国家科技攻关计划(2002-BA711A11)
- 作品数：6 被引量：59H指数：3
- 相关作者：贺福初钱小红蔡耘张养军王京兰更多>>
- 相关机构：军事医学科学院北京协和医院国家人类基因组北方研究中心更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学理学石油与天然气工程医药卫生更多>>
- 差异蛋白质组学的研究进展被引量：32
- 2005年
- 差异蛋白质组是蛋白质组学研究的一个主要内容,其核心在于寻找某种特定因素引起样本之间蛋白质组的差异,揭示并验证蛋白质组在生理或病理过程中的变化。进一步对蛋白质组差异信息分析后,理论上可以推断造成这种变化的原因。因此,对于临床上肿瘤预诊、药物靶标寻找、细胞调控分子的鉴别等有着极大的实际意义。差异蛋白质组研究要求可靠性和可重复性。因此,对于样本处理要求较高,激光微切割技术和高丰度蛋白去除技术的应用优化了样本处理方法。目前差异蛋白质组的主要研究方法仍是2-DE分离和MS鉴定联合应用,基于2-DE的2-DDIGE方法弥补了2-DE的弱点,更适用于差异蛋白质组研究。除2-DE技术外的其他几种技术手段,如多维液相色谱分离技术、ICAT技术、蛋白芯片技术等差异蛋白质组学研究技术可以作为2-DE技术的补充,甚至或替代技术。
- 孙言伟姜颖贺福初
- 关键词：差异蛋白质组二维电泳液相色谱ICAT蛋白芯片
- 一种规模化蛋白质组分离和鉴定新方法研究及其应用被引量：3
- 2005年
- 建立了一种规模化的蛋白质组分离和鉴定新方法。通过对在生命发育过程中具有重要研究价值的人胎肝线粒体蛋白质组的分离分析,表明与毛细管液-质联用的不同分离方法的组合可以增大检测动态范围和分辨率。研究共鉴定了2977个肽段,归属于915种蛋白质。去除批次间冗余后,鉴定的蛋白质为477种,其中291种为唯一蛋白质,186种为蛋白质簇,144种蛋白质明确定位于人胎肝线粒体中。所鉴定蛋白质的分子量分布范围为7000 Da^330000 Da,pI值分布在4.0~11.89,克服了两维凝胶电泳在分子量和pH方面的歧视性问题。实验中发现的蛋白质簇以及确定一种蛋白质需要最少肽段数的问题还需要进一步研究。
- 张养军石蓉孟庆芳王京兰蔡耘朱云平贺福初钱小红
- 关键词：液-质联用蛋白质组学蛋白质组规模化肝线粒体
- Jo-1抗原的提取和纯化被引量：1
- 2007年
- 目的改进从兔胸腺中纯化能用于斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体、Jo-1抗原的方法。方法用PBS提取兔胸腺匀浆中的ENA,经丙酮沉淀上清中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,再经以特异性抗-Jo-1抗血清中的IgG为配体制备的亲和色谱柱对Jo-1抗原纯化,得到高比活的制品。结果100g兔胸腺可制得5～7g丙酮粉,其中的蛋白质含量为19%～24%。经亲和色谱分离的洗脱峰组分约可富集Jo-1抗原1900倍,抗原活性回收率为2.5%,并只对抗-Jo-1抗血清有特异性反应。虽然在SDS-PAGE上洗脱峰组分并非单一条带,但免疫印迹只发现50ku处有阳性条带。在含有MgCl2的水溶液中,高纯度的Jo-1抗原能长时间保持高活性。结论亲和色谱法可从兔胸腺中纯化出满足斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体要求的抗原,并有可能成为大量获取高纯度Jo-1抗原的方法。
- 朱材忠陈华邓学新唐福林姚志建
- 基于cICAT技术和LC-MALDI-TOF-TOF的蛋白定量方法的研究
- 定量蛋白质组学是蛋白质组学的重要组成部分之一, 目前,常采用的研究策略有两种:以稳定同位素代谢标记为代表的生物标记和以同位素亲和标签(isotope coded affinity tages,ICAT)为代表的化学标记。...
