吉林省杰出青年科学基金(20030118)
- 作品数：10 被引量：24H指数：2
- 相关作者：王春凤刘尚高王会岩李玉于守平更多>>
- 相关机构：吉林农业大学中国农业大学吉林大学更多>>
- 发文基金：吉林省杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪A组轮状病毒VP4全基因在大肠杆菌中的表达与检测被引量：2
- 2005年
- 以猪轮状病毒mRNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT_PCR)技术,扩增了2331bp的VP4全基因,通过T_A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM_T Vector中,成功地构建出克隆质粒pGEM_T_VP4。以BamHI和SalI双酶切pGEM_T_VP4和pGEX_6P_1,并将纯化的VP4基因亚克隆至融合型表达载体pGEX_6P_1中,构建出原核表达质粒pGEX_6P_VP4。将pGEX_6P_VP4转化至感受态E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS_PAGE分析,可见约111.47 ku融合蛋白带。Western blot分析发现,该蛋白具有轮状病毒抗原性,从而为进一步研究轮状病毒的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础。
- 王春凤沈明浩王会岩刘尚高
- 关键词：轮状病毒VP4基因克隆与原核表达
- 猪源植物乳杆菌的诱变选育及其对小鼠免疫性能的影响被引量：2
- 2014年
- 为了获得1株具有较好耐酸耐胆盐、体外黏附率较高的植物乳杆菌,研究其对小鼠免疫性能的影响,试验将植物乳杆菌进行紫外诱变,对其耐酸和耐胆盐性能进行选育,将植物乳杆菌选育株BL-15冻干后,定量溶解,分3次口服(灌胃)BALB/c小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后测定小鼠免疫性能指标的变化情况。结果表明,经过诱变后,从17株诱变株中成功筛选获得了1株耐酸耐胆盐较好、体外黏附率较高的植物乳杆菌BL-15,经小鼠口服后,提高了小鼠生长初期的脾脏指数及细胞因子IL-2的含量,加强免疫后肠内容物中SIgA含量与对照组相比,均差异显著(P<0.05)。说明该菌株可以诱导小鼠产生良好的黏膜免疫应答,提高小鼠的免疫性能。
- 程福亮王春凤聂兆晶姜艳萍王丽荣刘洋庆谷巍
- 关键词：植物乳杆菌诱变选育小鼠免疫性能
- 猪A组轮状病毒Vp4全基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2005年
- 应用RT-PCR技术,从猪A组轮状病毒总RNA中扩增了2 331 bp的Vp4全基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-T中,转化至受体菌株JM109中,通过质粒提取、限制性内切酶酶切、PCR、序列测定等方法鉴定,构建出重组阳性克隆质粒pGEM-T-Vp4。经DNASTAR软件分析核苷酸和氨基酸序列,结果显示该实验株与黑龙江株和美国株的同源性最高,均达到99%以上,并具有轮状病毒Vp4全基因的抗原表位区。
- 王春凤于守平杨树宝李玉
- 关键词：轮状病毒
- 猪A组轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达
- 2005年
- 以猪A组轮状病毒mRNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了1194bp的Vp6基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-TVector中,构建克隆质粒pGEM-T-Vp6。用SacⅠ和KpnⅠ双酶切pGEM-T-Vp6和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t,并将纯化的Vp6基因亚克隆至表达载体pW425t中,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425t-Vp6。将pW425t-Vp6转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coliX13中,经生长功能弥补筛选阳性克隆,通过SDS-PAGE分析,可见约44.88kD的融合蛋白。由Western blot分析,表明该蛋白具有与轮状病毒多克隆抗体的反应原性,从而为pW425t-Vp6在乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和实验依据。
