广西壮族自治区科技攻关计划(0537012)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 相关作者：黄日波杨登峰韦宇拓杜丽琴黄艳燕更多>>
- 相关机构：广西大学广西科学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程轻工技术与工程化学工程更多>>
- 基因工程菌Pseudomonas sp. B4的构建及其产邻苯二酚发酵条件的初步研究被引量：1
- 2008年
- 利用PCR技术以Pseudomonas sp.B3-1基因组DNA为模板,扩增出2.9kb编码苯甲酸双加氧酶基因簇benABC。将该基因簇连接于pLAFRJ载体,电转化至E.coliDH5α,再通过三亲本结合法导入野生菌株Pseudomonas sp.B3-1中,得到了一株邻苯二酚产量提高的基因工程菌,命名为Pseudomonas sp.B4,在相同发酵条件下,工程菌Pseudomonas sp.B4的邻苯二酚产量达到0.5mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp.B3-1提高了17.5%。对工程菌Pseudomonas sp.B4进行发酵条件优化表明,当苯甲酸钠浓度为6.0g/L,聚蛋白胨浓度为2.5g/L,温度为32℃以及pH值为6.0时,工程菌在200r/min旋转摇床发酵36小时后,邻苯二酚产量达到0.7mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp.B3-1提高了75%。
- 唐咸来熊建文梁璇申佩弘武波
- 关键词：假单胞菌苯甲酸钠邻苯二酚
- 绿色木霉葡聚糖内切酶cDNA基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达被引量：15
- 2007年
- 用L-山梨糖诱导绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711纤维素酶基因的转录,提取其总RNA反转录获得cDNA。PCR扩增葡聚糖内切酶(EG)和葡聚糖内切酶(EG)的cDNA基因,将其克隆到酵母载体中,构建产生纤维素酶的酿酒酵母工程菌。重组菌株能够识别EG和EG自身携带的信号肽而将表达产物分泌到胞外,故可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶(CMCase)活性的重组转化子。重组菌株表达的EG酶活在诱导70h时达到最高(为0.08U/ml),表达的EG酶活在诱导60h时达到最高(为0.03U/ml)。
- 王利英刘一杨登峰黄日波
- 关键词：绿色木霉葡聚糖内切酶酿酒酵母
- 绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅰ基因的定点突变及酶学性质的研究被引量：4
- 2008年
- 将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅠ基因eg1亚克隆到表达载体pSE380,构建出重组质粒pSE380-eg1,转化到大肠杆菌JM109中表达,利用金属亲和层析对EGI进行纯化,纯化后的酶比活力达到3.8U/mg,其最适反应温度为48℃,最适pH为5.2。同时对EGⅠ的氨基酸残基G291位进行随机定点突变,筛选到一株突变酶G291S,其比活力为野生酶的2.2倍,Km值为野生酶的0.66倍,最适反应温度和最适反应pH值未发生改变。
- 陈祺韦宇拓杜丽琴黄艳燕黄日波
- 关键词：绿色木霉大肠杆菌
- 绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因在大肠杆菌中的表达、定点突变及其动力学特性的研究
- 2009年
- 将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因亚克隆到表达载体pET-22b(+),构建重组质粒pET-egl3,转化到大肠杆菌BL21(DE3)。利用金属亲和层析对重组EGⅢ进行纯化,纯化后酶比活力达到6 U/mg蛋白,最适反应温度为60℃,最适pH为4.0。同时对EGⅢ催化区的氨基酸残基R130和E218进行定点饱和突变,各筛选到一株酶活有提高的突变子R130P和E218F,其比活力为野生型EGⅢ的2.8倍和3.45倍。突变酶E218F的Km提高了一倍,催化效率Kcat提高了5.4倍;而R130P的Km和Kcat没有明显变化。两个突变酶的最适酶解温度和pH分别都提高至65℃和4.4。
- 黄艳燕左文朴秦国梅韦宇拓杜丽琴庞宗文黄日波
- 关键词：绿色木霉大肠杆菌
- 利用木糖-葡萄糖为原料产乙醇酵母的筛选、鉴定及发酵试验被引量：3
- 2009年
- 建立筛选利用木糖为碳源产乙醇酵母模型,获得一株适合利用木质纤维素为原料产乙醇的酵母菌株。样品经麦芽汁培养基培养后,以木糖为唯一碳源的筛选培养基初筛,再以重铬酸钾显色法复筛。通过生理生化和26D1/D2区对筛选得到的菌株进行分析和鉴定,该菌初步鉴定为Pichia caribbica。经过筛选得到的菌株Y2-3以木糖(40g/L)为唯一碳源发酵时:生物量为23.5g/L,木糖利用率为94.7%,乙醇终产量为4.57 g/L;以混合糖(葡萄糖40 g/L,木糖20 g/L)发酵时:生物量为28.6 g/L,木糖利用率为94.2%,葡萄糖利用率为95.6%,乙醇终产量为20.6g/L。Pichia caribbica是可以转化木糖及木糖-葡萄糖混合糖为乙醇的酵母菌株,为利用木质纤维素发酵乙醇的进一步研究奠定了基础。
- 杨登峰潘丽霞关妮米慧芝左文朴黄日波
- 关键词：乙醇木质纤维素
- 一株产邻苯二酚假单胞菌的筛选及其发酵条件的优化被引量：1
- 2007年
- 从土壤中筛选到44株产邻苯二酚的菌株,其中X16菌株转化苯甲酸钠产生邻苯二酚的活性最高,根据其形态特征观察、16S rDNA序列同源性比较,初步鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.)。经过发酵条件优化后,发现该菌最适发酵的碳氮源分别为苯甲酸钠6 g/L和聚蛋白胨2 g/L;最适温度为32°C;最适pH为6.7;最适发酵时间为22 h。在上述发酵条件下,该菌产邻苯二酚的能力达到1 mg/mL,比条件优化前提高了25%。
- 陈威程夕冉蒋建林熊建文唐咸来武波
- 关键词：邻苯二酚假单胞菌发酵条件
