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北京地区志贺菌多位点可变数目串联重复序列分析分子分型研究被引量：4: 2012年; 目的筛选适用于志贺菌不同血清群分子分型的可变数目串联重复序列（VNrFR）位点，探索建立多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）分型方法，应用于菌株的分子特征分析。方法从2001—2009年北京地区痢疾监测中收集到的志贺菌菌株中，根据每年监测到的菌株数量和各种血清型别按15％的比例抽取，共选择180株菌，其中宋内志贺菌50株，福氏志贺菌130株。对18个VNTR位点进行多态性筛选后，保留10个VNTR位点（sh1—sh10）构成3组多重PCR方法进行检测，利用毛细管片段分析对180株菌进行检测和MLVA分子分型。结果筛选的10个VNTR位点在180株志贺菌菌株中等位基因数目为2-11种，多态性分辨系数（D值）为0．158—0．766。在不同血清群间，10个位点的多态性不同，其中s怕在福氏志贺菌、sh2和sh3在宋内志贺菌中均只有1种等位基因。180株志贺菌分成84种MLVA型别，口值为0．967（95％CI：0．956～0．978），其中13C株福氏志贺菌，分成63种型别，命名为TF001-TF063，TF001、TF002和TF005为主要型别，分别为17、16和15株；50株宋内志贺菌，分成21个型别，命名为TS001～TS021，TS002和TS001为主要型别，分别为14、7株。结论初步建立了志贺菌10个VNTR位点MLVA分型方法。通过MLVA分析，揭示志贺菌北京分离株分子型别比较分散，存在多克隆来源。; 曲梅张新黄瑛刘桂荣崔志刚李锡太贾蕾黄芳阚飙王全意; 关键词：志贺菌属细菌分型技术

2010年北京市感染性腹泻病原学监测分析被引量：72: 2011年; 目的了解2010年北京市感染性腹泻致病菌的病原构成、流行特征及主要致病菌的血清型分布。方法收集2010年4—12月期间北京监测哨点的肠道门诊腹泻病例的粪便或肛拭子标本2118份，采用分离培养、生化鉴定和血清分型的方法对其进行霍乱弧菌、副溶血性弧菌、沙门菌、志贺菌和肠致泻性大肠杆菌等多种肠道致病菌的检测，并对其时间分布、感染者年龄分布及血清型别构成进行分析。结果在2118份标本中，共分离到478株菌，检出率为22．6％。其中志贺菌位居阳性检出菌的首位，占40．8％（195／478），副溶血性弧菌、沙门菌和肠致泻性大肠杆菌分别占23．8％（114／478）、19．0％（91／478）和4．8％（23／478）。肠道致病菌的人群分布主要集中在20—39岁的成年组，其中30—39岁检出率最高，检出率为27．2％（92／338）。不同病原菌的人群年龄分布不同。病原菌的检出具有明显季节性，7—10月检出率较高，检出率分别为23．5％（114／486）、32．8％（176／536）、36．1％（90／249）、25．9％（29／112），其余月份检出率〈16．0％。检出的志贺菌以宋内志贺菌为优势血清型，占83．1％（162／195）届4溶血性弧菌以03：K6为优势血清型，占63．2％（72／114）。沙门菌以肠炎和鼠伤寒沙门菌为优势血清型，分别占13．2％（12／91）、12．1％（11／91）。肠致泻性大肠杆菌以肠致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌2种菌群为主，分别占69．6％（16／23）、30．4％（7／23）。结论北京市感染性腹泻主要致病菌依次为志贺菌、副溶血性弧菌和沙门菌等。其中志贺菌和沙门菌血清型构成发生了变迁。; 黄芳邓瑛曲梅刘桂荣刘园张新李洁严寒秋高志勇刘白薇李锡太黎新宇; 关键词：腹泻细菌感染哨点监测

