国家自然科学基金(30871876)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 狂犬病病毒HEP-Flury株N基因的修饰及原核表达
- 2012年
- 为了高效表达狂犬病病毒HEP-Flury的核蛋白,选取抗原决定簇富集区,利用生物信息学技术分析了狂犬病病毒HEP-Flury N蛋白的核苷酸序列.根据大肠埃希菌Escherichia coli对密码子的偏嗜性,首先对所选取的核苷酸序列进行修饰、引入酶切位点,然后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32-NP.将其转化表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)pLysS,以IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE电泳,发现在相对分子质量34 000处有1条特异的蛋白带,与预期大小一致.Western-blotting检测结果显示,该蛋白可被鼠抗His单克隆抗体及犬抗RV多克隆抗体特异识别,表明所表达的N蛋白具有良好的免疫原性.
- 张良黄永亮官培英王怡飞徐晓娟吴晓薇郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒核蛋白原核表达
- 狂犬病基因工程灭活疫苗（Hep-Flury-dG株）的免疫效力
- ＜正＞目的为了检测狂犬病基因工程灭活疫苗（Hep-Flury-dG株）注射犬只后的免疫效力。方法在广州市增城区某村进行狂犬病基因工程灭活疫苗（Hep-Flury-dG株）环境释放试验,登记该村所有家养犬的信息并存档,同时...
- 施赫赫宋伟科黄永亮刘祥茵代元元傅秋玲张莹林颖仪阳佑天徐晓娟王怡飞郭霄峰
- 关键词：狂犬病基因工程疫苗免疫效力
- 文献传递
- 狂犬病毒新型快速荧光斑点抑制实验方法的建立被引量：1
- 2009年
- 目的建立一种新型的快速荧光斑点抑制实验用于狂犬病毒抗体的检测。方法本研究以携带绿色荧光蛋白基因的嵌合狂犬病毒HEP-GFP株为基础毒株,建立了一种新型快速荧光斑点抑制实验(RFFIT-GFP);并对多份人、犬、猫的血清进行了检测,还将该检测结果与传统的RFFIT,ELISA相比较。结果与结论RFFIT-GFP和RFFIT,ELISA测定的结果基本相一致,特异性都比较高,而且RFFIT-GFP是一种比它们更为简便、经济的检测方法。
- 梁红茹刘晓慧陈晶孙招金郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒绿色荧光蛋白
- 狂犬病病毒糖蛋白抗原表位富集区单克隆抗体的制备
- 为制备狂犬病病毒糖蛋白抗原表位富集区单克隆抗体,以原核表达的部分糖蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,所获得的杂交瘤细胞经间接ELISA法筛选和有限稀释法克隆,获得3株能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株。...
- 郑佳琳江飙张东霞施赫赫郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白抗原表位单克隆抗体
- 全序列密码子优化对狂犬病病毒基质蛋白原核表达的影响
- 采用PCR方法由HEP-Flury株全长质粒中扩增狂犬病病毒基质蛋白序列M,另采用全序列合成方法将其序列中稀有密码子替换为大肠杆菌偏嗜密码子,得到优化后序列MN。将以上两个序列双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a...
- 江飙郑佳琳张东霞郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白密码子优化原核表达
- 全序列密码子优化对狂犬病病毒基质蛋白原核表达的影响
- 采用PCR方法由HEP-Flury株全长质粒中扩增狂犬病病毒基质蛋白序列M,另采用全序列合成方法将其序列中稀有密码子替换为大肠杆菌偏嗜密码子,得到优化后序列MN。将以上两个序列双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a...
- 江飙郑佳琳张东霞郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白密码子优化原核表达
- 文献传递
- 狂犬病病毒糖蛋白抗原表位富集区单克隆抗体的制备
- 为制备狂犬病病毒糖蛋白抗原表位富集区单克隆抗体,以原核表达的部分糖蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,所获得的杂交瘤细胞经间接ELISA法筛选和有限稀释法克隆,获得3株能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株。...
- 郑佳琳江飙张东霞施赫赫郭霄峰
- 关键词：抗原表位单克隆抗体
- 文献传递
- 荧光素酶标记狂犬病毒rHEP-luc株的生物学特性研究
- 将前期拯救的重组狂犬病毒rHEP-luc株传至第10代,第4代起病毒稳定适应BHK-21细胞株,滴度达到106FFU/mL。RT-PCR和直接免疫荧光方法对荧光素酶基因的遗传稳定性分析,结果表明重组病毒能够携带该基因稳定...
- 梁红茹谭业平顿灿郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒荧光素酶反向遗传技术生物学特性
- 文献传递
- 荧光素酶标记狂犬病毒rHEP-luc株的生物学特性研究
- 将前期拯救的重组狂犬病毒rHEP-luc株传至第10代,第4代起病毒稳定适应BHK-21细胞株,滴度达到106FFU/mL。RT-PCR和直接免疫荧光方法对荧光素酶基因的遗传稳定性分析,结果表明重组病毒能够携带该基因稳定...
- 梁红茹谭业平顿灿郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒荧光素酶反向遗传技术生物学特性
- 狂犬病基因工程灭活疫苗(Hep-Flury-dG株)的免疫效力被引量：2
- 2012年
- 目的检测狂犬病基因工程灭活疫苗(Hep-Flury-dG株)注射犬只后的免疫效力。方法在广州市增城区某村进行狂犬病基因工程灭活疫苗(Hep-Flury-dG株)环境释放试验,登记该村所有家养犬的信息并存档,同时进行疫苗免疫。随机采集免疫前血清样品66份,免疫后21d仍获得血清样品66份,使用ELISA方法检测样品的抗体水平。结果免疫前该村犬只抗体阳转率为26%,免疫后21d抗体阳转率达到83%。经统计分析表明免疫前后抗体水平差异具有统计学意义;性别不是影响抗体水平变化的因素,但年龄可影响抗体水平变化,成犬抗体水平的增加明显高于幼犬。结论狂犬病基因工程灭活疫苗(Hep-Flury-dG株)免疫犬只后可提供足够的保护力,有效保护犬只免受狂犬病病毒感染,因而预防狂犬病从犬-犬或犬-人的传播;为农村地区家养犬建立免疫档案,监控犬只抗体水平,使犬群间形成狂犬病抗体阳性率达到70%以上的坚强免疫带,是预防农村地区狂犬病发生的一种可行、有效的方法。
- 施赫赫宋伟科黄永亮刘祥茵代元元傅秋玲张莹林颖仪阳佑天徐晓娟王怡飞郭霄峰
- 关键词：狂犬病基因工程疫苗免疫效力
