国家自然科学基金(81072633)
- 作品数：10 被引量：14H指数：3
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- 碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心肌缺血再灌注不同时间肌浆网钙泵活性的影响
- 2013年
- 碘化N-正丁基氟哌啶醇（N-n-butyl haloperidol iodide,F2）是我课题组合成的一个新化合物（专利号：ZL96119098．1）。以往一系列研究表明，F2可以改善心肌缺血再灌注（ischemia／reperfusion，I／R）造成的血流动力学变化和酶学变化、缩小心肌梗死面积、减轻再灌注心肌组织炎症，对心肌I/R损伤具有全面的保护作用。
- 张艳美王春燕李伟秋刘幸平郑燕珊徐涵郑付春
- 关键词：碘化N-正丁基氟哌啶醇钙泵活性HALOPERIDOL肌浆网血流动力学变化心肌梗死面积
- 利用低氧/厌氧工作站建立H9c2细胞缺氧复氧模型的探讨被引量：5
- 2015年
- 目的利用低氧/厌氧工作站,结合不同的缺氧条件,探讨建立H9c2细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型的最佳方法。方法缺氧时将H9c2细胞置于低氧/厌氧工作站中,分别以完全培养基,无糖培养基和酸性缺氧液培养1、2、4、6、8 h,缺氧后换用完全培养基于培养箱中按常规条件培养1 h。流式细胞仪测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞生存率,倒置显微镜下观察H9c2细胞形态变化。结果与对照组比较,缺氧时以完全培养基和无糖培养基处理的H9c2细胞H/R后,细胞内ROS含量和细胞存活率随缺氧时间延长无明显改变,且倒置显微镜下未观察到明显的形态变化。缺氧时以酸性缺氧液处理的H9c2细胞,随H/R时程的延长,细胞内ROS含量不断增加(P<0.01),且细胞存活率逐渐降低(P<0.01),倒置显微镜下观察到细胞H∶1 h/R∶1 h后开始出现部分细胞皱缩,少量坏死细胞漂浮,随时间延长损伤加重;缺氧8 h后,细胞皱缩成圆形,大量坏死细胞漂浮,复氧1 h后可见细胞膜表面不平滑,复氧液中仍有少量坏死细胞漂浮。结论采用低氧/厌氧工作站,并结合酸性缺氧液,可成功建立重现性非常好的H9c2细胞H/R模型。
- 储倩雯李伟秋鲁诗史黄丹梅张艳美
- 关键词：H9C2细胞
- 活性氧调节心血管病理生理功能的研究进展被引量：3
- 2013年
- 适量的活性氧(ROS)在心血管生理状态下发挥重要的调节作用,过量的ROS则与多种心血管疾病的发生、发展密切相关。本文就ROS的代谢、在心血管生理情况下的调节、与心血管疾病及抗氧化剂应用前景作一综述。
- 廖晗张艳美
- 关键词：活性氧
- 维拉帕米对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用被引量：2
- 2013年
- 目的观察维拉帕米对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致损伤的作用及其机制。方法制作心肌细胞H/R损伤模型。倒置显微镜和透射电子显微镜下观察心肌细胞形态和结构的变化;双抗体夹心光化学法检测心肌细胞培养上清液中肌钙蛋白(cardiac troponin I,cTnI)的浓度;ELISA方法检测上清液中TNF-α的含量;Western-blot及Northern-blot方法分别检测培养心肌细胞中早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)基因和蛋白的表达水平。结果缺氧及复氧过程中给予维拉帕米能改善H/R所致心肌细胞形态结构的损伤,减轻H/R所致cTnI和TNF-α的漏出或分泌,抑制H/R所致的心肌细胞Egr-1基因和蛋白过量表达。结论维拉帕米对培养心肌细胞H/R损伤具有多重保护作用,其机制与其抑制Egr-1基因及蛋白过量表达有关。
- 张艳美李伟秋郑燕珊徐涵刘幸平郑付春
- 关键词：维拉帕米心肌细胞缺氧复氧早期生长反应基因-1
- 大鼠Egr-1探针的制备及应用
- 2014年
