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2a/Ⅲ型丙型肝炎病毒基因组非结构4区全长序列的扩增、克隆及分析: 2002年; 目的　获得 2a/Ⅲ型丙型肝炎病毒 (HCV)基因组全长非结构 (NS) 4区克隆并作序列分析。方法　用限制性片段长度多态性分析 (RFLP)基因分型方法筛选出 2a/Ⅲ型HCV一株。为了获得该毒株全长NS4区基因序列 ,依据代表株序列的NS3区之 3′末端及NS5区之 5′末端相对保守区域合成引物 ,以RT -nested -PCR方法扩增一段 1.3kb的片段cDNA ;将此片段插入pUC19质粒载体。结果　克隆了丙型肝炎基因组非结构NS4区全长基因 ,构建了pUC -NS4重组体 ,对重组体进行酶切鉴定 ,克隆的cDNA与预计的片段大小相符 ,并作序列测定。结论　获得全长NS4区基因克隆 ,经序列分析表明 ,与日本HC -J6有较高的同源性 (92 .1%)。; 陈勇封波丛旭魏来; 关键词：限制性片段长度多态性分析克隆克隆基因扩增 HCV

丙型肝炎病毒2a型E2区基因cDNA的变异分析: 2004年; 目的　了解丙型肝炎病毒 2a型基因组E2区序列的一级结构及变异特征 ,为进一步研究HCV包膜蛋白的生物学功能打下基础。方法　用逆转录套式多聚酶链反应 (RT -nPCR)法从 1例NANB型肝炎患者血清中扩增出一条约 110 0bp的片段 ,以限制性内切酶EcoRI、HindⅢ双酶切后连入pUC19载体中 ,转化感受态细胞 ,经限制性内切酶长度多态性分析 (RFLP)和PCR法证实为阳性克隆后 ,用全自动序列分析仪测序。结果　测得约 110 0bp的核苷酸序列 ,其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列分别与HCV - 1、HC -C2、HCV -BK、HC -J6、HC -J8相应序列作比较 ,显示分离株HCV在核苷酸水平上与以上分离株的同源性分别为 6 3.1%、6 4 .2 %、6 4 .1%、86 .9%、6 9 3% ,在氨基酸水平上的同源性分别为 6 9.6 %、70 .7%、6 9.6 %、86 .2 %、83.1%。结论　分离株 (HCV -JF)与HC-J6同属 2a型。; 封波魏来陈明韩方正; 关键词：丙型肝炎病毒基因变异

微孔板固相杂交法检测丙型肝炎病毒被引量：2: 2003年; 目的　寻找一种快速、准确、简便的丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV)RNA逆转录 -聚合酶链反应产物的检测方法。方法　所有标本均作逆转录 -套式聚合酶链反应 ,其产物分别以微孔板固相杂交法及聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测 ,对结果可疑及阴性者均以HCVAmplificationKIT对其血清再作扩增并检测 ,并以此为金标准进行比较。结果　 1 4 4份血清 (其中抗 -HCV阳性 64例 ) ,微孔板固相杂交法阳性 70例 ,灵敏度 97.1 8% ,特异度 98.63 % ;聚丙烯酰胺凝胶电泳法阳性 61例 ,灵敏度 81 .69% ,特异度 95 .89%。取同一份产物倍比稀释后再作检测 ,前者可检测出 2 -9稀释度 ,后者检测出 2 -7稀释度。结论　微孔板固相杂交法检测丙型肝炎病毒快速、准确、简便 ,并且可定量 ,尤其适用于大批量标本的检测。; 封波张言超王凤水李秀华杜绍财魏来; 关键词：丙型肝炎病毒聚合酶链反应

江苏淮阴地区单采浆献血员丙型肝炎病毒分型及发病情况被引量：3: 2001年; 目的　了解江苏淮阴地区单采浆献血员丙型肝炎病毒 (HCV)感染后发病情况和病毒基因分型。方法应用ELISA法及RT -nestedPCR法检测 6 7例单采浆献血员感染HCV后抗 -HCV和HCVRNA ,并用限制性片段长度多态性分析法 (RFLP)进行病毒基因分型。结果　 6 7例单采浆献血员 ,在感染HCV后 ,急性丙型肝炎发病率为 17.9% (12 / 6 7) ,最终发展成慢性丙型肝炎者 49.3% (33/ 6 7) ,HCV慢性持续感染 6 8.8% (4 6 / 6 7)。HCV基因分型 :1b/Ⅱ型占 95 .5 % (6 4/ 6 7) ,2a/Ⅲ型 1.5 % (1/ 6 7) ,1b/ 2a混合型 3.0 % (2 / 6 7)。结论　淮阴地区单采浆献血员HCV感染以 1b/Ⅱ型为优势株。; 陈勇魏来封波李秀华; 关键词：丙型肝炎病毒 PCR

不同人群丙型肝炎病毒基因分型: 2001年; 目的　研究不同人群丙型肝炎病毒的基因分型。方法　对 141例抗HCV(+)、6 0例抗HCV(- )及 2 8例正常献血员的共 132份HCV -RNA阳性血清 ,运用限制性片段长度多态性分析 (RFLP)法作酶切分型。结果　 3组人群不同基因型检出率分别是 1b Ⅱ型 87.18%、10 0 %、10 0 % ;2a Ⅲ型 1.71%、0、0 ;两者混合型 (1b 2a型 )11 11%、0、0。对抗HCV(+)血清 ,分为ALT正常组和异常组 ,2组人群不同基因型检出率分别是 1b Ⅱ型93 33%、83.33% ;2a Ⅲ型 0、2 .78% ;两者混合型 7.14%、13.89%。结论　我国不同人群中HCV感染者均以HCV1b Ⅱ型为主 ,今后应以HCV 1b Ⅱ型为重点 ,加强HCV的诊断。; 封波魏来吴文漪张言超陈勇; 关键词：肝炎病毒丙型基因型

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