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国家重点基础研究发展计划(2006CB504300)

作品数:8 被引量:28H指数:3
相关作者:王月宾尹华韩红霞唐红李雪梅更多>>
相关机构:中国科学院四川大学华西医院新加坡国立大学更多>>
发文基金:国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域:医药卫生农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生
  • 1篇生物学
  • 1篇农业科学

主题

  • 5篇病毒
  • 2篇细胞
  • 2篇肝炎
  • 2篇肝炎病毒
  • 1篇蛋白
  • 1篇炎症
  • 1篇炎症因子
  • 1篇乙肝
  • 1篇乙肝病毒
  • 1篇乙型
  • 1篇乙型肝炎
  • 1篇乙型肝炎病毒
  • 1篇抑制剂
  • 1篇疫病
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇制剂
  • 1篇同源
  • 1篇同源重组
  • 1篇禽流感

机构

  • 2篇四川大学华西...
  • 2篇中国科学院
  • 1篇南开大学
  • 1篇清华大学
  • 1篇四川大学
  • 1篇武汉大学
  • 1篇新加坡国立大...
  • 1篇中国医学科学...

作者

  • 2篇唐红
  • 2篇韩红霞
  • 2篇尹华
  • 2篇王月宾
  • 1篇郑永唐
  • 1篇娄志勇
  • 1篇王睿睿
  • 1篇郭佳
  • 1篇徐国东
  • 1篇葛若雯
  • 1篇饶子和
  • 1篇刘凤君
  • 1篇徐维明
  • 1篇李红
  • 1篇周陶友
  • 1篇李健峰
  • 1篇郑从义
  • 1篇侯全玲
  • 1篇贺晓静
  • 1篇鄢然

传媒

  • 2篇四川医学
  • 2篇Virolo...
  • 1篇中国兽医杂志
  • 1篇中国药理学通...
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇中国基础科学

