国家自然科学基金(30901460)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
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- D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克隆、表达、鉴定及其免疫原性初探被引量：5
- 2014年
- 目的获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白，并鉴定其免疫原性。方法PCR扩增目的基因，将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中，连接产物转化入大肠埃希菌DH5c~，提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定。再将重组质粒转化人大肠埃希菌BL21并诱导表达，Western印迹鉴定目的蛋白，谷胱甘肽巯基转移酶（GST）磁珠纯化pgp3-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫新西兰家兔，Western印迹检测抗体与pgp3蛋白的结合，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗体效价。结果克隆目的基因序列长度为795bp，与基因库中一致，Western印迹显示目的蛋白相对分子质量为54000，并得到纯化蛋白。所得兔血清可识别pgp3蛋白，ELISA检测多克隆抗体效价达1：25600。结论成功表达具有强免疫原性的pgp3-GST融合蛋白，为进一步研究奠定基础。
- 孔杰孙毅娜赵乐然肖萌王敬李卓然刘原君刘全忠
- 关键词：衣原体沙眼重组融合蛋白质类免疫法
- 衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1在D型沙眼衣原体外膜中结合位点的检测被引量：5
- 2012年
- 目的发现噬菌体phiCPGl衣壳蛋白Vpl在沙眼衣原体中的结合位点，为理解噬菌体与衣原体的相互作用提供线索。方法诱导表达噬菌体phiCPGl的衣壳蛋白Vpl，通过胶回收进行目的蛋白的纯化，复性后以Far-Western印迹技术检测Vpl是否能与衣原体外膜中重组多形外膜蛋白（rPmp）家族及主要外膜蛋白（MOMP）结合。结果在大肠埃希菌中成功表达蛋白Vpl；抗Vpl的单克隆抗体作为一抗进行Western印迹，结果无特异性条带出现，可见针对Vpl的单克隆抗体不与任何一种rPmp结合。Far-Western印迹结果显示，在rPmpI的位置出现明显的条带，在相对于其他rPmp和MOMP的位置无特异性条带的出现，证实Vpl能特异结合D型沙眼衣原体标准株的外膜蛋白rPmpI。结论沙眼衣原体外膜中有Vpl的结合位点，可能通过和rPmpI的结合从而特异性地与沙眼衣原体结合。
- 刘原君孙毅娜姚卫锋李燕李卓然卫酒荣刘全忠
- 关键词：细菌噬菌体细菌外膜蛋白质类
- 甲状腺激素转运体MCT8的病理生理作用被引量：1
- 2016年
- 甲状腺激素（THs）进出细胞需要转运体蛋白的介导。单羧酸转运体（MCT）8是介导L进入神经元的主要转运体蛋白，是迄今为止唯一具有明确的临床意义、在转运THs入脑中起着重要作用的转运体蛋白，其编码基因（SLC16A2）突变导致了艾伦一赫恩登-达得利综合征（AHDS），以严重的神经运动发育迟滞和高L、低T4的血清学改变为临床特征。Mct8基因敲除的小鼠模型能够完全复制人MCT8基因突变的血清学改变，但神经症状轻微，部分解释了MCT8缺陷患者的临床表现，为THs转运体病理生理作用的研究提供依据。
- 孙毅娜叶艳李永梅林来祥
- 不同程度碘缺乏母鼠对胎鼠脑双皮质素、突触素p38基因表达的影响
- 2012年
- 目的 探讨不同程度碘缺乏引起的母亲甲状腺功能异常对胎儿脑发育标志物双皮质素（DCX）、突触素p38基因表达的影响.方法 Wistar雌鼠按每日总碘供给量（自来水中添加不同浓度的KI,食用低碘饲料）分为碘适宜组（AI）、轻度缺碘组（MiID）、中度缺碘组（MoID）、重度缺碘组（SID）.喂养3个月后交配,检测妊娠20天母鼠尿碘、甲状腺组织学、血清TSH和甲状腺激素（TH）水平,胎脑DCX和突触素p38 mRNA和蛋白表达水平.结果 （1）碘缺乏组母鼠尿碘随饮食碘供给量的减少而降低.与AI组比较,SID组孕鼠血清TSH水平升高[（2.95±1.70对1.31 ±0.55）mIU/L,P＜0.05],TT4[（14.3±4.1对28.4±19.3）nmol/L,P＜0.05]和FT4[（10.8±3.6对20.2±8.0）pmol/L,P＜0.01]降低；MoID、MiID组TSH水平呈升高趋势,TT4和FT4呈降低趋势；TT3、FT3水平各组差别无统计学意义.（2）SID组甲状腺呈现典型的小滤泡增生性甲状腺肿改变、胶质缺如；MoID组呈中度小滤泡增生性变化、胶质减少；MiID组仅呈轻度细胞增殖,但滤泡大小与AI组相似、胶质减少不明显.（3）与AI组比较,各缺碘组胎脑DCX mRNA表达呈升高趋势,MoID组升高有统计学意义（P＜0.01）,蛋白表达在各碘缺乏组均明显上调（P＜0.01）；而突触素p38 mRNA和蛋白表达在各碘缺乏组均显著下调（P＜0.01）.结论 母亲碘缺乏使胎儿脑神经元发育和突触生长受到损伤,其损伤随母亲的缺碘程度而逐渐加重；尤其母亲轻、中度碘缺乏就能明显抑制胎儿脑发育应引起关注.
