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蚊抗药性相关糜蛋白酶基因的表达、纯化及活性分析: 2006年; 目的表达、纯化淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关糜蛋白酶（NYD-Ch）基因并进行酶活性分析。方法应用PCR和基因重组技术，构建原核表达载体，表达目的蛋白；用酶促底物法测定表达蛋白NYDCh的酶学活性和最适pH值。结果成功构建重组表达载体pET32a（＋）／NYD-Ch，并转化到感受态菌E．coli BL21（DE3）中。SDS-PAGE和Western blot显示，目的蛋白分子质量与理论值相符。NYD-Ch最大活力通过S（Ala）2ProPhe-pNA获得。NYD-Ch活力随pH的增高而增大，在pH8．01～11．0的范围内较高，pH10．0时达最高。抑制剂PMSF、SBTI、TPCK对NYD-Ch酶活力均有明显的抑制作用。结论成功表达了NYD-Ch蛋白，并分析了其酶学活性。本结果为深入研究NYD-Ch与杀虫剂抗性关系奠定基础。; 孙艳马磊钱瑾孙静孙立新; 关键词：糜蛋白酶原核表达纯化酶活性

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江苏省自然科学基金(BK2004147)