江苏省高校高新技术产业发展项目(BG2003033)
- 作品数：14 被引量：14H指数：2
- 相关作者：张寄南杨笛何国平高磊杨国英更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院江苏大学附属武进医院南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校高新技术产业发展项目江苏省科技厅科研基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学化学工程更多>>
- 实验性心肌损伤大鼠血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的检测被引量：2
- 2004年
- 目的应用抗人cTnI单克隆抗体检测大鼠血清cTnI。方法SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素8mg/kg,对照组大鼠注射等体积的生理盐水,4h后处死,观察心肌组织病理改变;应用2株抗人cTnI单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA法检测大鼠血清cTnI。结果大鼠注射异丙肾上腺素后心肌呈散在局灶性病变,表现为心肌纤维呈波浪样改变,部分心肌纤维断裂,心肌间质内炎细胞浸润、水肿。血清cTnI(OD值)明显高于对照组大鼠(1.28±0.78∶0.30±0.22,P<0.01)。结论本实验建立了大鼠血清cTnI双抗体夹心ELISA方法。血清cTnI能反映大鼠心肌病理变化,可作为诊断大鼠心肌损伤的一个可靠指标。
- 卞智萍杨笛冯振卿张寄南
- 关键词：心肌损伤单克隆抗体ELISA
- 妊娠相关血浆蛋白-A单克隆抗体的制备和初步鉴定
- 2006年
- 目的制备娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)单克隆抗体(M cAb)。方法利用PAPP-A抗原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,间接ELISA方法对细胞培养上清检测、筛选,建立分泌PAPP-A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,扩人培养后,Balb/c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株,产生腹水后,对腹水进行收集、纯化、签定。结果筛选出稳定分泌PAPP-A M cAb的杂交瘤细胞株,W estern-b lot分析证实M cAb与PAPP-A有较高的特异性及敏感性。结论本实验成功制备了抗PAPP-A特异性的M cAb,可用于PAPP-A免疫检测方法的建立。
- 顾荣花孙丽洲顾春荣卞智萍杨笛张寄南
- 关键词：妊娠相关血浆蛋白-AWESTERNBLOTTING
- 妊娠相关血浆蛋白-A的纯化与鉴定
- 2007年
- 目的:建立人妊娠血浆相关蛋白A(PAPP-A)的纯化与鉴定方法。方法:利用DEAE-Sephadex CL-6B离子交换和Heparin-sepharose CL-6B亲和层析进行分离纯化,变性SDS-PAGE测定其相对分子质量为200kD,Western blotting鉴定其特异性。结果:获得相对分子质量为200kD的蛋白条带,此条带可与妊娠血浆相关蛋白A单克隆抗体发生特异性反应。结论:成功地从孕妇血清中分离得到妊娠血浆相关蛋白A。
- 顾荣花孙丽洲陈湘健顾春荣卞智萍徐晋丹杨笛张寄南
- 关键词：纯化
- KLOTHO基因C-1818T多态性与急性心肌梗死的关联性研究
- 2009年
- 目的探讨KLOTHO基因第四外显子C-1818T多态性与中国苏皖地区汉族人群急性心肌梗（acute myocradial infarction，AMI）的可能关系。方法入选229例AMI患者（AMI组）和235例经相关检查排除冠心病（CAD）者为对照组，采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）及基因芯片（gene microarray）技术检测KLOTHO基因C-1818T多态性的基因型，同时测定甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和血糖等临床生化指标。结果与对照组相比，AMI组老年人（≥60岁）和男性患者的CT基因型频率均明显升高（P值分别为0．042和0．039），在调整多种危险因素并经多元Logistic回归分析后，KLOTHO基因CT基因型与老年人和男性AMI无显著关联性。结论KLDTHO基因C-1818T多态性CT基因型可能是中国苏皖地区汉族人群AMI的易感基因型，在存在多种动脉粥样硬化相关危险因素的情况下，携带该基因型的老年人和男性较易发生AMI。
