国家自然科学基金(30871990)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- 木聚糖酶基因xynB在不同大肠杆菌表达系统中的表达比较被引量：3
- 2011年
- 从黑曲霉(Aspergillus niger)nl-1中克隆获得木聚糖酶基因xynB.该基因全长745 bp,含有67 bp内含子,与公布的黑曲霉xynB基因有较高的同源性.将PCR扩增的木聚糖酶成熟肽基因和含有信号肽的基因分别连接到表达载体肠杆菌Top10 F'、DH10B和两种BL21宿主中获得重组菌株.通过IPTG诱导,xynB基因在重组菌株中获得特异性表达.表达产物以胞内可溶性蛋白和不溶性包涵体形式存在.诱导4 h,重组菌株pTrc-99a-xynB[BL21 condon plus(DE3)]表达量最高,胞内酶活达到299 IU/L.重组质粒pTrc-99a-xyn B(S)在不同宿主胞内和胞外均能分泌目的蛋白,诱导10 h,胞外酶活pTrc-99a-xynB(S)[BL21 condon plus(DE3)]达到347 IU/L.而pET-20b-xynB(S)在两种BL21宿主中均不表达.经SDS-PAGE分析,以pTrc-99a和pET-20b作为表达载体时,重组蛋白相对分子质量分别约为45×103和30×103.与pET-20b相比,pTrc-99a以及自身信号肽的引导更有利于重组木聚糖酶的表达.
- 李飞李迅孙静王飞赵林果
- 关键词：木聚糖酶信号肽黑曲霉
- 黑曲霉全细胞生物催化制备没食子酸丙酯的研究被引量：2
- 2012年
- 利用黑曲霉(Aspergillus niger)细胞作为全细胞生物催化剂,研究了催化没食子酸生成没食子酸丙酯的条件,探讨了有机溶剂、细胞预处理、底物浓度、反应时间和水分含量等因素在酶催化没食子酸丙酯合成中的影响,结果表明,苯是最佳溶剂,而菌丝体的含水量在80%时得率最高。在此基础上,选择菌丝量、没食子酸浓度、正丙醇体积分数和反应时间进行了正交试验,在200 r/min、40℃的转化条件下得到的较佳催化组合为:25 mL锥形瓶中加入10 mL苯、0.5 g菌丝、7 mmol(0.012 7 g)没食子酸、7.3%(0.73 mL)正丙醇组成的有机催化体系中,反应18 h,没食子酸丙酯得率达到36.4%。该过程无需要纯化或者固定化酶,实现了没食子酸丙酯低成本、高得率的催化。
- 裴建军姚凌菱李迅赵林果
- 关键词：没食子酸丙酯黑曲霉
- 补料发酵法制备β-葡萄糖苷酶的研究被引量：1
- 2008年
- 研究了黑曲霉制备β-葡萄糖苷酶液态发酵过程中添加麸皮和纤维二糖的补料工艺。补料量及补料次数影响着β-葡萄糖苷酶的分泌。经过四次补加1%无菌麸皮干粉,发酵液中β-葡萄糖苷酶活力由未补料的1.72 U/mL增加到5.07 U/mL,提高了近3倍。而且,添加麸皮浸提液能达到同样效果。采用分批补料工艺产酶时,初始浓度为3%的麸皮用量比较适宜,其蛋白含量和β-葡萄糖苷酶的活力均为最高,分别达到0.69mg/mL和7.00 U/mL。在补料总量和补料次数相同的情况下,以递减方式补料效果最好,产酶达7.34 U/mL。补加纤维二糖对β-葡萄糖苷酶的分泌具有一定的诱导作用,在接种培养48h时补加0.2%纤维二糖比较适宜。研究表明,分批补料发酵有利于黑曲霉分泌β-葡萄糖苷酶,是一种很好的提高酶产量的方法。
- 赵林果王平倪浩宗雅冬余世袁
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶分批补料发酵黑曲霉
