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噬菌体展示技术筛选副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的抗原表位被引量：1: 2013年; 为了研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P5的抗原表位,应用噬菌体展示随机12肽库,以抗HPS外膜蛋白P5的单克隆抗体作为固相分子,进行了3轮筛选。对随机挑选出的10个分离间隔良好的噬菌斑进行ELISA和Western blot等检验,最终确定了4个各结果均为阳性的优势短肽。将4个短肽序列与GenBank中HPS外膜蛋白p5的序列进行比对分析,发现这些序列没有同源性或同源性较低,但竞争ELISA结果显示这些短肽与单抗的结合都能够被外膜蛋白P5有效的抑制。以上结果显示,通过噬菌体展示技术成功获得了4个HPS外膜蛋白P5的模拟表位,为后期开展以抗原表位为基础的诊断、表位疫苗等研究提供了依据。; 许达李春玲李淼宋帅杨冬霞陈金顶; 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白噬菌体展示模拟抗原表位

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定被引量：4: 2014年; 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应，同时可以用于特异性的血清学诊断，本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1（1～204aa），P5F2（170～296aa）及P5F3（280～371aa）3个片段，PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a（＋）中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段（280—371aa）是OmpP5的免疫优势决定区。为了进-步对该免疫优势决定区进行抗原表住鉴定，设计了-套11个部分重叠的短肽，这些短肽覆盖全部280～371aa片段。每-个短肽合成1对寡核苷酸链，退火后插入表达载体pGEX-6p-1，与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描，鉴定出其表位位于”。TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPSOmpP5上的-个抗原表位，为建立-种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础，同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制，以及研究病原茵感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。; 李淼李春玲岳磊宋帅杨冬霞; 关键词：副猪嗜血杆菌抗原表位

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广东省农业科技重大专项资助项目(2011A020101008)