河南省高校科技创新团队支持计划(2009HASTIT010)
- 作品数：13 被引量：132H指数：7
- 相关作者：刘兴友潘耀谦朱国坡郭延锋高均伟更多>>
- 相关机构：河南科技学院河南农业大学石河子大学更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划国家自然科学基金河南省杰出人才创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡传染性支气管炎病毒(IBV)ZZ2004株核衣壳蛋白基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2014年
- 本研究旨在克隆并表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的核衣壳蛋白(N)。根据IBV ZZ2004株的N基因设计1对引物,提取IBV ZZ2004株的RNA,利用RT-PCR技术扩增大小约1.23kb的片段,将其插入克隆载体pGEM-T构建pGEMT-N。将pGEM-T-N用EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切,将酶切后的N基因片段克隆到表达载体pGEX-6P-1,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳,结果显示外源基因获得了表达且为可溶性蛋白;Western blotting检测结果显示N蛋白可与相应的IBV ZZ2004阳性血清发生特异性反应,结果表明N蛋白有一定的生物活性。本研究为IBV诊断试剂盒及新型IBV重组亚单位疫苗研制奠定基础。
- 贺会利徐敏余娟魏小兵闫艺婷勾肖晶刘兴友
- 关键词：核衣壳蛋白可溶性表达
- 鸡传染性支气管炎病毒弱毒株ZZ-V_(35)在鸡胚中的增殖规律被引量：1
- 2015年
- 为了研究鸡传染性支气管炎病毒弱毒株(IBV ZZ-V35)在鸡胚中的增殖规律,用尿囊腔接种法给11日龄的SPF鸡胚接种IBV ZZ-V35弱毒,并构建了阳性质粒,采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time PCR)法建立了标准曲线,分别检测感染鸡胚尿囊液中36、48、52、56、60、64、68、72、76、80、88、96、120、144h的病毒含量。结果显示,在鸡胚发育不同的时间点IBV ZZ-V35弱毒的拷贝数分别为1.416×106、1.791×106、2.056×106、3.027×106、3.664×106、1.854×106、1.380×106、1.109×106、7.976×105、5.408×105、2.958×105、2.512×105、4.365×104、1.130×104。研究发现,IBV ZZ-V35弱毒的拷贝数在60h达到最高值,即3.664×106。这为IBV ZZ-V35弱毒株疫苗的研究提供了新的依据。
- 闫艺婷潘耀谦王青勾肖晶刘静黄亚明杨激辉刘兴友
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒鸡胚尿囊液增殖规律
- 实时荧光定量PCR技术原理与应用被引量：46
- 2010年
- 实时荧光定量PCR(real-ti me fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的主要原理及目前在分子生物学领域,病原体和肿瘤等方面的检测和诊断应用进行了概述。
- 周晓丽朱国坡李雪华王艳玲刘兴友
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 细胞凋亡常用检测方法的研究进展被引量：14
- 2010年
- 近年来,细胞凋亡一直是生命科学和医学领域各专业的研究热点。作者综述了细胞凋亡的形态学、生物化学及分子生物学、酶学、免疫学和流式细胞仪法等常用的细胞凋亡检测方法,并对各种方法的优点及局限性进行了简要概述。
- 郭延锋高均伟朱国坡刘兴友
- 关键词：细胞凋亡
- 鸡传染性支气管炎病毒变异机制及致弱方法研究进展被引量：7
- 2013年
- 因鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因组RNA聚合酶缺乏校正功能和其特有的套式转录方式,IBV容易发生变异,导致新的变异毒株不断出现,使现有的疫苗难以完全满足预防的需要,这就要求根据流行特点不断研究新的疫苗。根据IBV的变异机制,利用鸡胚连续传代、改变生长温度和基因工程方法可人工获得致弱的IBV毒株,为研究IBV弱毒疫苗毒株奠定基础。论文就近几年来IBV的变异情况及致弱方法研究进展做一综述,为更好的预防IBV提供参考。
