国家自然科学基金(81072481)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李震中白欣立李春岩张军峰刘卫卫更多>>
- 相关机构：河北医科大学第二医院中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 空肠弯曲菌cdtA、cdtB及cdtC真核表达重组载体的构建与表达被引量：1
- 2010年
- 目的以空肠弯曲菌(CJ)细胞扩张毒素(cytolethal distending toxi,CDT)cdtA、cdtB及cdtC为目的基因,构建CJ-cdtA、cdtB及cdtC基因的真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-cdtA,pcDNA3.1(+)-cdtB,pcDNA3.1(+)-cdtC,为CJ核酸疫苗的研制提供实验材料。方法用Primer5.0软件分析GenBank中空肠弯曲菌细胞扩张毒素cdtA、cdtB及cdtC基因序列,设计合成相应特异性引物,引入EcoRI、BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,PCR扩增cdtA、cdtB及cdtC目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1(+)-cdtA、pcDNA3.1(+)-cdtB及pcDNA3.1(+)-cdtC;通过酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定,筛选阳性重组体。结果扩增出特异的cdtA、cdtB及cdtC基因片段,大小约为807bp、798bp、570bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了CJ真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-cdtA、pcDNA3.1(+)-cdtB及pcDNA3.1(+)-cdtC。结论 PCR扩增得到了大小约为807bp、798bp、570bp的CJ-cdtA、cdtB及cdtC目的基因片段;并成功构建了pcDNA3.1(+)-cdtA、cdtB及cdtC真核表达重组载体。
- 刘卫卫白欣立李震中张军峰李鑫赵子春李春岩
- 关键词：空肠弯曲菌
- 空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因克隆与序列分析
- 2012年
- 目的克隆空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因,并分析其遗传进化关系。方法聚合酶链反应扩增空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因,构建pGEM-T-WaaF质粒,选择正确克隆质粒测序。自美国国家生物技术信息中心Nucleotide数据库下载5株吉兰-巴雷综合征相关菌株WaaF序列,1株非吉兰-巴雷综合征相关菌株WaaF序列,利用DNAstar v7.1软件建立进化树,分析不同菌株间WaaF基因遗传关系。结果完成了空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因的克隆,发现WaaF基因在吉兰-巴雷综合征相关菌株间存在聚类现象。结论空肠弯曲菌Lulei株WaaF基因是807bp的片段,与Lichang株遗传进化关系最近。
- 邢丛丛徐飞白欣立付金生李文倩卢晓卫马海阳李震中
- 关键词：进化遗传学
- 吉兰-巴雷综合征相关空肠弯曲菌cstⅡ基因序列对比研究被引量：1
- 2011年
- 目的研究华北地区3株吉兰-巴雷综合征（Guillain-Barre syndrome，GBS）相关空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni，C.jejuni）的cstⅡ基因序列并寻找GBS相关及GBS无关的两类空肠弯曲菌菌株间可能与GBS致病性相关的基因突变位点和蛋白高级结构变化，分析菌株间遗传进化关系。方法选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序，与GenBank中GBS无关空肠弯曲菌基因序列进行配对对比，寻找两类菌株间可能导致空肠弯曲菌致病能力差异的cstⅡ基因碱基突变位点及蛋白高级结构改变，观察这种变化是否为GBS相关菌株的共性，并构建遗传进化树。结果与GBS无关菌株相比，3株致GBS菌株cstⅡ基因的氨基酸序列二级结构的第7个0L螺旋的165—180区段均被打开形成了折叠或转角，该变化在其他GBS相关菌株的二级结构变化中同样得到体现。实验中75％的GBS相关菌株cstⅡ基因为双功能，25％GBS相关菌株及所有GBS无关菌株cstⅡ基因为单功能。LL株与实验中涉及的GBS相关菌株在进化上高度类聚。结论双功能cstⅡ可能与空肠弯曲菌的致GBS特性相关。LL株cstⅡ基因在一定程度上反映了亚洲地区的GBS相关菌株cstⅡ基因的序列特征，为进一步探索GBS发病的地域性特点并对GBS菌株进行监测提供了资料。
- 孙世超白欣立陈娟王莹邢丛丛付金生李震中
- 关键词：吉兰-巴雷综合征空肠弯曲菌
- 空肠弯曲菌cdtA、cdtB、cdtC基因的克隆、序列分析及B细胞表位预测
- 2010年
- 目的预测和分析空肠弯曲菌(CJ)细胞扩张毒素(CDT)cdtA、cdtB、cdtC蛋白的二级结构和B细胞抗原表位,为CJ疫苗研制提供基础资料。方法 PCR扩增cdtA、cdtB、cdtC基因,克隆入pGEM-T载体并测序,对重组质粒测序后进行生物信息学分析。以cdtA、cdtB、cdtC基因推导的氨基酸序列为基础,采用Chou-Fasman法、Ganmier-Robson法和Karplus-Schulz法预测该蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle方案、Emini方案和JamesonWolf方案预测其B细胞抗原表位。结果克隆的cdtA、cdtB、cdtC基因全长分别为874bp、913bp、711bp。发现cdtA的840-32bp序列完全与标准株NCTC11168的1-807bp序列一致,cdtB的841-42bp序列完全与标准株NCTC11168的1-798bp序列一致,cdtC的667-96bp序列完全与标准株NCTC11168的1-570bp序列一致。cdtA第11～44和54～90区段,cdtB第5～70、78～112、137～187区段,cdtC第119～140和145～193区段及其附近可能是CJ-cdtA、cdtB、cdtC蛋白的B细胞表位优势区。结论成功扩增空肠弯曲菌O∶19菌株cdtA、cdtB、cdtC基因,测序表明与标准株序列高度同源,已有文献证明cdtA、cdtB、cdtC基因在不同CJ菌株中高度保守,符合疫苗候选抗原的基本特征;预测出cdtA、cdtB、cdtC蛋白的B细胞抗原表位优势区,这将为CJ新型疫苗的设计和单克隆抗体的筛选等方面的研究提供重要信息。
- 刘卫卫白欣立李震中张军峰李鑫赵子春李春岩
- 关键词：诱导分化空肠弯曲菌B细胞抗原表位
- 空肠弯曲菌cdtA及其高抗原肽段的原核重组质粒的构建和表达
- 2010年
- 目的空肠弯曲菌细胞扩张毒素cdtA及其高抗原肽段蛋白人工表达。方法使用PCR方法获得cdtA、cdtA1、cdtA2编码的基因,经确证后将该基因克隆到谷胱甘肽转移酶融合表达载体(pGEX-5x-1)中,构建了pGEX-5X-1-cdtA、cdtA1、cdtA2表达质粒,在大肠杆菌BL21中获得了相应表达。结果 pGEX-cdtA、cdtA1、cdtA2重组菌株具有明显的表达带,其分子量与预期的结果相同。结论成功构建了cdtA及其高抗原肽段的原核表达重组质粒,并表达出相应蛋白为其免疫原性分析及研制疫苗奠定了基础。
- 刘卫卫白欣立李震中张军峰李鑫赵子春李春岩
- 关键词：空肠弯曲菌重组质粒
