目的探讨ID4、ZO-1基因甲基化定量检测作为基因标志在急性白血病（acute leukemia，AL）中的意义。方法采用硫化测序PCR（bisulfite sequencing PCR，BSP）法及甲基化特异性PCR（methylightion specific PCR，MSP）法检测AL中NB4细胞和健康供者骨髓（normal bone marrow，NBM）细胞的ID4、ZO-1基因的甲基化状况并进行分析。结果BSP法检测ID4基因在ALNB4细胞中甲基化阳性率为86．0％，显著高于NBM细胞甲基化阳性率（4．8％），差异有统计学意义（P〈0．05）；ZO-1基因在ALNB4细胞系中甲基化阳性率为88．4％，显著高于NBM细胞甲基化阳性率（1．9％），差异有统计学意义（PP〈0．05）。采用MsP法检测9种AL细胞系，ID4、ZO-1基因甲基化水平在淋系来源的细胞系高于髓系来源的细胞系。结论ID4、ZO-1基因甲基化水平检测可作为新的AL基因标志物。
为探讨zo-1基因甲基化状态改变在骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome MDS)与血液系统非恶性疾病鉴别诊断中的意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)及逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测MDS细胞系MUTZ1、1例再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者及正常供者的骨髓(normal bone marrow,NBM)。通过甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specificPCR,MS-PCR),对37例MDS-RA患者、20例疑诊MDS患者及55例血液系统非恶性疾病患者骨髓标本进行检测。结果显示:①zo-1基因在MDS细胞系MUTZ1中呈完全甲基化且不表达,在1例AA患者骨髓及NBM中呈完全非甲基化且有表达;②zo-1基因在55例血液系统非恶性疾病患者骨髓标本中呈完全非甲基化状态,在MDS-RA患者骨髓中甲基化阳性率48.6%(18/37),二者差异有统计学意义(p<0.05);③20例疑似MDS患者中zo-1基因甲基化阳性率为35%(7/20)。随访甲基化阳性患者中的2例,均在1年内诊断为MDS。结论:MDS患者骨髓zo-1基因启动子区发生了高甲基化状态的改变,而血液系统良性疾病患者骨髓呈非甲基化状态。zo-1基因启动子区高甲基化在MDS患者骨髓标本中较特异,推测zo-1基因异常甲基化状态可能成为基因标志,它有助于MDS与AA等血液系统良性疾病的鉴别诊断,可应用于临床。
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测MM细胞系U266、H929及IM9(B淋巴母细胞,MM患者骨髓来源)中zo-1、id4基因的甲基化状况;应用MS-PCR方法分析20例MM患者及6例健康供者骨髓标本zo-1、id4基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1、id4基因在MM细胞系中均为甲基化阳性(完全甲基化或部分甲基化);zo-1、id4基因在5例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MM患者骨髓中zo-1、id4基因甲基化阳性率分别是50%和85%,二者阳性覆盖率高达95%,二者均阳性的标本阳性率为40%,明显高于健康人(0%),差异均有统计学意义(p<0.05);MM患者不同重链及不同轻链间甲基化阳性率没有统计学差异;MM患者是否具有B组症状并不影响患者的甲基化阳性率,这可能与标本数量有关。结论:MM患者中zo-1、id4基因甲基化状态发生改变并具有特异性,可能是MM新的基因标记。
