河南省高校科技创新团队支持计划(2009HASTIT022)
- 作品数：13 被引量：36H指数：4
- 相关作者：宁黔冀王文锋夏西超杨洪刘方更多>>
- 相关机构：河南师范大学新乡医学院南阳医学高等专科学校更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 日本沼虾含硒谷胱甘肽过氧化物酶全长克隆及表达分析被引量：6
- 2012年
- 为探讨日本沼虾(Macrobrachium nipponense)的免疫机制及含硒谷胱甘肽过氧化物酶(Se-GPx)在甲壳动物解毒和免疫应激反应中的作用,本文采用RACE法克隆了日本沼虾Se-GPx cDNA全长,其cDNA全长为908 bp,5′-UTR的长度为91 bp,3′-UTR长为256 bp,包括1个保守的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS)和1个polyA尾,开放阅读框长度为561 bp,编码由186个氨基酸组成的多肽,其中,第39个氨基酸为TGA编码的硒代半胱氨酸。同源性和相似性分析显示日本沼虾的Se-GPx在甲壳动物中与罗氏沼虾相似度最高,在脊椎动物中与GPx1和GPx2家族的相似度比较高。日本沼虾Se-GPx基因在血细胞、肝胰腺、肌肉、卵巢、表皮以及大颚器官中都有表达,尤其在血细胞中表达量相对较高。用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后3h和6h,血细胞Se-GPx基因表达量显著升高。结果表明,日本沼虾Se-GPx作为一种重要的抗氧化酶,在维护组织正常功能方面及免疫应激反应中发挥重要作用。
- 王雪参王文锋刘方宁黔冀
- 关键词：日本沼虾全长克隆
- 日本沼虾血蓝蛋白基因cDNA全长克隆及表达分析被引量：8
- 2012年
- 目的克隆日本沼虾血蓝蛋白基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)从肝胰腺中克隆血蓝蛋白基因cDNA全长序列,用生物学软件对其序列进行生物信息学分析,时空表达分析采用实时荧光定量PCR方法。结果日本沼虾血蓝蛋白基因cDNA全长2 151 bp,包含14 bp的5'UTR、148 bp的3'UTR和189 bp的开放阅读框(ORF)。ORF编码663个氨基酸,预测分子量为76.65kD,理论等电点为5.42,含有典型的3个血蓝蛋白结构域和2个保守的铜离子结合位点。与淡水螯虾、凡纳滨对虾血蓝蛋白相似性分别为70%和63%。该基因在肝胰腺中的相对表达量最高,肌肉和血细胞表达较弱,大颚器官、表皮和卵巢几乎不表达;肝胰腺血蓝蛋白基因的表达量在蜕皮间期最高,蜕皮后期和蜕皮前期较低;嗜水气单胞菌刺激后肝胰腺中的表达量显著增加。结论与其他甲壳动物相似,日本沼虾血蓝蛋白基因具有典型的结构域和保守的铜离子结合位点,在蜕皮间期的肝胰腺中呈高表达,是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。
- 王文锋夏西超王雪参吕黎杨洪宁黔冀
- 关键词：血蓝蛋白CDNA末端快速扩增实时荧光定量PCR日本沼虾
- 保幼激素拮抗物KK-42对凡纳滨对虾HMGR表达的抑制被引量：1
- 2010年
- 为研究保幼激素拮抗物KK-42促生长的分子机制,实验克隆出甲基法呢酯(MF)合成的关键酶——3-羟-3-甲基-戊二酰还原酶A(HMGR)部分mRNA序列,并研究该基因时空表达以及KK-42对其表达的影响。将体长3.5～5.0cm凡纳滨对虾幼虾随机分为2组,分别用1.95×10-4mol/L的KK-42溶液或不含KK-42的溶液浸泡处理1min,之后在相同条件下常规饲养。不同组织中HMGR mRNA水平定量分析采用real-timePCR,血淋巴中MF滴度测定采用正相高效液相色谱法。结果显示,HMGR mRNA水平在大颚器官(MO)最高,其次是眼柄,肌肉和肝胰腺水平最低。在实验观察期间,眼柄与MO两种组织中HMGR的表达模式明显不同,前者各时间点mRNA水平变化较小,无统计学差异(P>0.05);后者mRNA含量分别在第1、7天显著高于第0天;实验期间血淋巴MF滴度逐渐升高。KK-42处理可显著抑制HMGR表达,但眼柄和MO中HMGR转录的下调模式仍不相同,前者mRNA水平在各时间点之间没有明显差异(P>0.05);而在MO下调幅度出现明显波动,其中在第1和7天,mRNA含量分别下降了82.5%和90.7%;血淋巴MF滴度逐渐下降。结果表明,KK-42可显著抑制凡纳滨对虾多种组织(尤其是MO和眼柄)HMGR转录,降低血淋巴MF滴度,这可能是其促生长的机制之一。