北京地区与手足口病相关的非EV71、非CoxA16型肠道病毒的分子特征分析被引量：34: 2011年; 目的了解北京地区引起手足口病的非EV71、非CoxA16型肠道病毒的病原构成及优势型别VP4区遗传特征分析。方法收集2009年4月．12月检测为非EV71、非CoxA16型肠道病毒的手足口病患者咽拭子标本共45份。提取病毒核酸，用巢式RT-PCR法扩增病毒VP4区序列，对PCR阳性扩增产物进行测序，通过与GenBank收录的序列BLAST比对确定病毒型别；并对优势型别进行序列和进化分析。结果45例标本中共有32例标本巢式RT—PCR检测为阳性（71％），其中26份PCR产物测序成功，经BLAST比对后，26例标本病毒型别均得到确定：CoxA10为11例；CoxA5为5例；CoxA12和CoxA4各2例；CoxA2、CoxA6、CoxA9、CoxA16、CoxB5、Echo11各I例。CoxA10在型别确定的非EVT1、非CoxA16型肠道病毒中占44％，为优势肠道病毒型别。11株CoxA10在VP4区核苷酸序列同源性为82％-99％，氨基酸序列同源性为96％．100％。进化分析显示，10株北京株CoxA10与中国广东株在同一进化树分支上，1株与CoxA10日本株在同一分支上。结论北京地区引起手足口病的肠道病毒型别多样，CoxA10为非EV71、非CoxA16型肠道病毒中的优势型别，北京地区CoxA10株包括两个不同的基因型。; 王永全吉彦莉曲梅; 关键词：手足口病肠道病毒进化分析

北京市副溶血弧菌病原学和分子流行病学特征分析被引量：29: 2011年; 目的了解北京市副溶血弧菌腹泻病例分离株的病原学和分子流行病学特征。方法2010年4—12月从临床收集散发腹泻病例2118份粪便标本，进行副溶血弧菌的分离培养、生化鉴定。阳性菌株进行血清分型；采用药敏纸片法对12种抗生素进行敏感性检测；用实时荧光定量PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh；用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型。结果2118份粪便标本分离出副溶血弧菌114株，阳性分离率为5．38％。114株副溶血弧菌分属于23种血清型，其中03：K6为优势血清型，占63．16％。临床分离株对氨苄西林和庆大霉素产生耐药；对阿莫西林、头孢曲松、氯霉素、亚胺培南、萘啶酸和四环素等均具有较高敏感性。全部菌株tlh基因阳性；tdh存在于大部分菌株中，所占比例为93．86％；只有1株菌trh阳性。03：K6型菌株tdh基因阳性率（98．61％）明显高于非03：K6型菌株（85．71％）（P=0．0098）。114株副溶血弧菌分成54种PFGE型别，72株03：K6型菌株分成34种PFGE型别，带型分散，元明显聚集性。结论北京地区感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以03：K6型为主。毒力基因￡肌和tdh携带率高，且03：K6型临床分离株毒力更强。副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性。PFGE结果提示北京地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源。; 曲梅张新刘桂荣黄瑛李洁李锡太刘元严寒秋刘白微黎新宇王全意黄芳; 关键词：副溶血弧菌病原学分子分型

北京市奥运会期间肠道传染病病原学分析被引量：2: 2009年; 目的了解北京市奥运会期间肠道传染病病原谱构成情况，探讨大批量涉外人员的聚集可能对北京夏季腹泻病原谱构成的影响。方法采集涉奥场馆内腹泻病例，以及东城、西城、海淀和朝阳4个区大医院就诊的涉外人员腹泻病例的粪便或肛拭子标本45份，对其进行肠道多病原检测。肠道致病菌检测采用分离培养的方法，肠道病毒检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和逆转录聚合酶链扩增反应（RT—PCR）的方法。采用脉冲场凝胶电泳对肠炎沙门菌进行分子分型。结果45例腹泻病例26例病原学检测阳性，检出率为57．8％，其中24例检出肠道致病菌，主要为副溶血弧菌、沙门菌、肠致泻性大肠杆菌、空肠弯曲菌、志贺菌等；2例诺如病毒检测阳性。涉外人员腹泻病例检出10种病原体，国内腹泻病例检出5种病原体。对10株肠炎沙门菌脉冲场凝胶电泳（PFGE）的分型结果显示，不同来源菌株大片段带型比较集中，主要有5种型别。结论奥运会期间北京肠道传染病病原谱主要包括副溶血弧菌、沙门菌、肠致泻性大肠杆菌、空肠弯曲菌、志贺菌等；夏季腹泻也存在肠道病毒感染。; 黄芳曲梅刘园严寒秋高志勇窦相峰张海艳张震马建新郭晶; 关键词：腹泻肠道病毒感染

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北京市科技新星计划(2008828)

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