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国家自然科学基金(30901344): 作品数：10 被引量：51H指数：5; 相关作者：王芳王芳王鹏季荔王洪珍更多>>; 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院山东医学高等专科学校更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省实验诊断学重点实验室基金山东省医药卫生科技发展计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

TLRs介导调控Treg细胞功能的研究进展被引量：4: 2012年; Toll样受体（toll like receptors，TLRs）属模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR），是重要的天然免疫分子．被视为联系固有免疫和适应性免疫的重要桥梁。Treg细胞（regulatoryT cells，Tregs）是一群具有抑制功能的T细胞亚群，能够抑制效应性T细胞的增殖、激活以及B细胞产生免疫球蛋白等。近来有研究表明Ⅲ．Treg细胞上TLRs的激活可增强或削弱Treg细胞的免疫抑制功能．TLRs对Treg细胞功能的调节作用可能对感染、肿瘤免疫监视、移植排斥等过程产生影响。因此，了解Treg细胞和TLRs间的联系，可能有助于发现新的治疗靶目标和治疗方法。; 徐娟(综述)王芳; 关键词：TLRS 细胞功能 TREG细胞免疫抑制功能介导

卵巢癌患者CD4^+T细胞中调节性T细胞相关分子标志物的表达特点及临床意义被引量：7: 2015年; 目的:探讨卵巢癌患者外周血和肿瘤组织CD4+调节T细胞中性T细胞相关分子标志物(Foxp3、CD25、CD127、CTLA-4及GITR)的表达特点及其临床意义。方法 :流式细胞术检测31例卵巢癌患者,26例卵巢良性肿瘤患者和20例健康对照者的外周血,以及14例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织CD4+T细胞中Foxp3、CD25、CD127、CTLA-4及GITR的表达水平。结果:卵巢癌组织CD4+T细胞中的Foxp3、CD25、CTLA-4及GITR的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);CD127在卵巢癌组织CD4+T细胞中所占的比例显著低于卵巢良性肿瘤组织(P<0.01);卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中Foxp3、CD25、CTLA-4及GITR的表达水平均显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.01),CD127的表达水平显著低于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.01);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中Foxp3的表达水平显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中CD127的表达水平显著低于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05)。结论:卵巢癌患者外周血及肿瘤组织中CD4+Treg细胞的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组,Foxp3和CD127的表达水平与肿瘤分期有关,提示这两种标志物可作为判断卵巢癌疾病进展的重要指标。; 张淑平吴梦柯星娄鉴芳黄珮珺黄蕾孙瑞红潘世扬王芳; 关键词：卵巢肿瘤流式细胞术

Th17细胞的研究进展被引量：6: 2011年; 免疫是人体的一种生理功能,人体依靠这种功能识别＂自己＂和＂非己＂成分,从而破坏和排斥进入人体的抗原物质、人体本身所产生的损伤细胞、肿瘤细胞等,以维持人体的健康。人体的免疫反应可分为非特异性和特异性免疫,后者主要由T淋巴细胞和B淋巴细胞参与。CD4＋T细胞作为效应T细胞的重要成分,参与免疫应答的各个阶段,; 季荔王芳; 关键词：CD4阳性T淋巴细胞白细胞介素17 TH17细胞临床疾病

钙网蛋白融合HBsAg基因重组腺病毒新型载体疫苗的构建与鉴定: 2011年; 目的:构建表达钙网蛋白(calreticulin,CRT)与乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)融合基因重组腺病毒载体(Ad-CRT/HBsAg),为研发新型乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)治疗性疫苗奠定基础。方法:采用腺病毒表达系统(ViraPowerTM Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体。首先利用RT-PCR的方法扩增CRT基因,并进一步构建CRT与HBsAg基因融合重组的pJW4303表达载体,在构建过程中给融合基因加上特定的CACC接头,再克隆入载体pEN-TR/D-TOPO以获得入门克隆,经PCR及测序鉴定正确后,用重组酶(LR ClonaseTMⅡEnzyme Mix)进行入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应,以获得表达克隆Ad-CRT/HBsAg。表达克隆鉴定后,用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒。经过扩增后,用极限稀释法检测病毒滴度,用Western blot法检测Ad-CRT/HBsAg载体是否能正确表达目的蛋白。结果:构建的含有CRT/HBsAg融合基因的腺病毒表达克隆,经PCR和测序鉴定构建正确。重组表达克隆转染HEK293A细胞并扩增,获得的病毒滴度为2.68×1011 pfu/ml,且这个重组病毒载体能正确表达CRT/HBsAg融合蛋白。结论:成功构建了CRT/HBsAg融合基因重组腺病毒载体(rAd-CRT/HBsAg),为此重组载体用于治疗HBV慢性感染以及HBsAg阳性肝癌奠定基础。; 张兰春王宝红王芳马春玲; 关键词：钙网蛋白乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒表面抗原腺病毒表达载体治疗性疫苗