年份

  • 1篇2014
  • 1篇2009
  • 4篇2008
  • 2篇2007
8 条 记 录,以下是 1-8
排序方式:
肝细胞核因子3β调控小鼠体内HBV转录和复制的实验研究
2008年
目的应用复制型HBV小鼠模型观察肝细胞核因子3β(HNF3β)对小鼠体内HBV转录和复制的调控作用。方法通过尾静脉高压注射法将复制型HBV重组质粒pHBV4.1和大鼠HNF3β表达质粒pCMVHNF3β导入小鼠体内,用Northern吸印杂交检测小鼠肝组织中HBV3.5kb、2.4/2.1kb、0.7kb mRNA的转录情况,Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果经小鼠尾静脉高压注射法体内转染质粒pHBV4.1后,小鼠肝组织中检测到HBV3.5kb、2.4/2.1kb mRNA转录信号和HBV DNA复制中间体信号;与共转染pHBV4.1和空载质粒pCMVpA对照组相比,共转染pHBV4.1和pCMVHNF3β使HNF3β过量表达,明显降低了小鼠体内HBV RNA转录和DNA复制水平。结论肝富集转录因子HNF3β对小鼠体内HBV转录和复制具有抑制作用,有可能成为今后抗HBV生物治疗新的靶点。
韩红霞刘凤君侯全玲王月宾尹华崔尧丽唐红
关键词:乙型肝炎病毒转录
复制型HBV重组腺病毒的制备被引量:2
2008年
目的 通过细菌体内同源重组方法,构建含1.3拷贝HBV DNA片段(HBV4.1)的HBV复制型重组腺病毒。方法从质粒pTh—HBV4.1上获取HBV4.1片段,插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack—CMV中,构建含HBV4.1的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/HBV4.1。然后在大肠杆菌BJ5183内与pAdEasy—1进行同源重组。形成重组腺病毒质粒pAd—GFP/HBV4.1,经脂质体2000转染HEK293细胞进行包装和扩增,获得腺病毒Ad-GFP/HBV4.1。通过荧光显微镜下观察GFP绿色荧光蛋白的表达,检测腺病毒滴度和感染效率;采用PCR法检测腺病毒DNA上有无HBV基因组存在。结果经酶切鉴定确认含HBV穿梭质粒pAdTrack—CMV/HBV4.1扣重组腺病毒基因组质粒pad—GFP/HBV4.1构建成功;GFP荧光检测提示重组腺病毒Ad-GFP/HBV4.1已成功包装;PCR扩增表明重组腺病毒内携带有HBVDNA片段。在HEK293细胞中获得的病毒滴度可达(4.2—4.8)×10^7 efu/ml;当MOI为100时,感染HEK293细胞的效率〉90%。结论成功构建了携带1.3拷贝HBV基因组的重组腺病毒Ad-GFP/HBV4.1,为进一步建立高水平HBV复制型细胞和动物模型以用于HBV生物学特性的研究奠定了基础。
尹华周陶友李红王月宾韩红霞唐红
关键词:腺病毒乙肝病毒同源重组
丙型肝炎病毒功能基因在CHO细胞中的表达研究
2007年
丙型肝炎病毒(HCV)与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点。近期研究已经证实HCV的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响。为了进一步研究究竟是HCV中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用,构建了分别含有HCV Core、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B基因的真核表达质粒,分别转入宿主细胞CHO-K1中,在G418的选择压力下筛选获得稳定表达HCV单个蛋白的细胞系(10株)。PCR和RT-PCR可分别从稳定细胞系中检测到相应的HCV基因的DNA和mRNA,冻存和复苏不会造成HCV基因的丢失。Western-blot检测到稳定细胞系中表达E1,E2和NS5B蛋白,说明HCV基因在CHO-K1中已经形成稳定表达。薄层层析(TLC)结果显示,含有不同HCV基因的稳定传代细胞系中,UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)活性均发生了不同程度的变化,其中E2和p7的表达使胞内UGCG的活性提高了约1倍,NS2和NS5A则使UGCG的酶活提高了约0.6倍。该稳定细胞系的建立为研究病毒与宿主因子的相互作用及药物筛选奠定了基础。
郭佳鄢然徐国东郑从义
关键词:丙型肝炎病毒真核表达稳定细胞系
HIV-1核衣壳蛋白NCp7抑制剂体外筛选方法的建立被引量:1
2008年
目的表达HIV-1核衣壳蛋白(nucleocapside proteinp7,NCp7),并建立抑制剂筛选方法。方法从pBRU2/ADP202质粒经PCR得到HIV-1NCp7编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1NCp7表达载体。阳性克隆转染E.coliBL21DE3,以IPTG诱导,细胞裂解液经Q SepharoseH.P和SP Sepharose H.P纯化后纯度达到90%以上。将具有锌离子逐出活性的H2O2和2,2′-联硫基二吡啶(2,2′-di-thiodipyridine,AT-2)与NCp7作用,用锌离子特异的荧光染料检测。用该方法检测KIZ-CM系列化合物。结果可以检测H2O2和AT-2的锌离子逐出活性,经该方法筛选,KIZ-CM10,18,19等化合物具有一定的锌离子逐出活性。结论在国内首次建立了HIV-1NCp7锌离子逐出方法,该方法可以用于NCp7抑制剂的筛选。
王云华王睿睿杨柳萌李健峰徐维明郑永唐
关键词:HIV-1纯化抑制剂
Establishment of AIDS Animal Model with SIVmac239 Infected Chinese Rhesus Monkey被引量:3
2007年
In the present research,two Chinese rhesus monkeys were inoculated intravenously with 5000 TCID50 of SIVmac239. The changes in the numbers of CD4+ T lymphocyte in peripheral blood,plasma viral loads,proviral DNA and humoral antibodies against virus were periodically monitored during 121 days. At the early stage of infection,proviral DNA had been detected in PBMCs,and infectious SIVmac239 virus had been isolated from PBMCs. At the same period,the numbers of CD4+ T lymphocytes were significantly decreased,and maintained at low level during the 121-day period of infection. Plasma viral loads reached the peak at week 2 post-inoculation and kept at a steady state subsequently. Moreover,antibodies against viral proteins were detected from plasma. All the results showed that the two Chinese rhesus monkeys had been infected with SIVmac239 successfully. This animal model can be applied for further AIDS researches.
Ming-hua LIShao-you LIHou-jun XIALu WANGYuan-yuan WANGGao-hong ZHANGYong-tang ZHENG
关键词:艾滋病艾滋病病毒恒河猴
流感病毒聚合酶PA亚基与PB1多肽复合体的精细三维结构被引量:2
2009年
近年来禽流感病毒疫情的发生给全球带来了重大威胁。对流感病毒蛋白,特别是流感病毒RNA聚合酶复合体的结构生物学研究对揭示病毒复制机制以及开展相关药物设计都具有重大意义。流感病毒RNA聚合酶是由PB1、PB2以及PA亚基组成的负责流感病毒的RNA合成以及维持病毒生命周期至关重要的分子机器。其中,PB1是该聚合酶的RNA合成亚基,PB2负责获取宿主mRNA用于病毒mRNA合成,而PA亚基功能则不清楚。本研究报道了来源于禽流感病毒RNA聚合酶PA亚基羧基端与PB1氨基端短肽复合体的三维晶体结构。该结构揭示了PA与PB1亚基相互作用方式,并分析了PA分子在RNA结合等方面的功能,对进一步研究PA功能以及开展针对聚合酶PA分子的药物设计具有十分重大的意义。
贺晓静周杰Mark Bartlam张荣光马建源娄志勇李雪梅李晶晶Andrzej Joachimiak曾宗浩葛若雯饶子和刘迎芳
关键词:禽流感PA
Coronavirus MHV-A59 infects the lung and causes severe pneumonia in C57BL/6 mice被引量:8
2014年
It remains challenging to develop animal models of lung infection and severe pneumonia by severe acute respiratory syndrome coronavirus(SARS-CoV) and Middle East respiratory syndrome cornavirus(MERS-Co V) without high level of containment. This inevitably hinders understanding of virushost interaction and development of appropriate countermeasures. Here we report that intranasal inoculation of sublethal doses of murine coronavirus mouse hepatitis virus A-59(MHV-A59), a hepatic and neuronal tropic coronavirus, can induce acute pneumonia and severe lung injuries in C57BL/6 mice. Inflammatory leukocyte infiltrations, hemorrhages and fibrosis of alveolar walls can be observed 2-11 days after MHV-A59 infection. This pathological manifestation is associated with dramatical elevation of tissue IP-10 and IFN-γ and moderate increase of TNF-α and IL-1β, but inability of anti-viral type I interferon response. These results suggest that intranasal infection of MHV-A59 would serve as a surrogate mouse model of acute respiratory distress syndrome by SARS-CoV and MERS-CoV infections.
Zhangsheng YangJun DuGang ChenJie ZhaoXuanming YangLishan SuGenhong ChengHong Tang
关键词:CORONAVIRUSPNEUMONIAINFLAMMATIONCYTOKINE
新城疫病毒(NDV)基质(M)蛋白在体外对炎症因子诱导的作用被引量:12
2008年
王蕾陈福勇郑世军索勋
关键词:新城疫病毒炎症因子蛋白基质家禽传染病
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