- 何国平金鸣锋杨进杨国英王俊宏高磊沈丽娟肖建强徐波顾君杨笛张寄南
- 关键词：KLOTHO基因多态性急性心肌梗死
- KLOTHO基因启动子G-395A多态性与急性冠脉综合征的相关性分析
- 2008年
- 目的探讨KLOTHO基因启动子G-395A多态性与中国苏皖地区汉族人群急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）和基因芯片（gene microarray）技术对326例ACS（ACS组）[分为亚组急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMD组和不稳定性心绞痛（unstable angina pectoris，UAP）组]和219例经相关检查排除冠心病（CAD）的对照组进行KIDTHO基因G-395A多态性检测。结果与对照组相比，ACS组、AMI组和UAP组（包括不同年龄和不同性别的亚组）的GG、GA、从基因型和A等位基因频率均无明显差异（P均〉0．05）。结论K101HO基因G-395A多态性与ACS的发病无显著相关性。
- 何国平金鸣锋高磊杨进王俊宏沈丽娟杨笛张寄南
- 关键词：KLOTHO基因多态性急性冠脉综合征
- 老年急性冠脉综合征患者KLOTHO基因C-1818T多态性分析被引量：5
- 2008年
- 目的:观察中国苏皖地区汉族老年(≥60岁)人群KLOTHO基因第4外显子C-1818T多态性分布,探讨其与老年人急性冠脉综合征(ACS)的可能关系。方法:采用聚合酶链反应及基因芯片技术,检测272例老年ACS患者(ACS组)和139例老年非冠心病者(对照组)的KLOTHO基因C-1818T多态性。结果:(1)与对照组相比:ACS组CT基因型频率明显升高,差异有统计学意义(30.9vs20.9,P=0.031),CC、TT基因型及T等位基因频率差异均无统计学意义(分别为72.7vs65.4、6.5vs3.7和16.9vs19.1,P值均>0.05)。(2)将ACS组按性别进行进一步分析后发现,分别与对照组相比:①男性CT基因型频率明显升高,差异有统计学意义(28.5vs16.7,P=0.041),CC、TT基因型及T等位基因频率差异无统计学意义(分别为75.6vs68.5、7.7vs3.0和16.0vs17.3,P值均>0.05);②女性CC、CT、TT基因型及T等位基因频率差异无统计学意义(分别为68.9vs56.9、26.2vs37.5、4.9vs5.6和18.0vs24.3,P值均>0.05)。在调整相关危险因素并经多元Logistic回归分析后,与对照组相比:ACS组(优势比=1.993,95可信区间=1.180-3.367,P=0.010)和ACS组男性患者(优势比=2.156,95可信区间=1.010-4.602,P=0.047)CT基因型频率均显著升高,差异有统计学意义。结论:在中国苏皖地区汉族老年人群(特别是老年男性)中,ACS患者CT基因型频率升高,提示KLOTHO基因C-1818T多态性CT基因型与老年人特别是老年男性ACS的发病存在相关性。
- 何国平金鸣锋高磊杨进王俊宏沈丽娟戚传平杨国英杨笛张寄南
- 关键词：KLOTHO基因多态性急性冠脉综合征
- 急性心肌梗死患者血小板反应素1单核苷酸多态性被引量：2
- 2006年
- 目的探讨血小板反应素1基因第13外显子单核苷酸多态性致血小板反应素1蛋白第700位氨基酸丝氨酸转换为天冬氨酸与中国汉人急性心肌梗死的相关性。方法应用聚合酶链反应—限制性片断长度多态性技术筛查了汉族172例急性心肌梗死患者和270例对照者血小板反应素1基因第13外显子钙结合活性片段8831A→G,对筛查到含有突变的片段进行序列测定,并与正常序列进行对照分析,探讨两者之间的关系。结果血小板反应素1基因8831A→G不是中国汉人急性心肌梗死发生的独立危险因素(GA比AA:相对危险度为3.19,95%可信区间为0.578～17.61,P=0.160)。结论血小板反应素1基因8831A→G在汉人中发生频率低,与汉人急性心肌梗死发生无相关性,补充了血小板反应素1基因单核苷酸多态性的数据库信息。
- 戴健杨志健马继政杨笛张寄南
- 关键词：病理学与病理生理学急性心肌梗死基因突变单核苷酸多态性冠心病
