国家自然科学基金(30360111)
- 作品数：10 被引量：16H指数：3
- 相关作者：于大海郝洁李敬陈海波曹莹更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属口腔医院广西医科大学广州医学院更多>>
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- 载体携带小干扰RNA抑制Tca8113细胞血管内皮生长因子的表达被引量：6
- 2008年
- 目的了解小干扰RNA(siRNA)对人舌癌细胞株Tca8113血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用。方法构建2对针对血管内皮生长因子的siRNA真核表达载体(Pu-VEGF-siRNA1,Pu-VEGF-siRNA2),经脂质体Lipo-fectamine 2000转染Tca8113细胞,以空载体组作实验对照组,未转染组作空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、酶联免疫吸附(ELISA)方法分别检测转染后的Tca8113细胞VEGF mRNA及蛋白表达。结果与实验对照组和空白对照相比较,转染Pu-VEGF-siRNA1和Pu-VEGF-siRNA2后Tca8113细胞的VEGF mRNA和蛋白表达明显下降。结论通过RNA干扰技术能有效抑制舌癌Tca8113细胞VEGF mRNA和蛋白的表达。
- 于大海曹莹姚志文李敬陈海波郝洁
- 关键词：舌癌血管内皮生长因子小干扰RNA
- VEGFsiRNA对人舌癌Tca8113细胞移植瘤血管生成影响的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:观察小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达对裸鼠皮下人舌癌Tca8113细胞移植瘤血管生成的影响。方法:构建人舌癌Tca8113细胞20只裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组。将两对针对VEGF的siRNA真核表达载体(Pu-VEGF-siRNA1,Pu-VEGF-siRNA2)脂质体法作瘤体内及瘤周注射;以注射空质粒组作实验对照组;未注射组作空白对照组。注射1次/3d×10次,末次注射3d后,剥离瘤体,RT-PCR检测瘤组织VEGF-mRNA表达,免疫印迹技术检测瘤组织VEGF蛋白表达。免疫组化染色法观察VEGF阳性染色及微血管参数。结果:Pu-VEGF-siRNA2组移植瘤VEGF-mRNA表达及VEGF蛋白表达、总体微血管密度、有腔微血管密度、有腔血管平均血管周长及管腔面积均较空质粒组及空白对照组低(p<0.05)。而Pu-VEGF-siRNA1组未观察到上述差别(p>0.05)。结论:siRNA能在体内抑制舌癌VEGF表达,有效减少肿瘤血管生成。不同的干扰片段体内作用效果存在差异。
- 李敬郝洁于大海陈海波曹
- 关键词：小干扰RNA舌癌微血管生成移植瘤
- 血管内皮生长因子小干扰RNA抑制人舌鳞状细胞癌细胞移植瘤生长及血管生成的实验被引量：2
- 2008年
- 目的观察小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）抑制血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达对人舌癌Tea8113细胞移植瘤的治疗作用。方法构建Tea8113细胞裸鼠皮下移植瘤模型，随机分成4组，A组、B组为实验组，C组：以空载体注射为治疗对照组，D组：未治疗为空白对照组，每组5只。脂质体法将两对VEGF siRNA真核表达载体（PU-VEGF-siRNA1、PU-VEGF-siRNA2）作瘤体内及瘤周注射，1次／3d，共10次后处死裸鼠；测量瘤体积及瘤重；反转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blotting和免疫组化法分别检测瘤组织VEGF—mRNA及VEGF蛋白表达，并检测瘤内微血管密度；流式细胞仪检测肿瘤细胞悬液的细胞周期比例，Tunel法检测组织细胞凋亡。结果B组瘤体积（0．402±0．158）cm^3、瘤重量（2．12±0．58）g，均低于C、D组，细胞G1期比例为（40．26±1．42）％，较C、D组增加，B组瘤组织VEGF mRNA（0．752±0．048）和蛋白表达（1．12±0．15），组织切片VEGF阳性细胞表达率（12．56±1．30）％、平均灰度值（164．2±15．42）及微血管密度（3．50±1．58）个，均低于C、D组（P〈0．05），凋亡细胞增加（P〈0．01）。结论siRNA能在体内抑制舌癌VEGF表达，减少肿瘤血管生成，延缓肿瘤生长。不同的干扰片段体内作用效果存在差异。
- 于大海李敬曹莹陈海波郝洁
- 关键词：鳞状细胞血管内皮生长因子小干扰RNA
