广东省医学科学技术研究基金(A2006536)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- HIF-1αsiRNA重组腺病毒对缺氧肺微血管内皮细胞HIF-1α和ET-1表达的影响
- 2009年
- 目的研究缺氧诱导因子-1αsiRNA重组腺病毒(Ad/siHIF-1α)对缺氧肺微血管内皮细胞(RPMVECs)HIF-1α及其下游基因ET-1表达的影响。方法原代培养肺微血管内皮细胞(RPMVECs);应用HEK293细胞大量扩增Ad/siHIF-1α。将RPMVECs分6组:A组(正常对照:常氧下5%CO2、95%空气、37℃培养);B组(含100μmol/L COCl2培养基培养4h);C组(Ad/siHIF-1α感染24h后,加入COCl2培养4h);D组(Ad/siHIF-1α感染48h后,加入COCl2培养4h);E组(Ad/siHIF-1α感染72h后,加入COCl2继续培养4h);F组(单纯腺病毒感染72h后,加入COCl2培养4h)。采用荧光定量PCR法检测HIF-1α和ET-1mRNA表达;Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达;ELISA法检测ET-1蛋白表达。结果与B组比较,C、D及E组HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白表达显著下调,差异有显著性(均P<0.05);与B组比较,C、D及E组ET-1mRNA、ET-1蛋白也相应下调,差异有显著性(均P<0.05)。结论Ad/siHIF-1α能够有效沉默缺氧诱导的大鼠肺血管内皮细胞HIF-1α基因,继而影响其下游ET-1基因的表达,为下一步在动物体内研究HIF-1α及其下游基因ET-1在新生儿肺出血发病机制中发挥作用。
- 陶莉董兰何柳芳陈克正吕回
- 关键词：小分子干扰RNA缺氧诱导因子-1腺病毒肺微血管内皮细胞缺氧
- 缺氧诱导因子-1对缺氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的调控作用被引量：2
- 2007年
- 【目的】探讨细胞凋亡在缺氧肺损伤的作用及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对细胞凋亡的调控作用。【方法】体外培养大鼠肺泡上皮细胞加入氯化钴(cobalt chloride,COCl2)制作细胞缺氧模型,将小分子干扰缺氧诱导因子-1(HIF-1αsmall interference RNA,HIF-1αsi RNA)有效的转染至细胞内,检测常氧、缺氧4、24 h、小分子干扰后缺氧4、24 h后HIF-1αmRNA的表达水平变化,同时应用荧光显微镜以及流式细胞术检测非转染以及转染组不同缺氧时间细胞凋亡率的变化。【结果】常氧下HIF-1αmRNA表达水平较低,随缺氧时间增加HIF-1αmRNA的表达水平明显升高(P<0.05);HIF-1αsiRNA可有效沉默HIF-1α,下调率为56%、57%(P<0.01)。细胞凋亡率随着缺氧时间延长而增加(P<0.05),48 h细胞开始出现坏死现象;通过HIF-1αsi RNA预处理细胞后,可降低缺氧诱导的细胞凋亡的发生率(P<0.05)。【结论】缺氧引起肺泡上皮细胞的凋亡,随缺氧时间增加凋亡增加,HIF-1α在缺氧诱导细胞凋亡中起着重要的作用,HIF-1αsiRNA可以减少肺泡上皮细胞凋亡的发生。
- 贺娟陶莉吕回
- 关键词：细胞凋亡肺泡上皮细胞缺氧诱导因子-L
- 缺氧对大鼠肺泡上皮细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨氯化钴（cobalt chloride，CoCl2）化学缺氧对大鼠肺泡上皮细胞（alveolar epithelial cell，AEC）凋亡的影响及相关凋亡蛋白缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-lalpha，HIF-1α）的表达变化及意义。方法将AEC进行体外培养，分4组，每组6个样本。缺氧4h组：选用化学缺氧物质CoCl2 500μmol／L为作用浓度，诱导AEC缺氧，共培养4h；缺氧24h组：与CoCl2共培养24h；缺氧48h组：与CoCl2共培养48h；常氧对照组：不做任何特殊处理。利用荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞凋亡率，透射电子显微镜进行细胞凋亡的形态学观察，Western印记法检测HIF-1α蛋白的表达情况。结果（1）荧光显微镜的结果显示缺氧4、24、48h组细胞凋亡率分别为（5．83±0．76）％、（15．00±3．28）％和（51．50±3．00）％，均高于常氧对照组[（1．50±0．50）％]（P〈0．05）；（2）流式细胞仪的结果与荧光显微镜的结果一致；（3）透射电子显微镜可以观察到AEC凋亡的形态学改变，缺氧24h显著；（4）缺氧4、24、48h组HIF-1α蛋白的表达分别为0．69±0．035、1．02±0．044和0．71±0．046，均高于常氧对照组（0．21±0．026）（P〈0．01）；（5）各组HIF-1α蛋白变化与荧光显微镜及流式细胞仪检测的细胞凋亡率变化均呈正相关（r=0．484，P=0．016；r=0．713，P=0．009）。结论缺氧对大鼠AEC的生存有抑制作用，这种抑制作用与缺氧引起的细胞凋亡有关；HIF-1α可能参与了缺氧诱导AEC凋亡的发牛，而AEC凋亡可能又参与了缺氧肺损伤的发病。
- 贺娟吕回陶莉
- 关键词：缺氧肺泡缺氧诱导因子1Α亚基
- 小分子干扰RNA在细胞凋亡调控中的应用研究进展被引量：1
- 2007年
- 细胞凋亡是由细胞内预存的细胞死亡程序引发的高度精密调节的、能量依赖性的、有序的细胞自杀过程,这一过程对消除机体内老化细胞及具有潜在性异常生长的细胞,以及保持机体处于稳态等中起着重要作用。细胞凋亡受相关基因调控,如果调控机制发生紊乱则可使机体发生多种疾病。小分子干扰RNA(siRNA)技术是将靶基因沉默的一种方法,它能够较简便且准确地产生与基因剔除相似的作用。本文着重介绍运用siRNA技术对凋亡诱导基因或抑制基因进行调控,及其在癌症、病毒感染性疾病及肺损伤等治疗中的研究进展,展望siRNA作为一种新型基因封闭工具的应用前景。
- 贺娟吕回
- 关键词：SIRNARNAI细胞凋亡基因沉默
