广东省卫生厅资助课题(B2006103)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 克隆并应用计算机软件分析小鼠LASS1基因启动子区的特征
- 2007年
- 目的:克隆并应用计算机分析小鼠LASS1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控奠定基础。方法:实验于2006-03/07在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。培养EC109细胞株,预测小鼠LASS1基因启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,构建重组质粒pGEM-T-501、pGEM-T-181、pGEM-T-26,并转化JM109感受态菌,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,酶切pGEM-T-501、181、26重组质粒及pGL3-Basic、pEGFP-1载体,制备插入片段和载体,构建重组表达质粒pGL3-501、pGL3-181和pGL3-26及pEGFP-501、pEGFP-181和pEGFP-26,转化JM109感受态菌。用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①在预测启动子区构建了3种荧光素酶报告基因表达体系及3种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系,分别为pGL3-501(-501bp～+106bp)、pGL3-181(-181bp～+106bp)、pGL3-26(+26～+106)、pEGFP-501、pEGFP-181和pEGFP-26。②pGL3-501表达载体与pGL3-181表达载体荧光素酶表达活性相近,pGL3-26表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,+26bp～+106bp无启动子活性。绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-501和pEGFP-181有明显的绿色荧光蛋白表达,pEGFP-26和空载体pEGFP-1无表达活性。结论:-181bp～+26bp区域含有小鼠LASS1基因转录所必需的基本启动子序列。其中2个SP1保守序列是小鼠LASS1基因启动子所必需的。
- 刘居理傅玉才许铭炎许锦阶
- 关键词：基因启动子小鼠
- 酵母双杂交诱饵蛋白LASS1融合表达质粒的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建酵母双杂交系统诱饵蛋白大鼠LASS1融合表达质粒,为进一步筛选大鼠脑神经元内与LASS1p相互作用的蛋白奠定基础。方法应用PCR方法获得大鼠LASS1基因2个片段,分别克隆入酵母双杂交系统诱饵蛋白质粒载体pGBKT7,转染酵母菌AH109并检测重组质粒的自激活现象及毒性。利用Western印迹检测重组质粒在AH109的表达情况。结果LASS1基因的PCR产物片段大小分别为Flag(111bp)、Slag(109bp);Western印迹结果表明2个重组质粒表达的蛋白均可以与抗c-Myc抗体在22kU处特异性反应;重组质粒转化酵母后无自激活作用。结论重组质粒pGBKT7-Flag、pGBKT7-Slag均能够在AH109内正确表达,可作为酵母双杂交系统诱饵蛋白使用。
- 刘居理傅玉才许铭炎许锦阶
- 关键词：酵母双杂交诱饵蛋白
- 阴道毛滴虫LAG1基因启动子区克隆及分析
- 2007年
- 本研究旨在克隆并分析阴道毛滴虫LAG1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控提供实验资料。预测启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,然后测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明在构建的6种荧光素酶报告基因表达体系及2种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系中,表达载体pGL3-455(-455^+55bp)、pGL3-417(-417^+55bp)、pGL3-280(-280^+55bp)、pGL3-202(-202^+55bp)、pGL3-81(-81^+55bp)的荧光素酶表达活性相近,均明显高于表达载体pGL3-47(-47^+55bp)荧光素酶表达活性,而pGL3-47表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,提示-47^+55bp区无启动子活性。绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-81(-81^+55bp)有明显的绿色荧光蛋白表达,而pEGFP-47(-47^+55bp)和空载体pEGFP-1未见表达。因此-81^-47bp区域含有阴道毛滴虫LAG1基因转录所必需的基本启动子序列。
- 刘居理许铭炎许锦阶傅玉才
- 关键词：阴道毛滴虫启动子细胞转染
- 限制饮食对老年早期大鼠生存状态和旷场行为的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究热量限制对老年早期大鼠的生存状态和行为学的影响。方法选用18月龄的健康雄性SD大鼠，根据进食情况分为2组，一组为CR组（n=29）给予对照组进食量60％的食量饲养，对照组为ad libitum（AL）组（n=31）自由进食，观察6个月，在此期间，记录大鼠的生存状况，每周测定大鼠体质量；6个月后，进行旷场实验观察自发活动能力。结果CR组给予60％的饮食控制后，体质量维持在低于对照组约20％左右（P〈0．01）。CR组的生存率为89．66％显著高于AL组67．74％（P=0．039）；在旷场实验中测定的CR组大鼠自发活动路程为（201．06±78．35）m，显著长于AL组[（147．38±36．89）m，P=0．021]，而CR组的自发活动速度为（78．10±34．38）mm／s也显著高于AL组[（48．96±14．87）mm／s，P=0．021]，并且CR组大鼠具有在中央区域的活动距离长（P=0．048）和在周边区域活动速度快（P=0．012）的特点。结论对老年早期的大鼠给予6个月的热量限制可以提高大鼠的生存率以及旷场活动能力，反映了大鼠的健康状况改善。
- 耿义群关计添傅玉才徐小虎
- 关键词：热量限制生存率
