国家自然科学基金(81072561)
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 相关作者：王旻张娟李海鑫何远齐海迪更多>>
- 相关机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗血管内皮生长因子受体2双价单链抗体的构建表达及其活性研究被引量：2
- 2011年
- 为了竞争性抑制血管内皮生长因子(VEGF)与其受体(VEGFR-2)的结合,构建表达了能够与VEGFR-2胞外3区(KDR3)特异结合的双价单链抗体(bivalent single-chain Fv,BsFv),并鉴定其生物活性。以KDR3特异结合单链抗体AK404(scFv AK404)基因为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)3连接两个scFv片段,将其克隆入原核表达载体pET22b,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物依次经过镍柱亲和层析纯化和透析复性;基于生物膜层表面干涉技术(Bio-LayerInterferometry,BLI)技术的体外亲和力监测实验和VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖实验鉴定表达产物与KDR结合的活性。酶切鉴定和DNA测序结果表明BsFv构建成功;SDS-PAGE显示37℃下1 mmol/L IPTG诱导细菌6 h获得包涵体,经镍柱亲和层析纯化和透析复性得到纯度为90%的BsFv;经Western blotting鉴定为目的蛋白;体外结合实验表明:BsFv特异性结合KDR胞外3区的亲合力约为单价抗体AK404的2倍;内皮细胞增殖抑制实验表明:BsFv可剂量依赖性地抑制HUVEC细胞增殖,且其抑制效果强于AK404。上述结果表明:BsFv在抗血管生成活性方面比其scFv具有明显优势,为进一步用于抗血管生成抗肿瘤治疗和肿瘤诊断奠定了基础。
- 丁笠王秀云齐海迪李海鑫周雅琼陈耀祖张娟王旻
- 关键词：血管内皮生长因子受体2
- 抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体的构建及其在CHO细胞中的稳定表达被引量：4
- 2011年
- 目前报道的靶向VEGF/VEGFR基因工程抗体多为不含Fc片段的Fabs、cFv等小分子抗体,该文旨在CHO-k细胞中表达抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体。将抗VEGFR-2 scFv(AK404)基因与含有人IgG1恒定区的真核表达载体pcDNA3.1-Fc连接,重组质粒测序后经脂质体介导转染CHO-k细胞,G418加压筛选获取稳定表达细胞株。RT-PCR、western blot检测目的基因的转录、表达。测序结果表明重组质粒构建成功,RT-PCR及western blot显示目的基因成功整合到宿主基因组并表达。最终获得可稳定表达抗VEGFR-2 scFv-Fc融合抗体的重组CHO-k细胞株,为融合抗体的大量制备和活性研究打下基础。
- 杨艳丽张娟何远李海鑫李桉栋王旻
- 关键词：VEGFR-2抗肿瘤血管生成
- 治疗性抗体药物研究与发展趋势被引量：9
- 2011年
- 单克隆抗体技术的问世,使研究和生产治疗性单抗药物成为现实。随着基因工程技术的发展,新型的重组抗体技术也随之而生。人们可以利用DNA重组技术对鼠源抗体进行人源化改造、构建合成或半合成抗体库及噬菌体抗体库,从中筛选获得人源抗体,甚至利用转基因小鼠直接获得人源抗体。抗体药物发展的趋势也从鼠源、人-鼠嵌合、人源化到全人源。近年获得批准的抗体药物以全人源为主。1996年至2008年间进入临床研究的人源化单克隆抗体中45%用于治疗肿瘤,28%个用于治疗免疫紊乱。抗体药物的发展进入研发、回报的良性循环,成了国际制药业争夺的焦点。文章就治疗性抗体发展的历史、现状、市场及未来展望作了简要综述。
- 王旻
- 关键词：治疗性抗体人源抗体
- 亲水突变法提高抗VEGFR2单链抗体的体外亲和力被引量：1
- 2012年
- 为了提高抗VEGFR2单链抗体AK404R的亲和力,本研究采用亲水突变法将AK404R的重链CDR3区进行突变,建立次级突变单链抗体库。利用噬菌体展示技术从次级突变库中筛选具有抗VEGFR2特异性、高亲和力抗体,获得的抗体突变株经大肠杆菌HB2151分泌表达,镍亲和色谱柱纯化,并采用竞争性ELISA法、生物信息学方法分别对其亲和力和结构进行了分析。本研究最终建立了6.4×105的次级突变单链抗体库,其中两株突变株的亲和力有明显提高,两株突变株经分离纯化得到电泳纯的蛋白,竞争性ELISA结果显示突变体WZ01和WZ02的亲和力比亲本提高了3倍;生物信息学方法分析突变体与抗原的作用面增大、契合紧密,这可能是亲和力提高的原因之一。研究结果表明,在重链CDR3区引入亲水性氨基酸构建抗体突变库,可有效提高scFv的亲和力。
- 齐海迪缪小牛张娟谷凯张斯维王旻
- 关键词：VEGFR2噬菌体展示单链抗体
- 抗肿瘤人源化抗体药物的研究进展被引量：2
- 2012年
- 随着单克隆抗体技术的发展,治疗性抗体药物逐渐占据全球市场,主要应用于肿瘤治疗、抗移植排斥、自身免疫性疾病的治疗等。抗体药物可根据人源化程度不同,分为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。本文着眼于目前治疗性抗体药物研究热点,聚焦于抗肿瘤人源化抗体药物,结合已上市热点抗肿瘤人源化抗体药物实例,从抗体人源化技术以及人源化抗体生产的角度来阐述目前研究状况。同时,立足于国内外抗肿瘤人源化抗体药物的现状,分析未来发展趋势。
- 何远张娟李致科王旻
