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温州市科技计划项目(Y2006A017): 作品数：9 被引量：25H指数：4; 相关作者：黄晓燕杨德业来丹丹张怀勤施翔翔更多>>; 相关机构：温州医学院附属第一医院浙江中医药大学温州医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金温州市科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

Pax-8基因敲除小鼠心脏中FGF-6基因表达上调: 目的探讨先天性心脏病相关基因-转录因子Pax-8的下游基因。方法分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子(Pax-8KO)和杂合子(Pax-8 KO)的心脏总RNA,利用含31,802个小鼠基因的基因芯片检测两组小鼠基因表达...; 杨德业黄晓燕高瞻来丹丹褚茂平施翔翔周希张怀勤; 文献传递

Pax-8在ALK3基因敲除小鼠心脏发育不同阶段中的表达: 目的研究胚胎发育不同时间心脏特异性骨形态形成蛋白受体IA(BMPR1 A,又名AL K3)基因敲除小鼠心肌组织中的Pax-8的mRNA表达水平,提示Pax-8基因与ALK3基因的关系及其在心脏发育中的作用。方法实验组为心...; 杨德业周希黄晓燕褚茂平高瞻戴晓春; 文献传递

Pax-8基因敲除小鼠心脏中Bcl2l14基因表达上调被引量：3: 2010年; 目的:寻找先天性心脏病相关基因-转录因子Pax-8的下游基因。方法:分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子(Pax-8 KO-/-)和杂合子(Pax-8 KO+/-)的心脏总RNA,利用含31802个小鼠基因的基因芯片检测两组小鼠基因表达水平,找出差异表达的基因,并经半定量RT-PCR和荧光实时定量PCR技术初步筛选出转录因子Pax-8的下游基因。结果:基因芯片检测发现,Pax-8 KO-/-组与Pax-8 KO+/-相比有25个基因表达下调,另有17个基因表达上调,差异基因涉及细胞周期及信号转导的调节因子,直接参与代谢的酶,以及核转录因子等。用半定量RT-PCR验证发现:Bcl2-like 14(Bcl2l14)基因在Pax-8 KO-/-组上调。定量RT-PCR亦证实在Pax-8KO-/-组Bcl2l14基因的表达水平较Pax-8 KO+/-组及Pax-8 KO+/+(野生型)组分别上调2.07倍和2.23倍(P<0.01)。结论:Bcl2l14基因为转录因子Pax-8的下游基因,可能在先天性心脏病室间隔缺损的发病机制中发挥重要作用。; 高瞻来丹丹黄晓燕褚茂平施翔翔张怀勤杨德业; 关键词：BOX GENE 室间隔缺损

Pax-8基因在大鼠心肌细胞凋亡中的作用被引量：10: 2009年; 目的用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,观察其对心肌细胞凋亡和增殖的影响。方法将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)组,非特异性siRNA(NCsiRNA)组和空白对照组。前两组分别给予相应siRNA(5μl)和Lipofectamine 2000(5μl)配制成的siRNA-脂质体复合物溶液,空白对照组给予等量的细胞培养基。采用RT-PCR和Western blotting测定Pax-8的mRNA和蛋白质表达,荧光光度法检测半胱天冬酶(Caspase)-3活性以反映细胞凋亡,CCK-8法检验细胞的增殖抑制率。结果与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8 siRNA组的Pax-8 mRNA表达分别下调60.30%(P<0.05)和63.09%(P<0.05),蛋白表达分别下调50.38%(P<0.05)和54.17%(P<0.05),而NCsiRNA组与空白对照组间无显著差异(P>0.05)。Pax-8 siRNA组的Caspase-3活性较NCsiRNA组和空白对照组明显升高(P<0.01),而后两者间无显著差异(P>0.05)。Pax-8 siRNA组的细胞增殖抑制率明显高于NCsiRNA组(P<0.01)。结论Pax-8 siRNA能选择性下调心肌细胞中Pax-8的表达,并促进细胞凋亡、抑制细胞增殖。; 高瞻来丹丹张敏周希黄芳黄晓燕张怀勤杨德业; 关键词：肌细胞心脏细胞凋亡 RNA干扰室间隔缺损

Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究被引量：6: 2011年; 目的:构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1(+),并将重组质粒转染至心肌细胞系H9c2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:酶切pCMV sport6-Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Pax-8。限制性酶切鉴定和DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒经脂质体法转染至大鼠心肌细胞系H9c2细胞中,RT-PCR法及Western blotting法分别检测转染后Pax-8 mRNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖;以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡,同时进行Pax-8质粒转染,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,West-ern blotting法检测活化caspase-3的表达。结果:成功构建了大鼠pcDNA3.1(+)-Pax-8真核表达载体,且证实转染后心肌细胞的Pax-8 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05)。转染Pax-8基因能提高心肌细胞的增殖能力(P<0.05),明显抑制血清饥饿引起的细胞凋亡(P<0.01),同时下调活化caspase-3的表达(P<0.01)。结论:通过基因重组技术成功使得Pax-8基因在心肌细胞中过表达。Pax-8基因可能通过促进心肌细胞增殖及抑制心肌细胞凋亡从而参与胚胎心脏发育的过程。; 周希黄晓燕陈长曦陈必成龚永生杨德业; 关键词：真核表达细胞凋亡细胞增殖