- 孟庆芳张养军钱小红
- 文献传递
- RPLC-SDS-PAGE整体蛋白质分离与纳升毛细管液相色谱-串联质谱联用技术的研究及应用被引量：3
- 2005年
- 采用RPLC-SDS-PAGE与纳升毛细管液相色谱-串联质谱联用技术对国际人类蛋白质组织(HUPO)提供的法国人肝脏蛋白质组表达谱的构建及其理化性质的统计分析,鉴定了2552条肽段,归结于402种蛋白质和240个蛋白质簇。蛋白质的pI分布范围为:4.29～11.57,分子量范围为:8,593～3,816,218Da,其中大于100kDa的蛋白质占到所鉴定蛋白质的10%,二者皆高于两维凝胶电泳的等电点和分子量范围(一般等电点3～10;分子量10～100kDa)。另外,蛋白质组中不同蛋白质的疏水性分布显示大部分蛋白质为可溶性蛋白质,其中疏水性蛋白质占15%(GRAVY>0的蛋白质)。实验结果表明该技术路线兼顾了反相色谱分离度高和SAS-PAGE兼容性好的优点,可用于复杂组织或细胞中蛋白质组表达谱的构建或比较蛋白质组的研究,为蛋白质组学的方法学研究奠定了基础。
- 张养军李文瑞孟庆芳邓新宇田英华王京兰杨兵蔡耘朱云平贺福初钱小红
- 关键词：毛细管液相色谱RPLC蛋白质分离可溶性蛋白质反相色谱
- 琼脂糖凝胶蛋白芯片片基的制备及应用被引量：4
- 2007年
- 建立了一种制备琼脂糖凝胶修饰玻片的方法。以乙肝表面抗原为检测指标,比较了琼脂糖凝胶片基和常规的醛基片基固定抗体后的检测灵敏度,发现琼脂糖凝胶修饰后可以明显增加检测的荧光强度,并在10ng/L～100μg/L之间具有良好的线性关系。在此片基同时固定了抗HBsAg和抗HBeAg抗体,并以牛血清白蛋白和生物素标记抗体为阴性和阳性对照点,采用夹心式免疫反应法检测乙肝病毒的两种抗原,取得良好效果。
- 刘志红何为韩旭许丹科
- 蛋白质糖基化分析方法及其在蛋白质组学中的应用被引量：16
- 2005年
- 作为一种普遍存在的翻译后修饰,糖基化对蛋白质的结构和功能有着重要影响。弄清糖基化发生发展的规律是理解蛋白质复杂多样的生物功能的一个重要前提。糖基化发生的特点决定了糖基化相关研究是对分析技术的一大挑战。作为蛋白质组学研究的重要组成部分,目前蛋白质糖基化研究的重点和难点主要集中于糖蛋白/糖肽的分离富集和糖蛋白的鉴定/糖基化位点的确定2个方面,相关技术已用于蛋白质组学水平的糖基化研究,但都还不够成熟。以生物质谱为核心、多学科交叉的蛋白质组学技术始终处于不断发展之中。基于糖基化发生规律的富集检测技术的发展、移动质子理论的提出及电子捕获裂解技术的应用必将极大地促进包括糖基化在内的翻译后修饰研究。蛋白质糖基化的研究有助于从基因组-蛋白组-糖组这样一个宏观的综合的水平观察分析生命现象,从而达到对生命现象更本质的认识。
- 代景泉蔡耘钱小红
- 关键词：蛋白质组学糖基化生物质谱裂解技术电子捕获蛋白组
- 用于蛋白质组学技术评价的标准蛋白质试验设计与样本制备
- 蛋白质组学方法的研究不仅是蛋白质组学研究的主要内容,而且是分析化学面临的巨大挑战。生物样品的复杂性和样本来上的源困难,一方面要求分析方法具有高的分离效率,另一方面要求检测方法具有高的灵敏度。由于目前无法对蛋白质混合物以及...
- 张养军应万涛刘科辉蔡耘朱云平贺福初钱小红
- 文献传递
- RPLC-SDS-PAGE整体蛋白质分离结合纳升毛细管液相色谱-串联质谱联用技术的研究及应用
- 质组学研究中技术平台的建立是目前分析化学面临的巨大挑战.其难点主要包括两个方面:一方面是复杂生物样品的分离;另一方面是生物质谱的检测灵敏度.而最关键的因素是蛋白质混合物和多肽混合物的高效分离.目前对整体蛋白质分离所采用的...
- 张养军钱小红李文瑞孟庆芳邓新宇田英华王京兰杨兵蔡耘贺福初
- 关键词：蛋白质组学反相液相色谱SDS-PAGE
