国家重点实验室开放基金(2008SKLID308)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：白慧玲刘瑞敏马远方季泽俊孙颖川更多>>
- 相关机构：河南大学南阳医学高等专科学校第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用噬菌体表面展示技术克隆抗人DR5抗体可变区基因
- 2011年
- 目的:利用噬菌体表面展示技术制备抗人DR5单链抗体。方法:从抗DR5杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv基因。将scFv与PAK100载体通过相同的酶切位点连接后,转化大肠杆菌XL1-Blue,经VSCM13辅助噬菌体拯救,构建成鼠抗人DR5单链抗体库。以DR5作为固相筛选分子,对噬菌体展示肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"生物筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选10个单克隆噬菌体扩增后进行ELISA鉴定,对所筛选克隆进行DNA序列测定和通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性。结果:经过3轮筛选后,对随机选取的10个噬菌体克隆进行鉴定,其中4个具有和DR5结合的特异性。结论:利用噬菌体表面展示技术筛选单链抗体,结果更加可信。
- 刘瑞敏王明丽季泽俊刘峰涛白慧玲马远方
- 关键词：噬菌体展示技术单链抗体死亡受体5
- 抗人DR5单链抗体噬菌体展示文库的建立和筛选被引量：3
- 2011年
- 目的应用噬菌体展示技术构建抗人DR5(death receptor 5,DR5)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗DR5 scFv。方法利用重组人DR5抗原免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸PCR将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ位点定向插入PAK100噬菌粒载体,转化E.coli XL1-Blue,构建了库容为1×106的抗DR5单链抗体库。对抗体库进行5轮富集筛选后,phage-ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析。结果抗DR5 scFv基因序列长747 bp,编码249个氨基酸,具有和DR5结合的特异性。结论本文利用噬菌体抗体库筛选到了抗DR5 scFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础。
- 刘瑞敏季泽俊孙颖川张爱红朱诗白白慧玲马远方
- 关键词：噬菌体展示技术死亡受体5单链抗体
