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IBDV荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其应用被引量：9: 2013年; 研究根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列设计了两条引物,通过RT-PCR技术对IBDV的VP2进行扩增,构建IBDV-VP2的标准品质粒,建立基于IBDV-VP2基因的荧光定量RT-PCR检测(QRT-PCR)技术和标准曲线,并检测该QRT-PCR体系的特异性、灵敏度和重复性,最后将该QRT-PCR体系应用于鸡外周血淋巴细胞(PBLs)中IBDV超强毒株(vvIBDV)复制规律以及临床样品的检测。结果表明,建立的QRT-PCR体系特异性好,不能与NDV、IBV及FAV1等发生反应,敏感度为1.51×101拷贝数/μl,扩增效率达1.018,重复性试验组内变异系数和组间变异系数均小于0.5%;在vvIBDV感染后6 h收获的细胞含病毒基因组拷贝数最高,对IBD疑似病例的检测敏感度高于套式RT-PCR技术。表明建立的反应体系特异、灵敏度高,并具有很好的稳定性,可应用于病毒复制水平的检测和临床样品的检测。; 何秀苗甘珊珊甘珊珊熊忠贤禤金彩廖艳娟; 关键词：鸡传染性法氏囊病荧光定量RT-PCR

鸡Toll样受体3基因全长的扩增及生物信息学分析被引量：4: 2011年; 利用RT-PCR方法从广西三黄鸡外周血淋巴白细胞中扩增出鸡Toll样受体3基因(TLR3),进而对其进行序列分析和结构预测。结果显示,扩增出的TLR3基因全长为3 036bp,与GenBank中鸡TLR3序列同源性达96.5%～99.7%,突变主要集中在胞外区前173个氨基酸;与牛、鼠、绵羊、猪、马、家兔、黑猩猩、人、大猩猩的氨基酸同源性较低,为68.0%～74.8%;禽类TLR3与其他动物类及人类的TLR3分属于两大不同分支,处于不同进化位置;结构预测表明,GX-sh-chTLR3具有明显的跨膜蛋白结构,胞外区蛋白是由外侧多个α螺旋和内侧凹陷的多个β折叠构成螺线管状马鞍形结构,胞外区含有15个明显的富含亮氨酸的重复序列。结果表明,成功扩增出的鸡TLR3基因编码蛋白的空间结构特征明显,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。; 甘珊珊何秀苗韦平; 关键词：扩增

鸡Toll样受体3胞外区片段的克隆表达及多克隆抗体的制备: 2012年; 以笔者所在课题组扩增测序的广西三黄鸡Toll样受体3(TLR3)基因为基础,采用降落PCR法从鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外功能区片段chTLR3-LRR,并构建该片段的原核表达重组质粒,通过优化蛋白表达条件,用获得的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过Western-blot鉴定多克隆抗体的特异性。结果显示,该片段长度为834bp,与预测的片段大小、碱基序列相符;构建的原核表达重组质粒pET-chTLR3-LRR经IPTG诱导后,表达出预期的30ku的重组蛋白,所获得的鼠抗鸡TLR3多克隆抗体能够与经传染性法氏囊炎病毒(IBDV)刺激后的鸡胚成纤维细胞的TLR3蛋白发生特异性免疫反应。表明,所选择的区域片段具有很好的免疫原性,制备的鼠抗鸡TLR3多抗具有良好的特异性,这为进一步研究鸡TLR3的功能提供了重要材料。; 何秀苗甘珊珊禤金彩韦平; 关键词：原核表达多克隆抗体

鸡Toll样受体研究进展被引量：10: 2010年; Toll样受体(TLRs)是一类典型的模式识别受体(PRR),是先天性免疫系统中的细胞跨膜受体以及病原模式识别(PAMP)受体之一。在鸡体中发现的TLRs(chTLRs)已经超过10种,其在进化中趋于保守,能识别保守的微生物成分。TLRs对病原相关分子模式的识别不仅在先天性免疫中有重要作用,还能够有效地启动获得性免疫。论文对部分TLRs在鸡体中的分布及参与激活获得性免疫途径的研究进行综述。; 甘珊珊何秀苗韦平; 关键词：TOLL样受体先天性免疫获得性免疫

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广西青年科学基金(0991014)