国家自然科学基金(30801199)
- 作品数：11 被引量：22H指数：4
- 相关作者：王维林贾慧敏陈青江张涛白玉作更多>>
- 相关机构：中国医科大学沈阳市第四人民医院浙江省台州医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高校重点实验室项目辽宁省科技厅科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Notch-1及Jagged-2基因在肛门直肠畸形大鼠直肠发育过程中的表达及意义被引量：3
- 2010年
- 目的检测Notch-1及Jagged-2基因在肛门直肠畸形(ARM)胎鼠直肠肠壁的胚胎发育过程中的表达变化,探讨其与肠壁神经肌肉发育的关系。方法应用免疫组化和Western blot方法检测正常与乙烯硫脲致畸的ARM胎鼠直肠末端组织Notch-1及Jagged-2蛋白的定位及定量表达,应用RT-PCR方法检测Notch-1及Jagged-2基因mRNA的表达差异。结果 Notch-1/Jagged-2在正常大鼠胚胎直肠发育过程中,在肠壁肌间神经丛(MP)、肠壁平滑肌及黏膜层均有表达,随着胚胎发育,表达强度逐渐增强,胚胎晚期主要集中在肠壁平滑肌及神经丛处;ARM组E17～E21表达均较正常组减弱,E19～E21表达与正常组差异更为显著。正常胎鼠直肠末端壁内中Notch-1及Jagged-2总蛋白量及mRNA明显高于畸形组(P<0.05)。结论 Notch-1/Jagged-2基因在肛门直肠畸形的神经肌肉发育过程中表达下调,可能与其发育不良有一定关系。
- 贾慧敏王晓东陈青江张涛王维林
- 关键词：NOTCH通路肛门直肠畸形肠神经系统
- Notch-1和Jagged-2基因在先天性巨结肠中的表达及意义
- 2011年
- 目的研究先天性巨结肠症（HD）患儿各段肠管中Notch-1及Jagged-2的表达情况，初步探讨Notch-1及Jagged-2表达与HD发生的可能关系。方法选取2005-2010年间在中国医科大学附属盛京医院行手术治疗的HD患儿结肠标本共30例．将HD患儿正常段肠管设为对照组．移行段及痉挛段肠管设为实验组，应用免疫组织化学（免疫组化）染色、Westernblot及RT-PCR法观察Notch-1及Jagged-2在各肠段的表达情况。结果免疫组化染色示HD患儿正常段肠管的神经节细胞中有大量Notch-1及Jagged．2阳性细胞的表达．而在痉挛段肠管中没有这两种细胞的表达．移行段肠管中可见少量Notch-1及Jagged-2阳性细胞的表达。Westeinblot结果显示Notch-1和Jagged-2蛋白在痉挛段肠管相对表达量分别为0．19±0．02和0.13±0．04．明显少于移行段肠管和正常段肠管（0．58±0．05和0．52±0．04；0．72±0．04和0．69±0．04）（P〈0．05）。RT—PCR结果显示，Notch-1及Jagged-2的mRNA水平与蛋白表达一致。结论HD患儿痉挛段肠管中Notch-1及Jagged-2的表达缺失可能与HD的发生有关。
- 贾慧敏韩秀芳白玉作王维林
- 关键词：先天性巨结肠症NOTCH-1反转录聚合酶链反应
- 先天性肛门直肠畸形患儿CDX1基因外显子突变检测的研究被引量：4
- 2015年
- 目的探讨CDXI基因外显子突变在先天性肛门直肠畸形（ARM）患儿的分布情况。方法回顾性分析2003年6月至2009年3月中国医科大学附属盛京医院及河北大学附属医院收治的108例（中国医科大学附属盛京医院85例、河北大学附属医院23例）ARM患儿和120例（中国医科大学附属盛京医院60例、河北大学附属医院60例）同期行健康体检者的临床资料。采用病例对照研究方法抽取患者外周血并提取基因组DNA后，应用PCR方法扩增CDXl基因外显子，并将PCR产物进行测序分析。正态分布的计量资料以元±s表示，采用t检验，计数资料比较采用r检验。结果108例ARM息儿进行CDXl外显子测序，在编码区共发现4例ARM患儿携带4种不同的CDXl突变位点，肛门狭窄、直肠会阴瘘、直肠前庭瘘、直肠尿道瘘患儿各1例。上述突变位点位于CDXl的高度保守的同源结构域中，1例患儿位于第1外显子（C．213～214Ins GAA），2例患儿发生于CDXl第3外显子的DNA结合区（c．6G〉C、C．27G〉T），1例患儿位于第3外显子特异性DNA结合区（C．18A〉C）。在健康体检者中未发现外显子及其他位点突变。CDX1基因中e．213～214InsGAA、c．6G〉C、c．27G〉T、C．18A〉C的突变分别引发96—981nsE、K199N、R206S、Q203H等氨基酸的改变。结论ARM患儿中存在CDX1第1外显子或第3外显子的突变，CDX1可能是ARM的易感基因。