- 孙毅娜张璐李永梅叶艳林来祥卫酒荣阎玉芹
- 关键词：碘缺乏突触素
- 宫内暴露于甲状腺功能不足对新生仔鼠脑神经元发育的影响被引量：2
- 2019年
- 目的探讨新生仔鼠在子宫内暴露于甲状腺功能不足后,其脑神经细胞单羧酸转运体8(MCT8)、双皮质素(DCX)、音猬因子(SHH)及活性调节细胞骨架相关蛋白(ARC/ARG3.1)表达的改变。方法Wistar孕鼠按体重随机分成对照组和饮水添加1 ppm、3 ppm或5 ppm丙基硫尿嘧啶(PTU)的甲状腺功能不足组。以1和7日龄(PND1和PND7)新生仔鼠为研究对象,检测其甲状腺功能及甲状腺形态学改变,Western印迹或免疫组化检测大脑皮质和海马MCT8、DCX、SHH、ARC/ARG3.1的蛋白表达水平。结果(1)PND1仔鼠全血总甲状腺素(TT4)水平在PTU 3 ppm和5 ppm组显著降低(P<0.05, P<0.01);PND7仔鼠仅PTU 5 ppm组促甲状腺激素(TSH)显著升高、游离甲状腺素(FT4)显著降低(均P<0.05)。(2)两日龄PTU组新生仔鼠的甲状腺滤泡数密度及平均体积、表面积和截面积,均明显大于同日龄对照组(P<0.05或P<0.01)。(3)在皮质及海马组织中,两日龄仔鼠MCT8蛋白均随着PTU暴露剂量增加而增加,PND1的5 ppm组升高有统计学意义(P<0.05);PND7仔鼠皮质SHH蛋白表达随PTU暴露剂量增加呈下调趋势;两日龄仔鼠皮质DCX蛋白表达均随PTU暴露剂量增加呈上调趋势。仔鼠海马CA1区ARC/ARG3.1蛋白仅在PND1的PTU 1 ppm组表达较对照显著升高(P<0.05)。结论宫内暴露于甲状腺功能不足的新生仔鼠,随着甲状腺功能的逐渐恢复,其受损的神经元会有所改善,但仍不能完全恢复至正常水平。
- 韩圆圆谢望林来祥李永梅叶艳钱明孙毅娜
- 关键词：妊娠期脑发育
- Iodine deficiency up-regulates monocarboxylate transporter 8 expression of mouse thyroid gland被引量：2
- 2014年
- Hu ZhimeiZhuo XiaohuaShi YananLiu XinYuan JihongLi LanyingSun Yina
- 关键词：促甲状腺激素碘缺乏MRNA表达WESTERN印迹
- 沙眼衣原体质粒蛋白pgp3多克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的表达并纯化D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3，制备鼠源性多克隆抗体。方法诱导表达pgp3蛋白，经谷胱甘肽-S-转移酶（GST）磁珠纯化后免疫BALB／c小鼠，制备多克隆抗体，Western印迹、细胞免疫荧光鉴定抗体的特异性，间接ELISA法测定抗体效价。结果得到纯化的pgp3蛋白，获得鼠源性多克隆抗体，经Western印迹和细胞免疫荧光鉴定抗体可特异性结合pgp3蛋白，ELISA测定所得抗体效价为1：819200。结论成功制备具有高效价、高特异性的抗pgp3多克隆抗体。
- 孔杰孙毅娜赵乐然肖萌王敬马璟玥刘原君刘全忠
- 关键词：质粒
