辽宁省自然科学基金(20072122)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：王振东田秀艳刘芳普孟鹏薛立江更多>>
- 相关机构：沈阳农业大学沈阳市农业检测中心南阳师范学院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅资助项目辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及GFP表达的研究被引量：1
- 2009年
- [目的]研究植物病毒表达载体pC1YVV/CP/W的构建及用pC1YVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pC1YVV基因组的Mb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pC1YVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pC1YVV/CP/W中构建pC1YVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pC1YVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型C1YVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框;外源基因在F_4子代病毒基因组中稳定存在;重组病毒克隆pC1YVV/CP/W/GFP至少到F_4子代病毒能稳定表达GFP。[结论]该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体。
- 王振东王晓华孟鹏秦会权郑新伟刘芳普薛立江张敏
- 植物病毒表达载体的研究现状及其应用前景被引量：6
- 2009年
- 就国内外植物病毒载体构建的现状、开发应用前景及存在的问题进行了简要的综述。
- 田秀艳王振东
- 植物病毒载体介导的sMMO-C在蚕豆植物中的表达
- 2010年
- 构建了可溶性甲烷单加氧酶C亚单位(soluble methane monoxygenase-C component,sMMO-C)基因和绿色荧光蛋白-S65T(green fluorescence protein,GFP-S65T)基因的融合基因sMMO-C/GFP-S65T。将融合基因sMMO-C/GFP-S65T克隆到三叶草黄脉病毒(glover yellow vein virus,ClYVV)侵染性植物表达载体pClYVV/CP/W的NIb/CP基因之间,构建了侵染性重组病毒克隆pCV-mmoC/GFP-S65T。RT-PCR检测结果表明,sMMO-C/GFP-S65T在子代病毒基因组中获得了转录。用GFP抗体进行蛋白质杂交(western blotting,WB),检测到25kDa左右的GFP蛋白,这一结果表明GFP蛋白在被pCV-mmoC/GFP-S65T侵染的寄主植物中获得了表达,并被病毒自身编码的NIa蛋白酶从病毒聚合蛋白及sMMO-C/GFP-S65T融合蛋白中自动切断。可见,sMMO-C亚单位蛋白在植物中获得了表达,因在sMMO-C/GFP-S65T中sMMO-C位于GFP上游。
- 陈超力张敏王丽孟可心王振东
- 关键词：GFP