- 张涛李靖华张胜逆张爱民杨季红白玉作
- 关键词：肛门直肠畸形基因突变
- 大鼠成肌细胞移植重建盆底横纹肌复合体的实验研究被引量：4
- 2010年
- 目的 研究成肌细胞移植重建盆底横纹肌复合体的可行性,为肛门直肠畸形盆底肌发育不良探索新的治疗方法.方法 提取新生大鼠骨骼肌卫星细胞进行体外培养,分化形成成肌细胞,转染携带绿色荧光蛋白的腺病毒后种植到建立的横纹肌复合体去细胞空支架中,体外培养2d后支架移植回盆底在体内生长4周,应用电镜及免疫荧光化学染色检测成肌细胞在体内分化融合形成骨骼肌纤维的情况.结果 卫星细胞分离后,贴壁较早的成肌细胞增殖较快,很快分化融合成多核肌管,传代次数有限;贴壁较晚的细胞中有较多呈球形细胞,表达卫星细胞特异性标记Pax7,其增殖较慢,传代次数较多.成肌细胞Desmin表达阳性,分化成肌管后表达Myosin.腺病毒转染后转染率达98.6%.建立的空支架Laminin表达阳性,由以胶原纤维成分为主的基底膜管组成,成肌细胞种植后细胞附着于支架,并见细胞突起,支架体外培养1周后细胞仍存活.移植后4周成肌细胞分化形成骨骼肌,在球海绵体肌后方形成肌束,但未形成弹弓样结构的横纹肌复合体,GFP及Myosin表达阳性,肌纤维周围可见微血管形成,并且检测到Pax7表达阳性的卫星细胞.结论 卫星细胞经体外分离培养后移植至盆底能很好地分化形成肌纤维,可以作为修复发育不良的盆底肌的细胞来源.
- 陈青江马燕牛志新贾慧敏袁正伟白玉作王维林
- 关键词：骨骼肌卫星细胞
- Wnt5a在肛门直肠畸形患儿末端直肠组织中的表达及意义
- 2011年
- 目的通过检测Wnt5a在肛门直肠畸形(ARM)患者末端直肠壁的表达,探讨其与ARM之间的可能关系。方法应用免疫组化和Western blot方法检测20例ARM患儿、7例后天性肠瘘和6例非胃肠道疾病患儿(对照组)末端直肠壁Wnt5a的表达并对比分析。结果对照组Wnt5a表达于直肠壁内肌间神经丛、黏膜层及黏膜下层,ARM组的末端直肠壁内Wnt5a表达较对照组减少,尤其高位畸形组减少更为明显。Western blot蛋白印迹结果:ARM高位组、中位组和低位组Wnt5a蛋白表达均明显低于对照组和后天肠瘘组(P<0.01)。高位组和中位组Wnt5a蛋白表达明显低于低位组(P<0.01)。后天瘘组与对照组比较差异无统计学意义。结论 Wnt5a在ARM末端直肠的表达水平减低,可能与ARM的发生密切相关。
- 贾慧敏陈青江张涛白玉作王维林
- 关键词：WNT5A肛门直肠畸形儿童
- Wnt5a及Frizzled-1基因在肛门直肠畸形大鼠直肠发育过程中的表达及义被引量：5
- 2010年
- 目的 检测Wnt5a及Frizzled-1（Fzd-1）基因在肛门直肠畸形（anorectal malformations,ARM）胎鼠直肠肠壁的胚胎发育过程中的表达变化,探讨其可能与肠壁神经肌肉发育的关系.方法 将Wistar大鼠随机分为正常组与乙烯硫脲致畸的ARM组,应用免疫组化、Western Blot方法检测正常与ARM组胎鼠直肠末端组织Wnt5a及Fzd-1蛋白的定位及定量表达,RT-PCR方法检测Wnt5a及Fzd-1 mRNA的表达差异.结果 Wnt5a/Fzd-1在正常大鼠胚胎直肠发育过程中,在肠壁肌间神经丛（myenteric nerve plexus,MP）、肠壁平滑肌及黏膜层均有表达,随胚胎发育,表达强度逐渐增强,胚胎晚期主要集中在肠壁平滑肌及MP处;ARM组：越接近直肠末端的肠壁内阳性表达细胞明显减少.western blot及RT-PCR结果显示正常胎鼠直肠末端组织中Wnt5a及Fzd-1总蛋白量及mRNA明显高于畸形组（E21：Wnt5amRNA：0.81±0.14比0.21±0.03;Fzd-1mRNA：0.72±0.11比0.20±0.04;Wnt5a：1.12±0.11比0.48±0.05;Fzd-1：0.91±0.10比0.32±0.04,P〈0.05）.结论 Wnt5a/Fzd-1基因在肛门直肠畸形的神经肌肉发育过程中表达下调,可能与其发育不良有一定关系.