- C-反应蛋白对体外培养乳鼠心肌细胞的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:应用C-反应蛋白干预体外培养的乳鼠心肌细胞,观察C-反应蛋白对心肌细胞的影响。方法:实验于2005-05/10在南京医科大学第一附属医院心内科暨心血管病研究所完成。取新生1～3d的SD乳鼠,无菌操作取出心脏,去除大血管和心房后将心脏剪碎,加入适量0.125%胰蛋白酶反复消化至完全。所得消化液中加入含血清的DMEM培养基,离心后弃上清,沉淀用含0.1%Brdu、体积分数为0.15新生牛血清的DMEM培养基混悬。细胞密度稀释至6×108L-1,接种至六孔板中,放入37℃,体积分数为0.05的CO2孵育箱内培养。24h后换液除去Brdu,取第3天细胞进行研究。采用充氮气孵育4h模拟缺氧造成心肌细胞损伤(缺氧组),以未缺氧组做对照,缺氧组与未缺氧组均加用不同浓度的C-反应蛋白(0,10,55,100mg/L)进行干预,测定细胞培养上清心肌肌钙蛋白Ⅰ的含量及脂质过氧化产物丙二醛与超氧化物歧化酶的含量以观察C-反应蛋白对心肌细胞的影响,并通过免疫组织化学观察C-反应蛋白在细胞的分布情况。结果:①细胞形态及搏动率的改变:未缺氧组细胞搏动率总体随C-反应蛋白浓度的增加而增加,但在缺氧4h组,细胞搏动率在C-反应蛋白55mg/L时达到最高峰犤(132±9)次/min,P<0.05犦。②培养细胞上清肌钙蛋白Ⅰ含量的变化:在未缺氧组和缺氧4h组,肌钙蛋白Ⅰ均随C-反应蛋白浓度的增加而增高,且C-反应蛋白浓度为100mg/L时的增幅最高犤C-反应蛋白为0,10,55,100mg/L时的肌钙蛋白Ⅰ浓度:缺氧组分别为(0.789±0.066),(1.198±0.101),(1.979±0.151),(3.714±0.288)μg/L;未缺氧组分别为(0.332±0.034),(0.377±0.054),(0.527±0.057),(0.867±0.077)μg/L,P<0.05犦。③细胞上清超氧化物歧化酶、丙二醛含量变化:各组丙二醛含量的变化趋势与肌钙蛋白Ⅰ相似,随C-反应蛋白浓度的增加而增加,而超氧化物歧化酶活力则随C-反应蛋白浓度的增加而降低。④免疫组织化学结果显
- 刘剑南陈相健戴健马继政杨笛张寄南
- 关键词：C-反应蛋白质心肌细胞缺氧
- 应用聚合酶链反应技术构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体被引量：1
- 2005年
- 目的:利用聚合酶链反应定点突变技术构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体。方法:实验于2005-03/06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。选择南京医科大学第一附属医院体检中心健康体检者血标本提取人基因组DNA,设计、合成两对引物,将突变位点设计在引物内,突变位点包含限制性内切酶BseNI酶切位点,采用聚合酶链式反应定点突变技术,应用高保真TaqDNA聚合酶,通过三轮聚合酶链扩增反应对血小板反应素1基因的第13外显子进行扩增,将第13外显子碱基8831A置换为G,对最终扩增产物进行酶切鉴定和测序。结果:获得人血小板反应素1第13外显子编码钙结合域突变体,经酶切鉴定和测序分析,除引入突变点产生预期A8831→G突变外,其余碱基序列无改变。结论:采用聚合酶链反应体外定点突变技术,成功构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体,为研究血小板反应素1基因该位点突变导致血小板反应素1蛋白的结构、功能变化奠定了基础。
- 戴健马继政刘剑南陈相健杨志健杨笛张寄南
- 关键词：聚合酶链反应
- KLOTHO基因C-1818T多态性与老年急性冠脉综合征的关联研究
- 2009年
- 目的观察中国苏皖地区汉族老年（≥60岁）人群KLOTHO基因第四外显子C-1818T多态性分布，探讨其与老年人急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）的可能关系。方法采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）及基因芯片（gene mieroarray）技术，检测272例老年ACS患者（ACS组）和139例老年非冠心病者（对照组）的KLOTHO基因C-1818T多态性。结果与对照组相比，ACS组CC、TT基因型以及T等位基因型频率分布无显著差异，CT基因型频率明显升高（P=0．031）。经多元logistie回归并调整相关危险因素后发现，CT基因型与老年人特别是老年男性ACS的发病相关联。结论在中国苏皖地区汉族老年人群（特别是老年男性）中，KIDTHO基因C-1818T多态性CT基因型与ACS的发病存在相关性。
- 何国平金鸣锋高磊杨进王俊宏沈丽娟戚传平杨国英杨笛张寄南
- 关键词：KLOTHO基因多态性急性冠脉综合征
