL。多重PCR的基因组DNA检测灵敏度可达到2×10-2ng/μL;配合浓缩集菌设备,使用研究中建立的多重PCR体系,肠炎沙门菌培养液的检测下限可以达到103cfu/mL。结论该多重PCR检测方法操作简单,速度快,灵敏度高,稳定性和重复性好,具有较广阔的应用前景和较大的经济与社会效益。
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- 关键词：致病菌多重PCR检测