非小细胞肺癌患者血清中SP70的检测及其临床意义被引量：24: 2012年; 目的评价血清中单抗NJ001相关靶抗原SP70能否成为检测非小细胞肺癌（NSCLC）的新型血清肿瘤标志物。方法以SPC—A1为抗原免疫新西兰兔，制备多抗。用多抗包被微孔板，NJ001为一抗，酶标记的羊抗鼠抗体为标记抗体，建立双抗体夹心ELISA法，并优化实验条件；采用该法对2007年10月至2011年6月从南京医科大学第一附属医院收集的经病理确诊的175例肺癌（包括80例肺腺癌、70例肺鳞癌和25例小细胞肺癌）、25例肺良性疾病患者和300名健康体检者血清中SP70进行检测；同时与电化学发光法检测癌胚抗原（CEA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和角质蛋白19片段（CYFRA21—1）进行比较；各组问阳性率比较采用，检验或Fisher确切概率法。结果肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌和肺良性疾病组的阳性率分别为68．8％、51．4％、16．0％和12．0％，均明显高于健康体检组（7．3％）；NSCLC组（肺腺癌和肺鳞癌）阳性率高于小细胞肺癌组（60．7％vs16．0％，x2=17．23，P〈0．05）和肺良性疾病组（60．7％vs12．0％，r=20．41，P〈0．05）；68例有分期资料的NSCLC患者中，早期组（x2=30）的阳性率达76．7％。另外，ELISA法对NSCLC患者SP70总检出率高于CEA、NSE和CYFRA21—1（32．7％、18．0％和37．3％），差异有统计学意义（60．7％vs32．7％，χ^2=23．63，P〈0．05；60．7％vs18．0％,χ^2=57．22，P〈0．05；60．7％vs37．3％，χ^2=16．34，P〈0．05）。结论NSCLC患者血清中SP70阳性检出率较高，SP70可能是潜在的用于诊断NSCLC的血清肿瘤标志物。; 彭婪潘世扬王芳黄佩珺徐婷黄蕾张丽霞黎青张红梅徐建秦雪君韩月徐娟朱善军; 关键词：肺肿瘤 HSP70热休克蛋白质类酶联免疫吸附测定

良恶性胸腔积液鉴别中SP70检测的临床意义被引量：13: 2012年; 目的探讨SP70抗原的检测对鉴别癌性胸腔积液和非癌性胸腔积液的诊断价值。方法采用病例对照研究。收集2011年7月至2012年2月经临床确诊的肺癌患者胸腔积液108例和非癌性胸腔积液122例，采用双抗体夹心ELISA法对胸腔积液中SP70抗原进行检测；同时与电化学发光法检测CEA、CYFRA21—1和NSE的结果进行比较；采用直接免疫荧光法对胸腔积液脱落细胞上的SP70抗原进行检测，并与HE染色法的脱落细胞学检测结果进行比较，各组问阳性率比较采用矿检验或Fisher确切概率法。结果癌性胸腔积液患者中SP70、CEA、CYFRA21—1、NSE的阳性率分别为72．2％、58．3％、52．8％和30．6％，显著高于非癌性胸腔积液组（9．8％、13．1％、23．O％和19．7％），SP70、CEA、CYFRA21—1、NSE的特异度分别为90．2％、86．9％、77．0％和80．3％；非小细胞肺癌组的总阳性率显著高于小细胞肺癌组的阳性率（74．3％〉0．0％），差异有统计学意义（P=0．02〈0．05），癌性胸腔积液患者中SP70的阳性符合率高于传统脱落细胞学HE染色的阳性符合率（72．2％〉47．2％），差异有统计学意义（x2=14．03，P〈0．05）。结论测定胸腔积液中及脱落细胞上的SP70抗原，能提高癌性胸腔积液诊断的敏感度和特异度。; 杨瑞霞潘世扬王芳徐建黄珮珺张燕徐娟韩月朱善军曹艳王鹏许雨乔娄鉴芳史新惠; 关键词：酶联免疫吸附测定荧光免疫测定胸腔积液

虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒表达载体的构建与鉴定: 2010年; 目的:构建表达虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为腺病毒中和抗体流行水平的定量检测奠定基础。方法:采用腺病毒表达系统(ViraPower Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体。首先利用PCR的方法扩增虫荧光色素酶基因使其具备特定的CACC接头,以连接、转化、提取质粒等方法克隆入载体pENTR/D-TOPO以获得入门克隆,经PCR及测序鉴定正确后,用重组酶(LR ClonaseTM Ⅱ Enzyme Mix)进行入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应,以获得表达克隆rAd-Luci。表达克隆鉴定后,用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒。经过扩增后,用极限稀释法检测病毒滴度,用Western blot法检测rAd-Luci载体是否能正确表达虫荧光色素酶蛋白,并检测此酶蛋白的功能活性。结果:用PCR的方法扩增到具有CACC接头的虫荧光色素酶基因,其重组入门和腺病毒表达克隆经PCR和测序鉴定构建正确,重组表达克隆转染HEK293A细胞并扩增后获得的病毒滴度为1.8×1011 pfu/ml,此病毒能正确表达虫荧光色素酶蛋白,并且具有较强的功能活性。结论:成功构建了虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为此重组载体用于腺病毒中和抗体的定量检测奠定基础。; 马春玲王芳刘琳琳王法权; 关键词：腺病毒表达载体中和抗体

microRNA与Toll样受体在NF-κB信号通路中的相互调控作用被引量：3: 2013年; Toll样受体（toll．1ikereceptors，TLRs）是一种模式识别受体,参与慢性炎症反应及肿瘤微环境的形成。当其识别相应配体后,可以通过活化一系列信号转导分子激活TLRs通路，介导相应免疫反应。在此过程中，研究发现microRNA（miRNA）家族成员在TLRs通路中发挥了重要作用。一方面TLRs可以诱导miRNA的表达或上调其表达水平,同时miRNA也可调控TLRs通路。; 娄鉴芳王芳; 关键词：NF-ΚB信号通路 TOLL样受体 MICRORNA 模式识别受体 TLRS 慢性炎症反应

Human herpesvirus 6A induces apoptosis of HSB-2 cellsvia a mitochondrion-related caspase pathway被引量：1: 2010年; Apoptosis plays an important role in the pathogenesis of viral infections.In this study,we investigated the cell death processes during productive HHV-6A infection and the underlying mechanisms.Annexin V-PI staining and electron microscopy indicated that HHV-6A is a strong inducer of apoptosis.HHV-6A infection decreased mitochondrial transmembrane potential and led to morphological changes of mitochondria.The cell death was associated with activation of caspase-3 and cleavage of DNA repair enzyme poly (ADP-ribose) polymerase,which is known to be an important substrate for activated caspase-3.Caspase-9 was activated significantly in HHV-6A-infected cells,whereas caspase-8 was not activated obviously.Moreover,HHV-6A infection upregulated Bax and downregulated Bcl-2.This is the first demonstration of mitochondrion-mediated,caspase-dependent apoptosis in HHV-6A-infected cells.; Lingyun LiJing ChiFeng ZhouDandan GuoFang WangGenyan LiuChun ZhangKun Yao; 关键词：疱疹病毒 CASPASE

Th1及Th2型细胞的变化与子宫内膜异位症相关性研究被引量：5: 2011年; 目的从免疫学角度探讨Th1及Th2型细胞的变化与子宫内膜异位症（EM）的关系。方法应用流式细胞技术检测40例EM及40例对照组外周血中Th1/Th2型细胞的百分比。结果 EM组外周血中,Th1型细胞较对照组显著降低（P〈0.05）;而Th2型细胞较对照组显著升高（P〈0.05）;EM组Ⅲ~Ⅳ期患者外周血中,Th2型细胞明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者（P〈0.05）。结论 EM患者外周血中Th1型细胞明显减少,Th2型细胞明显增多,呈Th2优势漂移的现象,并且与疾病的分期相关,Th1/Th2型细胞模式失衡在EM的发病机制及疾病进展中可能具有重要的作用。; 王洪珍王芳马春玲; 关键词：子宫内膜异位症 TH1细胞 TH2细胞流式细胞术

国家自然科学基金(30901344)

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