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超声微泡造影剂增强重组腺相关病毒rAAV—sTRAIL感染肝癌细胞的实验观察被引量：1: 2008年; 目的探讨携带可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）基因的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，以及采用超声辐照联合微泡造影剂介导rAAV-sTRAIL转染肝癌细胞的有效性。方法单纯重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染肝癌细胞株HepG2，以及利用超声辐照联合微泡造影剂介导重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染HepG2细胞，分别以RT-PCR方法和Westen印迹法检测细胞内sTRAIL基因mRNA及蛋白表达量，噻唑蓝法检测细胞的增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL可有效转染HepG2细胞，sTRAIL mRNA表达水平在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；rAAV-sTRAIL可抑制HepG2细胞增殖，其抑制率在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；rAAV-sTRAIL可诱导HepG2细胞凋亡，其凋亡率在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论构建出的重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL在肝癌细胞中能有效表达，sTRAIL基因对肝癌细胞有明显的抑制增殖和促凋亡作用；联合超声微泡造影剂及低强度超声，可有效提高腺相关病毒载体在肝癌细胞中的感染率，从而增强sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。; 夏金堂徐波王劭晟赖越元伍兆锋李书华李雯; 关键词：超声微泡造影剂

肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体表达载体的构建: 2007年; [目的]构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)基因的重组腺相关病毒载体。[方法]首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的穿梭质粒pAAV-sTRAIL,将穿梭质粒共转染入HEK293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL。以噬斑分析法筛选单克隆重组腺相关病毒:PCR法鉴定阳性重组腺相关病毒;氯化铯密度梯度离心法纯化病毒;紫外分光光度仪测定病毒颗粒数及纯度,噬斑分析法测定病毒感染滴度;Western blot检测rAAV-sTRAIL在293细胞中的表达情况。[结果]成功构建了重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,制备的病毒纯度好、滴度高,且在293转导细胞中能有效表达目的基因sTRAIL。[结论]构建的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,为研究TRAIL抗肿瘤细胞效应及临床应用提供先进的载体系统。; 王劭晟徐波夏金堂伍兆锋何绮微; 关键词：腺相关病毒基因治疗

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广东省医学科学技术研究基金(A2006517)

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