国家高技术研究发展计划(2006AA3Z334)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：刘美英贾春平赵建龙黄云艳金庆辉更多>>
- 相关机构：中国科学院苏州大学兰州大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市科委纳米专项基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 纳米金标记p53抗体探针在p53蛋白检测中的应用被引量：2
- 2010年
- 目的利用纳米金粒子静电吸附抗体和与巯基修饰的寡核苷酸以Au-S键共价结合的特点制备多功能纳米金探针,结合免疫磁珠探针技术建立一种新的、高灵敏的免疫检测体系。方法纳米金探针表面标有两种蛋白分子和一种寡核苷酸链:检测抗体(免疫检测中结合待测抗原);辣根过氧化物酶(HRP,信号扩增作用);巯基化DNA链(作为"桥梁"连接纳米金颗粒和HRP分子)。捕获抗体(捕获待测抗原蛋白)修饰的微型磁珠探针作为p53蛋白检测固相支撑物。目标蛋白p53存在时,通过抗原抗体反应形成三明治结构(磁珠探针—目标蛋白—纳米金探针)。结果最佳条件下,该蛋白检测体系可检测到最低浓度为30 pg/ml的p53蛋白,与酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方法相比,检测效果较好。结论该法操作过程简单,灵敏度高、重复性较佳,费用低廉,在临床微量蛋白检测中具有重要的应用价值。
- 黄云艳刘美英贾春平赵林川金庆辉赵建龙
- 关键词：P53蛋白HRPELISA
- 一种基于酶标纳米金探针的蛋白质检测方法被引量：3
- 2009年
- 目的研究酶标纳米金探针的制备条件,并构建利用酶标纳米金探针检测蛋白质的检测体系,实现对蛋白质的高灵敏度检测。方法首先标记捕获抗体的磁珠探针、抗原及标记检测抗体和辣根过氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,SA-HRP)的纳米金探针(AuNPprobes)进行免疫反应形成三明治结构,然后利用磁力分离器收集三明治结构,再加入四甲基联苯胺(Tetrabenzidine,TMB)溶液发生酶促显色反应,最后在450nm处进行分光光度检测,从而间接测定蛋白质含量。结果通过一系列优化实验建立检测体系,具体为:纳米金探针重悬液确定为50mmolTris(pH7.8,1.25%蔗糖,0.2%BSA,0.05%PEG,0.05%PVP,0.15%Tween20);检测体系中纳米金的最适加入量为3μl;2步孵育最适时间依次为1h和45min。使用该方法检测并绘制癌胚抗原(CEA)标准曲线,表明CEA浓度在250pg/ml^25ng/ml区间时线性关系良好,R2为0.991。通过灵敏度实验表明该检测体系的最低检测灵敏度为25pg/ml,而传统ELISA方法的检测灵敏度仅为1.65ng/ml。结论酶标纳米金探针检测体系实现了通过普通光学仪器进行高灵敏度蛋白质检测的目标,是一种很有发展前景的蛋白质检测技术。
- 钟晓琴刘美英黄云艳贾春平金庆辉赵建龙李凤民
- 关键词：辣根过氧化物酶免疫酶技术分光光度法
- 两种纳米金标记p53抗体探针的制备、表征和性质研究被引量：1
- 2010年
- 目的制备IgG-Au-HRP和IgG-Au-DNA-HRP两种纳米金标记p53抗体探针,并对其进行生物学特征表征和性质研究。方法利用纳米金粒子与蛋白质非共价吸附和与巯基修饰的寡核苷酸以Au-S键共价结合的特点,将辣根过氧化物酶(HRP)直接或通过寡核苷酸链间接标记在纳米金表面,制备两种多功能纳米金生物探针(IgG-Au-HRP和IgG-Au-DNA-HRP探针);应用透射电镜、紫外-可见光光谱等对纳米金探针性能进行表征,对纳米金探针表面HRP酶活性进行分析,并通过酶免疫标记技术(enzyme linked immuncsorbent assay,ELISA)优化探针制备条件和比较两种探针标记效率。结果①两种新型探针具有良好的单分散性,大小均一,粒径约10nm;②p53蛋白检测效果对IgG-Au-HRP和IgG-Au-DNA-HRP探针制备条件优化结果表明:制备IgG-Au-HRP探针时,HRP分子和p53抗体的最佳比例为10:1;制备IgG-Au-DNA-HRP探针时,DNA和p53抗体的最佳比例为2.5:1;③HRP分子定量检测显示:一个IgG-Au-HRP探针可标记HRP数量约11个,IgG-Au-DNA-HRP探针可标记HRP数量为20个;④两种探针结合ELISA法初步检测p53蛋白判定IgG-Au-DNA-HRP探针比IgG-Au-HRP探针检测蛋白灵敏度高。结论两种新型纳米金探针制备简单,可作为一种新型探针应用于微量蛋白的高灵敏检测。
- 黄云艳贾春平刘美英金庆辉赵建龙赵林川
- 关键词：酶联免疫吸附测定肿瘤抑制蛋白质P53辣根过氧化物酶金属纳米粒子