- 贾慧敏张海兰陈青江张涛王维林
- 关键词：肠神经系统
- 肛门直肠畸形动物模型末端直肠肠壁肠神经系统及突触素的胚胎发育的研究被引量：3
- 2009年
- 目的检测蛋白基因产物（protein gene product 9．5，PGP9．5）及突触素（synaptophysin，SY）在肛门直肠畸形胎鼠直肠肠壁胚胎发育过程中的分布，探讨其可能与排便功能的关系。方法应用免疫组化、免疫荧光和Western Blot方法检测正常与肛门直肠畸形动物胎鼠直肠末端组织PGP9．5、SY的表达情况。结果正常组末端结肠及直肠壁内有神经节细胞，肠壁肌层及黏膜肌层PGP9．5、SY大量表达；畸形组胎鼠直肠末端壁内的分布均比对照组明显减少，发育延迟，但随着远离盲端，PGP9．5、SY出现并逐渐增多。正常胎鼠直肠末端壁内中PGP9．5、SY总蛋白量明显高于畸形组（P〈0．05）。结论肠神经系统及突触素的分布异常是肛门直肠畸形动物模型直肠末端壁的重要病理改变。
- 贾慧敏陈青江张树成张涛白玉作袁正伟王维林
- 关键词：突触囊泡蛋白
- 肛门直肠畸形大鼠盆底肌卫星细胞及其微环境的胚胎发育研究被引量：1
- 2010年
- 目的 研究肛门直肠畸形胎鼠盆底肌卫星细胞及其微环境的胚胎发育,从干细胞水平探索盆底肌发育不良的可能发生机制.方法 乙烯硫脲致畸建立肛门直肠畸形动物模型,正常组及给药组孕16～2 d取胎,经连续石蜡切片及提取盆底横纹肌复合体,应用免疫荧光化学染色、透射电镜、细胞培养技术及实时定量PCR方法研究盆底肌卫星细胞的胚胎发育.结果 正常组：孕16 d时盆底肌已经开始形成,未见Pax7阳性表达细胞,孕17 d后盆底肌出现Pax7弱阳性染色细胞,孕19、21 d Pax7表达增强,孕21 d时阳性细胞比例略下降,占肌细胞核的35.07%.畸形组：孕16 d时即见Pax7较强阳性染色细胞,孕17～21 d阳性染色细胞比例增加,以孕19 d最明显,孕21 d时占肌细胞核的44.16%.Real-time PCR结果提示,与正常组比较,畸形组Pax7表达增强,而Myogenin表达减弱,各组间差异有统计学意义.透射电镜可见肛门直肠畸形组盆底肌卫星细胞胞核不规则,异染色质明显增多,胞膜与肌膜间间隙增大,基底膜明显增厚,周围肌纤维排列紊乱,横纹不明显.细胞分离培养后畸形组卫星细胞分化障碍,培养72 h后仍有较高比例的MyoD阳性表达细胞.畸形组盆底肌vWF及Neurofilament表达减弱而Vimentin表达明显增强,存在微环境发育缺陷.结论 肛门直肠畸形时盆底肌卫星细胞提前形成使得分化成肌的前体细胞减少,卫星细胞的超微结构异常及分化功能障碍,同时存在卫星细胞微环境发育缺陷,使得卫星细胞不能向骨骼肌分化,可能是导致盆底肌发育不良的机制之一.
- 陈青江马燕牛志新贾慧敏张树成白玉作袁正伟王维林
- 关键词：肛门直肠畸形骨骼肌卫星细胞
- 先天性肛门直肠畸形WNT5a基因突变的筛查分析被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨WNT5a基因突变与先天性肛门直肠畸形（anorectal malformations,ARMs）发生的关系.方法 采用PCR和DNA直接测序的方法,检测88例ARMs患儿和120名健康儿童WNT5a基因第1、2外显子突变情况.结果 3例ARMs患儿存在WNT5a基因第2外显子多点突变,正常对照组未见突变发生.结论 WNT5a基因第2外显子的突变与ARMs可能存在相关性.
- 贾慧敏王晓东高红陈青江张涛王维林
- 关键词：DNA突变分析遗传筛查
- Cajal间质细胞及突触素在肛门直肠畸形动物模型末端直肠壁的表达及意义被引量：2
- 2009年
- 目的检测Cajal间质细胞(ICCs)及突触素(SY)在肛门直肠畸形胎鼠直肠肠壁的胚胎发育过程,探讨其表达的意义。方法应用免疫组化、免疫荧光和Western blot方法检测正常与肛门直肠畸形胎鼠直肠末端组织c-kit、SY的表达情况。结果正常组结肠及直肠壁内肠壁肌层及黏膜肌层c-kit、SY大量表达;畸形组胎鼠直肠末端壁内的分布均比对照组明显减少,发育延迟,但随着远离盲端,c-kit、SY出现并逐渐增多。正常胎鼠直肠末端壁内c-kit、SY总蛋白量明显高于畸形组(P<0.05)。结论Cajal间质细胞及突触素的分布异常是肛门直肠畸形动物模型直肠末端壁的重要病理改变之一。
- 贾慧敏陈青江张涛白玉作袁正伟王维林
- 关键词：CAJAL间质细胞突触素肛门直肠畸形发育
