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蓝耳病抗独特型单链抗体的构建及表达: ＜正＞PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒,冠状病毒科动脉炎病毒属,含有6个结构蛋白。其中表面蛋白（GP5）和基质蛋白（Matrix）可能是诱导中和抗体的主要病毒抗原。本课题组的前期研究发现感染了PRRSV的猪血清中有...; 于颖王刚王伟伟周恩民; 文献传递

PRRSV Nsp2高变区基因的表达及免疫学特性鉴定被引量：3: 2011年; 本研究分别扩增从"高热病"猪体内分离株(TA-12)及美洲经典株ATTC-VR2332 PRRSV Nsp2基因的高变区,亚克隆至表达载体pET-28a中,转化至E.coliBL21中,在IPTG的诱导下进行表达。用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定。表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,对其免疫原性进行研究。建立了以纯化的重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA,确定了临界值,用建立的ELISA方法并对400份猪血清进行了检测和应用。结果表明,成功的表达了分离株TA-12及ATTC-VR2332 Nsp2基因的高变区。表达蛋白纯化分别免疫小鼠后,获得多克隆抗体,其抗体效价均为1∶100000。优化的ELISA条件为:包被缓冲液为磷酸盐缓冲液,800 ng/孔,血清样品稀释浓度为1∶100。临界值为0.4。血清检测结果表明以两种蛋白为包被抗原均为阳性的血清最多,占到总数的58.5%,前者阳性后者阴性的血清阳性率28%,前者阴性后者阳性的血清阳性率8.75%,二者均为阴性的占到4.75%。为建立区别两种毒株的鉴别诊断间接ELISA试剂盒奠定基础。; 马利宏肖一红吕军华王伟伟董施伟周恩民; 关键词：PRRSV NSP2 免疫学 ELISA

PRRSV SD-TA变异毒株的分离及序列分析被引量：2: 2010年; 从猪＂高热病＂病料中分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒（SD-TA株）,该病毒能够被抗PRRSV N蛋白单克隆抗体所识别。根据GenBank PRRSV经典株（VR-2332）和变异株（JXA1）基因序列分别设计合成了10对引物,利用RT-PCR扩增其基因序列,分别得到了预期的基因片段,将扩增的cDNA片段克隆入pMD18-T载体并测序。应用DNASTAR软件分析,与国内外已发表毒株的序列进行比较。结果显示,与美洲型相比,PRRSV SD-TA株相应基因核苷酸同源性为89.3%-99.1%,并且在Nsp2上缺失了30个氨基酸;与欧洲型代表毒株LV株相比同源性为59.9%。遗传关系表明：SD-TA株属于高致病性变异株。; 邱洪凯曹丙蕾肖一红周恩民; 关键词：PRRSV 间接免疫荧光基因变异分析

PRRSV新型细胞受体R-5功能表位的初步鉴定: 猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）引起的,以高死亡率为特征、严重危害世界养猪业的病毒病。自发生以来,给...; 刘宁宁刘岳王伟伟周恩民; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒受体多肽; 文献传递

一株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及ORF5基因序列与国内外毒株的分析和比较被引量：1: 2009年; 分析一株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5基因遗传变异情况及与国内外其他毒株比较为指导当地生产提供一定依据,通过常规病毒检测和分离方法,从2008年山东无名高热病猪送检样品肺部组织中检测并分离PRRSV。根据PRRSV美洲经典株VR-2332的ORF5基因设计特异引物,利用RT-PCR和基因克隆ORF5基因,分析其与国内外PRRSV毒株差异。经过细胞病变和间接免疫荧光检测证明所分离到的PRRSV是一山东地方流行毒株,命名为SD-4。通过分析ORF5基因序列及与其它毒株的比较,将北美洲株分为Ⅰ亚群和Ⅱ亚群。SD-4的核苷酸与Ⅰ亚群和Ⅱ亚群及欧洲毒株相比同源性分别为87.4%～89.9%,92.7%～99.2%和63.7%～63.8%。其氨基酸序列的同源性相比分别为85.1%～91.0%,90.5%～99.5%和56.7%～57.7%。进化树分析结果表明SD-4与高致病性毒株JXA1,HUB1,HEB1和SY0608的亲缘关系很近。PRRSV山东分离株SD-4属于美洲经典毒株,可能为高致病性PRRSV毒株。; 李晓静周恩民赵钦肖一红马利宏; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 PRRSV ORF5 同源性

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