- VEGF-siRNA对人舌癌TCA8113细胞体内及体外生长影响的初步研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨针对血管内皮生长因子(VEGF)的小分子RNA干扰(siRNA)对舌癌TCA8113细胞体内和体外生长的影响。方法将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体,以空载体组做实验对照组,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以未转染舌癌细胞作空白对照组,MTT检测转染后各组细胞增殖情况;将稳定转染的各组细胞接种裸鼠,接种后7 d开始,每4 d测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较各时间段肿瘤生长,接种后47 d处死,比较瘤体积和瘤重。结果与实验对照组和空白对照组相比较,两个实验组细胞生长速度降低,细胞抑制率均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),裸鼠接种肿瘤生长缓慢,处死后测量到瘤体体积小、重量轻(P<0.05),而实验对照组和空白对照组细胞抑制率、瘤体体积、瘤重等差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF-siRNA在体内和体外能有效的抑制人舌癌细胞的生长。
- 曹莹李敬于大海陈海波郝洁
- 关键词：舌癌RNA干扰血管内皮生长因子TCA8113
- siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-9蛋白表达的影响
- 2009年
- 目的利用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）抑制人舌癌Tca883细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达，观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF—siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞（VEGF—siRNA1、VEGF—siRNA2）为实验组，以转染空载体人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tea8113细胞为实验对照组和空白对照组，将各组细胞分别接种于裸鼠皮下，用免疫细胞／组织化学法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF及MMP-9的蛋白表达。结果在培养细胞和移植瘤中，与实验对照组和空白对照组相比，VEGF—siRNA1组和VEGF—siRNA2组VEGF染色平均灰度值高，差异有统计学意义（P〈0．05）；各组培养细胞中均未见MMP-9表达；各组移植瘤MMP-9染色平均灰度值之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因，可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达，但是对MMP-9蛋白的表达无明显影响。
- 郝洁于大海李敬曹莹
- 关键词：小干扰RNA舌癌基质金属蛋白酶
- siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达,观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)-2、-9及基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)-1、-2蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF-siRNA真核表达载体的Tca8113细胞(VEGF-siRNA1、VEGF-siRNA2)为实验组,以转染空载体的及未转染的Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组。将细胞分别接种于裸鼠皮下,用免疫组化法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF、MMP-2、-9及TIMP-1、-2的蛋白表达。结果各组培养细胞及移植瘤VEGF免疫组化染色:VEGF-siRNA1组、VEGF-siRNA2组与实验和空白对照组相比,平均阳性率降低,平均灰度值增高(P<0.05);各组培养细胞均未检测出MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白的阳性表达。各组移植瘤MMP-9、TIMP-1、-2可见阳性表达,但各组染色平均阳性率及平均灰度值之间的差异无统计学意义(P>0.05),而MMP-2未见明显阳性表达。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达,但是对MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白的表达无明显影响。
- 于大海郝洁李敬曹莹陈海波
- 关键词：小干扰RNA舌癌基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶抑制剂
- siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白表达的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)表达对移植瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白表达的影响。方法:以稳定转染携带针对VEGF的siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞(VEGF-siRNA1、VEGF-siRNA2)为实验组,以转染空载体的人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用明胶酶谱实验及蛋白免疫印迹法分别测定各组移植瘤TIMP-2、TIMP-9及TIMP-1的蛋白表达。