- 夏西超王文锋李昕宁黔冀
- 关键词：凡纳滨对虾
- 咪唑类物质KK-42提高日本沼虾成活率机制的研究被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨KK-42提高感染嗜水气单孢菌后的日本沼虾成活率的机制.方法：首先将虾分为两组,分别用1.95×10^-4mol/L的KK-42溶液（处理组）或不含KK-42的溶液（对照组）浸泡1 min后取出,放置养殖水槽中饲养12h后,进行嗜水气单胞菌感染实验,每组又分别分为两个亚组（Challenged和Unchallenged）;于感染后的不同时刻,分别测定日本沼虾的成活率、细菌清除率及proPO基因（甲壳动物重要的免疫因子）表达水平和酶活力的变化.结果：KK-42预处理可以提高感染嗜水气单孢菌后的日本沼虾的成活率及细菌清除率;KK-42处理后3、12和24 h,proPO基因表达明显提高,PO活力也于6～48 h持续升高,在24 h达到最高值,是对照组的2.3倍.嗜水气单胞菌刺激也可诱导血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力的增加,但对照组分别在菌注射后3h和6 h,mRNA表达突然升高,而KK-42实验组则在整个时期处于缓慢升高趋势;PO活力变化趋势和基因表达相一致.结论：KK-42可以诱导proPO mRNA表达水平及PO活力的升高,并能提高沼虾细菌清除能力,可能是KK-42提高日本沼虾成活率的分子机制之一.
- 王文锋关建义郭爱莲杨洪宁黔冀
- 关键词：嗜水气单胞菌
- KK-42对南美白对虾甲基转移酶基因转录的影响被引量：2
- 2010年
- 采用浸润法,用1.95×10-4mol/L的保幼激素拮抗物KK-42处理平均体长3～5cm南美白对虾,而后常规养殖,不同时间取样,解剖大颚器官.RNA的提取采用适当改进的TRIzol一步法,Real-timePCR测定法呢酸O-甲基转移酶mRNA水平.结果:采用改进的TRIzol一步法提高了大颚器官组织RNA的产率和质量;KK-42处理后5d、10d,南美白对虾大颚器官法呢酸O-甲基转移酶mRNA水平均比同期对照组低86%和82%,表明KK-42处理的早期即可显著抑制幼虾法呢酸O-甲基转移酶的基因转录.
- 李文娟夏西超宁黔冀
- 关键词：南美白对虾
- 日本沼虾酚氧化酶原基因cDNA的全长克隆及表达分析被引量：4
- 2012年
- 目的克隆日本沼虾酚氧化酶原(proPO)基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(RACE)技术从血细胞中克隆proPO基因cDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析;proPO基因时空表达分析采用RT-PCR和Real-time PCR方法;腹部肌肉注射嗜水气单胞菌(5.0×109/L)诱导酚氧化酶(PO),20μl/只,注射后3、6、12、24h取其血淋巴,分别测定血细胞proPO mRNA水平及血清酚氧化酶(PO)活力。结果日本沼虾proPO基因cDNA全长2428bp,包含71 bp的5’UTR、344 bp的3’UTR和2013bp的开放阅读框(ORF)。ORF编码671个氨基酸,预测蛋白分子量为76.5kD,理论等电点(pI)约为7.31;含有2个保守的铜离子结合位点和6个组氨酸残基、1个蛋白酶水解位点和硫酯样的基序(GCGWPRHM);含有3个血蓝蛋白结构域;与罗氏沼虾proPO的相似性最高,为93%,与其他甲壳动物proPO相似性为50%～53%。该基因表达具有组织特异性,血细胞最高,肝胰腺有较弱表达,肌肉、鳃、肠、大颚器官和卵巢不表达;血细胞proPO基因的表达量在蜕皮前期(D0/1)最高;嗜水气单胞菌刺激后6 h血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力均显著增加。结论与其他甲壳动物相似,日本沼虾proPO基因具有2个保守的铜离子结合位点;其表达呈组织特异性,最高出现在血细胞;在蜕皮周期的前期(D0/1)血细胞表达量最高;嗜水气单胞菌可诱导proPO基因的表达以及PO活力,提示该基因是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。
- 王文锋马建敏杨洪刘方陈香丽宁黔冀
- 关键词：酚氧化酶原实时荧光定量聚合酶链反应日本沼虾