- 陈明艳余娟潘耀谦郭东光陈伶俐徐敏贺会利魏小兵刘兴友
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒
- 传染性支气管炎病毒的分子生物学特性及其弱毒疫苗的研究进展被引量：4
- 2015年
- 传染性支气管炎是一种急性、高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类疫病,对世界养禽业的发展造成了严重威胁。目前,传染性支气管炎的主要预防措施仍然是接种疫苗,但由于传染性支气管炎病毒具有血清型众多、变异速度快且交叉保护性弱等特点,使得传染性支气管炎的防制一直是养禽业面临的重大难题。文章主要对传染性支气管炎病毒的分子生物学特征及其弱毒疫苗的发展历程和免疫策略等方面进行了阐述,以期为新型传染性支气管炎弱毒疫苗的开发及应用提供科学参考。
- 闫艺婷勾肖晶刘静黄亚明杨激辉刘兴友
- 关键词：传染性支气管炎病毒S蛋白M蛋白N蛋白
- 鸡病毒性免疫抑制病的流行病学研究进展被引量：13
- 2010年
- 在细菌感染性、病毒感染性、自身免疫病、肿瘤等疾病的发生发展过程中普遍存在着免疫抑制作用,作者对鸡传染性法氏囊病、禽白血病、禽呼肠孤病毒病、网状内皮组织增殖症的流行病学及检测方法进行概况综述,希望对生产有所指导,对科研有所参考。
- 陈悦刘兴友
- 关键词：病毒免疫抑制流行病学
- 石蜡切片TUNEL法检测肉仔鸡法氏囊细胞凋亡的条件优化
- 2010年
- 从蛋白酶K的浓度、DAB显色时间、苏木素复染时间等对采用石蜡切片TUNEL法检测10日龄健康ROSS308肉仔鸡法氏囊组织内细胞凋亡的条件进行了优化。结果表明,TUNEL法最佳条件蛋白酶K浓度为20μg/mL,DAB显色时间为8 min,苏木素复染时间为10 s。优化后的石蜡切片TUNEL法,即60℃烤片5 h,20μg/mL蛋白酶K 37℃消化30 min,DAB显色8 min,苏木素复染10 s时,能特异地显示凋亡细胞为棕黄色,其他细胞核为蓝色,且对比明显,背景浅,组织结构完整清晰。
- 郭延锋李雪华付登峰胡建和王丽荣王三虎潘耀谦刘兴友
- 关键词：TUNEL法细胞凋亡法氏囊
- 鸡传染性支气管病毒ZZ2004株致SPF感染鸡小肠损伤的病理与超微病变研究
- 2012年
- 为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)ZZ2004株引起鸡生长缓慢的发病机理,本实验将100只7日龄SPF雏鸡平均分为两组。实验组经口服病毒进行感染,对照组口服生理盐水,通过临床检查、病理学检查及超微病变观察进行研究。病理解剖学检查表明,实验组鸡各肠段有不同程度卡他性出血性炎性变化。病理组织学显示,小肠绒毛变短,上皮细胞脱落,固有层内炎性细胞增多。扫描电镜观察表明,肠绒毛的游离端常断裂,固有层裸露,在肠上皮细胞之间有大量杯状细胞的开口,并见大块状的分泌物渗出。透射电镜检查显示,残存的肠上皮细胞的微绒毛严重破坏;粗面内质网脱颗粒,滑面内质网明显扩张,呈囊状或泡状,在内质网中出现大量病毒颗粒;核周隙扩张,在核质中能够检出成熟的病毒颗粒。本研究结果表明:IBV ZZ2004株可以在肠上皮细胞中增殖,引起肠的吸收上皮和肠绒毛的一系列退行性病变,从而导致感染鸡代谢障碍,生长缓慢。
- 朱广蕊潘耀谦夏银可银梅唐海蓉刘兴友
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒SPF鸡病理
- 沉默病毒编码的miRNA——新型抗病毒治疗法研究进展被引量：1
- 2012年
- miRNA是一类在转录后水平调节基因表达的非编码RNA。病毒编码的miRNA在调控病毒基因自身表达及病毒与宿主相互作用方面起着重要作用,这一类miRNA有助于提高病毒的致病性。因此,通过使用与病毒miRNA互补的单链核苷酸即抗miRNA寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotides,AMOs)来抑制病毒miRNA的表达,从而沉默其功能达到抑制病毒复制的效果,这可能成为一种治疗病毒性感染的新方法。文章描述了研究较深入的病毒miRNA与其功能及AMOs的修饰方式,并讨论了AMOs应用的可能性。
- 夏银可潘耀谦朱广蕊刘兴友
- 关键词：反义寡核苷酸RNA干扰
