吉林省科技厅发展计划项目(20061550)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：舒振波操海萍张桂珍更多>>
- 相关机构：吉林大学中日联谊医院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2007年
- 目的:构建人核心蛋白聚糖(decorin,DCN)真核表达载体,并在人结直肠癌HCT-8细胞中进行表达,以研究其抗肿瘤作用。方法:以克隆有完整人DCN基因片段的质粒pBluescript为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因片段。真核表达载体pcDNA3及PCR产物经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,转化大肠杆菌JM109,获得重组载体pcDNA-DEC,进行酶切鉴定和测序鉴定。脂质体lipofectamine介导重组载体转染HCT-8细胞,经G418(800μg/mL)筛选建立稳定转染细胞株。采用免疫组化法检测转染后HCT-8细胞中DCN的表达。MTT法检测HCT-8细胞的增殖活力。结果:PCR扩增获得与预期大小一致、约1 000 bp的特异性DNA片段;重组载体pcDNA-DEC经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中。免疫组化结果显示在稳定转染的HCT-8细胞株中可见DCN蛋白表达。细胞生长曲线显示转染DCN的HCT-8细胞生长较对照组减慢。结论:成功构建DCN真核表达载体pcDNA-DEC,并获得稳定转染的HCT-8细胞株,为进一步研究DCN抗肿瘤作用奠定基础。
- 操海萍舒振波张桂珍
- 关键词：基因扩增转染HCT-8细胞