- 凡纳滨对虾细胞色素P450家族新基因CYP4V18的克隆及KK-42对其转录的抑制被引量：2
- 2012年
- 为探讨咪唑类物质KK-42促进凡纳滨对虾(Litopenaeaus vannamei)生长的分子机制,本研究克隆出与蜕皮和生长相关的CYP4V18基因的全序列,研究了该基因的时空表达,并结合测定血淋巴20-羟基蜕皮甾酮(20E)滴度。将体长3.5～5.0 cm凡纳滨对虾幼虾随机分为2组,分别用1.95×10-4mol/L的KK-42溶液或不含KK-42的溶液浸泡处理1 min,之后在相同条件下常规饲养。CYP4V18 mRNA水平定量分析采用real-time PCR,血淋巴中20E滴度测定采用反相高效液相色谱法。结果显示,CYP4V18开放阅读框为1 545 bp,编码515个氨基酸,包含CYP450保守序列;系统进化显示,CYP4V18与CYP4家族基因的亲缘关系最近。CYP4V18 mRNA水平在肝胰腺最高,分别是脑、Y-器官和肌肉的4、26和32倍。KK-42处理可显著抑制CYP4V18表达,在第2、4和6天分别降低了72.3%(P<0.05)、82.6%(P<0.05)和187.7%(P<0.01)。与同期对照组相比,KK-42处理之后血淋巴20E滴度在第2、4和6天分别升高1.7%、6.5%和13.5%。结果表明,KK-42可显著抑制凡纳滨对虾肝胰腺CYP4V18转录,升高血淋巴20E滴度,这可能是KK-42促生长机制之一。
- 夏西超王文锋杨洪宁黔冀
- 关键词：凡纳滨对虾表达下调
- 日本沼虾cytMnSOD和mtMnSOD基因全长cDNA克隆及表达被引量：1
- 2012年
- 利用RACE技术从日本沼虾肝胰腺中克隆了cytMnSOD和mtMnSOD基因cDNA全长序列。cytMnSOD基因cDNA全长1 233 bp,开放阅读框为858 bp,编码286个氨基酸,N端含有60个氨基酸残基组成的延伸区;mtMnSOD基因cDNA全长1 113 bp,开放阅读框为654 bp,编码218个氨基酸,N端含有20个氨基酸残基组成的信号肽;cytMnSOD和mtMnSOD预测蛋白分子量及等电点分别为31.33、24.05 ku和5.62、7.12。日本沼虾cytMnSOD推导的氨基酸序列与其mtMnSOD的相似性为40%,二者均含有MnSOD的特征肽段(DVWEHAYY)、4个Mn2+结合位点和2个N-糖基化位点。Real-time PCR结果表明,cytMnSOD和mtMnSOD在日本沼虾肝胰腺、肌肉、血细胞、大颚器官、卵巢和鳃等组织均有表达,其中肝胰腺表达量最高;肝胰腺cytMnSOD和mtMnSOD基因的表达量在蜕皮间期最高,蜕皮后期和蜕皮前期较低。嗜水气单胞菌刺激后3 h,肝胰腺cytMnSOD和mtMnSOD的表达量显著增加,推测MnSOD是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。
- 王文锋关建义吕黎刘方杨洪宁黔冀
- 关键词：日本沼虾克隆
- KK-42对凡纳滨对虾物质储备相关酶类基因表达的影响被引量：4
- 2013年
- 甲壳动物生长发育总是与蜕皮联系在一起的[1]。为了完成蜕皮,顺利实现生长,甲壳动物在蜕皮间期进行快速大量取食,临近蜕皮前取食逐渐减少,直至蜕皮时停止,待蜕皮后动物具备了坚硬外壳,又开始缓慢取食[2 3]。
- 夏西超杨洪宁黔冀吕黎吕艳杰
- 关键词：凡纳滨对虾基因表达
- 凡纳滨对虾热休克蛋白90基因cDNA全长克隆及表达分析被引量：6
- 2012年
- 为探究咪唑类物质KK-42提高凡纳滨对虾存活率的机理,克隆出HSP90全基因序列,采用real-time PCR法研究该基因的时空表达状况。将体长3.5～5.0cm的凡纳滨对虾幼虾随机分成2组,分别用1.95×10-4 mol/L的KK-42溶液和不含KK-42的溶液浸泡1min后,在相同条件下常规饲养。试验结果显示,凡纳滨对虾HSP90开放阅读框为2160bp,编码720个氨基酸,包含HSP90家族的保守序列。HSP90在凡纳滨对虾脑、肌肉、眼柄和肝胰腺中均有表达,其中肝胰腺中的表达水平较高。KK-42处理后,肝胰腺中HSP90mRNA水平升高69.1%以上(P<0.05),其中第2d和3d,mRNA含量分别升高了505.5%和481.7%(P<0.01)。结果表明,KK-42能诱导凡纳滨对虾肝胰腺HSP90的表达,这可能是KK-42提高凡纳滨对虾存活率的机制之一。
- 夏西超杨洪王文锋李昕宁黔冀
- 关键词：凡纳滨对虾热休克蛋白90