Pax-8基因在胚胎心脏发育中的作用被引量：11: 2009年; 目的:在心脏特异的骨形态形成蛋白受体IA(the bone morphogenetic protein receptor IA,ALK3)基因敲除小鼠模型中,纯合子的心脏特异ALK3基因敲除的小鼠死于胚胎中期,同时伴有室间隔缺损。用基因芯片(microarray)法筛选了ALK3下游基因,并获得下游候选基因(转录因子Pax-8)。为了进一步明确Pax-8基因在胚胎心脏发育中的角色,Pax-8基因在小鼠被系统敲除。方法:运用实时荧光定量RT-PCR法检测Pax-8基因在小鼠胚胎中的表达情况。运用原位杂交法显示Pax-8基因在小鼠胚胎心脏中的表达部位。TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,电镜下观察Pax-8基因敲除的小鼠心脏组织发育的病理学异常。结果:正常胚胎小鼠9.5、10.5、11.5、12.5以及13.5d的Pax-8基因的表达水平以10.5d表达最高。胚胎切片的原位杂交显示:转录因子Pax-8表达在13.5d的α-MHCCre+/-,ALK3F/+小鼠整个心脏中。Pax-8基因敲除的小鼠心脏表现出形态改变(心脏呈球形,左心室壁肥厚,室间隔增厚,左室乳头肌肥大),左心室壁和室间隔心肌组织细胞凋亡率明显增高,同时线粒体体积较对照组明显缩小并且数量增多。结论:Pax-8基因是心脏较特异的参与心脏正常发育的ALK3下游基因,并与心肌细胞凋亡有关。; 章佳颖来丹丹褚茂平王赛斌施翔翔倪秋明黄晓燕张怀勤杨德业; 关键词：心脏缺损先天性基因细胞凋亡

Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能研究: 目的构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1,并将重组质粒转染至心肌细胞系H9C2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法酶切pCMV sport6ax-8获得大鼠Pax-...; 杨德业周希黄晓燕陈长曦陈必成龚永生; 文献传递

Pax-8基因敲除小鼠心脏中Fgf-6基因表达的上调及其意义被引量：2: 2010年; 目的探讨先天性心脏病相关基因转录因子Pax-8的下游基因以及Pax-8基因下调引起心脏形态改变的机制。方法分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子（Pax-8 KO^-/-）和杂合子（Pax-8 KO^4/-）的心脏总RNA，利用含31802个小鼠基因的基因芯片检测Pax-8 KO^-/-和Pax-8 KO^-/-小鼠的基因表达水平，找出差异表达的基因，并经荧光实时定量PCR技术初步筛选出转录因子Pax-8的下游基因。结果基因芯片检测发现，Pax-8 KO^-/-小鼠较Pax-8 KO^＋／-小鼠有25个基因表达下调，另有17个基因表达上调，差异基因涉及细胞周期及信号转导的调节因子、直接参与代谢的酶以及核转录因子等。定量RT-PCR证实，Pax-8 KO^-/-小鼠Fgf-6基因的表达水平较Pax-8 KO^＋/-小鼠及野生型（Pax-8^＋/＋）小鼠分别上调1.13倍和1．67倍，差异均较显著（P〈0.01）。结论Fgf-6基因是转录因子Pax-8的下游基因，可能在心脏的发育过程中发挥着重要作用。; 黄晓燕高瞻来丹丹禇茂平施翔翔周希张杯勤杨德业; 关键词：基因室间隔缺损

Pax-8基因敲除小鼠心肌细胞中差异表达的基因的研究: 2014年; 目的研究Pax-8基因敲除小鼠心肌细胞中差异表达的基因。方法利用基因芯片技术初筛在Pax-8基因敲除纯合子小鼠(Pax-8^(-/-))和杂合子小鼠(Pax-8^(+/-))心肌组织中差异表达的基因,运用半定量RT-PCR检验初筛结果 ,并运用荧光实时定量PCR确定初筛所得的差异表达的基因在Pax-8基因敲除纯合子、杂合子以及野生型小鼠(Pax-8^(+/+))心肌组织中的表达情况。结果基因Bcl2114、Fgf-6、Lck、Nr4a1以及Tcf7在Pax-8^(-/-)中的表达分别是其在Pax-8^(+/-)中表达的2.07±0.08、1.13±0.01、1.30±0.01、1.53±0.08及0.75±0.03倍(均P<0.01)。是在Pax-8^(+/+)中表达的2.23±0.16、1.67±0.05、1.77±0.21、4.8±0.35及0.9±0.04倍(P<0.01或0.05)。结论 Bcl2l14、Fgf-6、Lck、Nr4a1以及Tcf7上述5个基因在Pax-8基因敲除的心肌细胞中差异表达,参与Pax-8基因敲除小鼠的一系列心脏病理生理变化。; 高瞻施翔翔黄晓燕杨德业; 关键词：小鼠心肌细胞

microRNA-144表达对心肌细胞凋亡的影响: 目的探讨microRNA-144(miR-144)对心肌细胞凋亡的影响。方法运用转染的方法,在H9C2大鼠胚胎心肌细胞中高表达miR-144(miR-144组),实时定量PCR确定miR-144表达上调后,通过CCK-8...; 杨德业黄芳黄晓燕闫东升周希; 文献传递

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