结果:各组明胶酶谱实验结果均有较明显MMP-9蛋白表达,活性MMP-9蛋白含量较少,MMP-2蛋白表达量明显少于MMP-9蛋白表达,而活性MMP-2几乎完全没有可见条带出现。各组中MMP-2、MMP-9及活性-MMP-9条带酶量差异均尚不具统计学意义(P>0.05)。以scion图像分析系统分别读取各样本TIMP-1条带灰度值及β-actin条带灰度值,各组中TIMP-1蛋白相对含量差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:以siRNA干扰人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制肿瘤内VEGF的蛋白表达,但是对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表达无明显影响。
- 陈凤强郝洁于大海李晶罗婷婷
- 关键词：小干扰RNA舌癌基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶抑制剂
- RNA干扰沉默血管内皮生长因子抑制人舌癌细胞增殖的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的:通过转染能特异性沉默血管内皮生长因子(VEGF)表达的小干扰RNA(siRNA),观察能否抑制人舌癌Tca8113细胞株的增殖。方法:将自行构建的两对表达siRNA的重组质粒(PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2)转染到舌癌Tca8113细胞株中,以空载体组转染为实验对照组,以正常生长的舌癌细胞做空白对照组。实验组和实验对照组经G418筛选后,与空白对照组以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达,流式细胞技术分析细胞凋亡,MTT比色法检测细胞的生长抑制率。结果:与实验对照组相比,PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2重组体显著降低舌癌细胞VEGF mRNA的表达(P<0.01),MTT的结果显示分别在24、48、72、96h对细胞增殖的抑制率增加(P<0.05),细胞凋亡率也明显增高(P<0.01);而空载体转染组与空白对照组相比,对Tca8113细胞株增殖无抑制作用,对细胞凋亡变化无明显影响(P>0.05)。结论:PU-VEGF-siRNA在细胞内表达的siRNA不仅能显著降低VEGF表达,而且能有效抑制人舌癌细胞的增殖。
- 于大海曹莹李敬陈海波郝洁
- 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子细胞增殖舌癌
- 靶向舌癌Tca8113细胞血管内皮细胞生长因子基因的siRNA表达载体构建及体外抑制作用
- 2012年
- 目的构建靶向舌癌Tca8113细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的siRNA表达载体并在体外检测其对VEGF基因表达的抑制作用。方法设计合成靶向舌癌Tca8113细胞VEGF基因的siRNA cDNA序列并与Psilencer2.1-U6-neo连接,构建VEGF-siRNA表达载体(Pu-VEGF-siRNA),酶切鉴定和测序确认后,经脂质体Lipofectamine2000转染入Tca8113细胞,以空载体组为实验对照组(Pu-HK),未转染组为空白对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)和免疫组化方法检测染后Tca8113细胞VEGF蛋白表达差异。结果经过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了靶向Tca8113细胞VEGF基因的siRNA表达载体。与实验对照组和空白对照相比较,转染Pu-VEGF-siRNA后Tca8113细胞的VEGF蛋白表达明显下降(P<0.05),但两对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了靶向舌癌Tca8113细胞VEGF基因的siRNA表达载体,且该载体在体外能有效抑制Tca8113细胞VEGF蛋白的表达。
- 姚志文刘唯程由勇李红玖李春华于大海
- 关键词：血管内皮细胞生长因子舌癌
- PU-VEGF-siRNA对裸鼠皮下舌癌移植瘤生长的影响
- 2009年
- 目的:探讨针对血管内皮生长因子(VEGF)的小干扰RNA(siRNA)对舌癌Tca8113细胞移植瘤在裸鼠体内生长的影响。方法:将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体(PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2),经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以空载体组做实验对照,以未转染舌癌细胞作空白对照。将各组细胞接种裸鼠背部皮下,每组5只,观察裸鼠肿瘤生长情况,免疫组织化学染色法观察裸鼠肿瘤组织VEGF的表达。结果:与实验对照组和空白对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减缓,VEGF表达降低(P<0.05)。结论:siRNA抑制VEGF的表达,可显著抑制舌癌移植瘤在裸鼠体内的生长。
- 李敬曹莹于大海郝洁李煜黄慧平
- 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子舌癌移植瘤