- 王春凤丛彦龙刘尚高李玉
- 关键词：轮状病毒VP6基因大肠杆菌
- 乳酸菌电转化的原理与转化条件的优化被引量：4
- 2010年
- 乳酸菌作为人和动物体内的正常菌群,具有诸多益生功能,因此被广泛应用于轻工、食品、医药及饲料工业等许多行业上。乳酸菌的遗传转化是限制对其遗传操作的关键因素之一,本文结合电转化原理,综述了乳酸菌电转化条件的优化指标。
- 肖冲王春凤
- 关键词：乳酸菌电转化
- 猪A组轮状病毒Vp4全基因在MA-104细胞中的表达与DNA疫苗的研究
- 2006年
- 本研究采用LipofectamineTM2000将真核重组表达质粒pVAXI-Vp4转染至MA-104细胞中,得到了表达。以荧光抗体检测法和RT-PCR法双重检测了真核重组表达质粒pVAXI-Vp4在MA-104细胞中的表达情况。并将pVAXI-Vp4免疫BALB/c鼠,检测其血清抗体和脾脏中的淋巴细胞增殖情况及CD4+,CD8+T细胞的数量变化情况。结果表明,猪A组轮状病毒Vp4全基因不但在哺乳动物细胞中获得了表达,而且将真核重组表达质粒pVAX-I-Vp4给动物免疫后,获得了免疫效果。这为pVAXI-Vp4DNA核酸疫苗的进一步推广应用提供了科学依据。
- 张二芹王会岩宫宇宏王春凤
- 关键词：免疫活性
- 食品级乳酸菌高效表达载体系统的研究进展
- 本文在乳酸菌表达载体构建的以往研究基础上,本文综述了食品级乳酸菌高效表达载体系统的研究进展。
- 郝凤奇王春凤
- 关键词：食品级乳酸菌
- 文献传递
- 猪轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2006年
- 以猪A组轮状病毒mRNA为模板,应用优化的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了2 331bp的Vp4全长基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-T中,构建质粒pGEM-T-Vp4。以SalⅠ和KpnⅠ双酶切pGEM-T-Vp4和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t,并将纯化的Vp4基因亚克隆至表达载体pW425t中,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425t-Vp4。将pW425t-Vp4转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E．coli X13中,通过生长功能弥补筛选阳性克隆,SDS-PAGE分析,可见约87．67 Ku融合蛋白。Western blot分析表明,该蛋白具有与轮状病毒多克隆抗体的反应原性,研究结果为pW425t-Vp4在乳酸菌受体菌株中表达提供科学依据。
- 王春凤李玉
- 关键词：轮状病毒VP4基因大肠杆菌
- 猪A组轮状病毒主要蛋白的编码基因DNA疫苗联合免疫的研究被引量：2
- 2017年
- 为研究猪A组轮状病毒(PRV-A)血凝蛋白(VP4)、群抗原蛋白(VP6)和中和抗原蛋白(VP7)编码基因疫苗联合免疫的效力,本研究将表达PRV-AVP4、VP6、VP7蛋白基因的真核表达质粒pVAX1-VP4、pVAX1-VP6、pVAX1-VP7以pVAX1-VP4+pVAX1-VP7(B组)和pVAX1-VP4+p VAX1-VP6+pVAX1-VP7(A组)设计试验组,分别以100μg/只经肌肉注射途径免疫BLAL/c小鼠,间隔2周以相同剂量、途径加强免疫,共免疫3次,免疫后不同时间采血,采用ELISA检测血清抗体。结果显示,B组在免疫后14 d和42 d检测到RV抗体阳性(P/N≥2),A组在免疫后14 d、28 d、42 d均检测到RV抗体阳性(P/N≥2);脾脏免疫相关细胞测定结果表明,A组的CD4^+/CD8^+T淋巴细胞比值和CD19^+B细胞数量均高于B组,两组与对照组相比差异显著(p<0.05);淋巴细胞转化试验显示A组的SI值均高于B组,并且42 d时A、B两组差异显著(p<0.05)。上述结果表明,3组分联合免疫的DNA疫苗可以诱导小鼠产生较强的体液和细胞免疫应答,为PRV-A的核酸疫苗研究奠定了基础。
- 高艳都兴洋智海东王洪峰张峣付朝阳高宏雷王春凤
- 关键词：真核表达联合免疫
- 猪肠道内乳酸菌数量和分布规律
- 猪肠道内分布着大量的正常菌群,乳酸菌作为益生菌在调节胃肠道正常菌群、维持微生态平衡,提高免疫力等方面发挥着重要作用。在益生乳酸菌的众多种类中,与动物关系最密切的是乳酸杆菌属、双歧杆菌属和肠球菌属。本文就乳酸杆菌、双歧杆菌...
- 马坤王春凤
- 关键词：肠道乳酸菌
- 文献传递