- 目的:制备大鼠早期生长反应基因(Egr)-1分子探针,为进一步应用其研究Egr-1在病变组织的表达奠定基础。方法:提取大鼠心肌组织总RNA,PCR扩增基因片段,克隆入pGEM-T Easy载体,行酶切和基因测序。用随机引物DNA标记法制备α-32P标记的Egr-1和β-actin探针。Northern blot和Western blot法分析验证探针的信号强度及特异性。结果:PCR扩增所得目的基因片段大小与理论预期一致,测序证实获得基因序列与实验设计吻合。Northern blot显示该探针可检测心肌组织中目标mRNA水平,Western blot法检测到大鼠心肌组织中Egr-1蛋白的存在。结论:本研究成功制备大鼠Egr-1 cDNA探针,可用于进一步研究Egr-1与相关心血管疾病病理机制的关系。
- 郑燕珊郑付春李伟秋徐涵张艳美
- 关键词：探针早期生长反应基因-1心肌组织基因
- 巨噬细胞缺氧复氧模型的制作方法及其生物学意义被引量：3
- 2013年
- 目的:建立一种简单可行的巨噬细胞缺氧复氧(H/R)模型。方法:采用制备缺氧液与氮气饱和相结合的方法制造细胞缺氧环境。巨噬细胞系RAW264.7分为对照组、缺氧(30、60和120min)复氧(15或30min)组及H/R+不同剂量的依达拉奉(EDA)组,借助于倒置荧光显微镜及流式细胞仪观测巨噬细胞内活性氧(ROS)浓度的变化,作为评判H/R模型成功与否的标准。结果:与各自对照组比,缺氧60min复氧15 min组即可引起ROS浓度明显升高(P<0.05),随着H/R时间延长,ROS生成呈进行性增加趋势。ROS清除剂EDA能剂量-依赖地抑制H/R所致ROS的大量生成。结论:应用制备缺氧液与氮气饱和相结合的方法可成功建立巨噬细胞H/R模型,该模型适于不同脏器缺血再灌注损伤共同分子机制的探讨及寻找共同治疗策略的相关研究。
- 张艳美廖晗郑付春李伟秋郑燕珊徐涵刘幸平石刚刚
- 关键词：巨噬细胞缺氧复氧氧化应激
- 心脏微血管内皮细胞缺氧复氧时氧化应激时效研究被引量：1
- 2014年
- 目的：研究不同缺氧复氧（H/R）时程下,心脏微血管内皮细胞内氧化应激的时效变化。方法：原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞。采用制备缺氧液与氮气饱和相结合方法制造细胞缺氧模型,复氧换用无血清DMEM培养基。培养的心脏微血管内皮细胞分为对照组和H∶1～4/R∶1 h组。用荧光显微镜、流式细胞仪定性或定量观测细胞内活性氧（ROS）水平。TBA法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛（MDA）产量。噻唑蓝法检测细胞生存率。结果：在H1～3 h内（R均为1 h）,细胞内ROS、MDA生成逐渐增加,H∶3 h/R∶1 h组ROS、MDA浓度最高,H∶4 h/R∶1 h组较H∶3 h/R∶1 h组ROS浓度降低（P〈0.05）,与对照组比,ROS、MDA浓度仍显著增加（P〈0.05）。细胞存活率随H/R时间延长逐渐降低。结论：H/R可造成心脏微血管内皮细胞内氧化应激水平增加,且在一定时程内呈进行性加重。
- 鲁诗史郑付春李振鹏李伟秋徐涵张艳美
- 关键词：心脏微血管内皮细胞缺氧复氧氧化应激活性氧
- 干扰RNA沉默早期生长反应基因-1对缺氧复氧时心肌细胞氧化应激水平的影响
- 2015年
- 目的:研究心肌细胞H9c2缺氧复氧(H/R)过程中,si RNA干扰早期生长反应基因(Egr)-1对心肌细胞氧化应激水平的影响。方法:制作H9c2 H/R模型,缺氧时用被高纯度氮气饱和30 min的缺氧液,复氧时用正常DMEM培养基。用Egr-1-si RNA转染技术降低Egr-1表达。培养的H9c2随机分为对照,H/R,转染对照+H/R和si RNA+H/R组。倒置显微镜下观察细胞转染效率,Western blot检测Egr-1蛋白表达水平的变化。TBA法检测细胞内脂质过氧化物丙二醛(MDA)浓度,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:倒置显微镜下可见Egr-1-si RNA转染效率达90%。H/R和转染对照+H/R组较对照组Egr-1蛋白表达明显增加、MDA浓度增加、SOD活力降低(P<0.05)。si RNA+H/R组较转染对照+H/R组Egr-1蛋白表达明显降低、MDA浓度明显下降、SOD活力明显增加(P<0.05)。结论:心肌细胞H/R时,干扰Egr-1蛋白表达能减轻细胞氧化应激损伤程度。
- 孙婷李振鹏李伟秋徐涵张艳美
- 关键词：心肌细胞缺氧复氧转染早期生长反应基因-1氧化应激
- 碘化N-正丁基氟哌啶醇通过非外钙机制抗心肌细胞缺氧复氧损伤
- 2013年
- 目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对大鼠心肌细胞无外钙缺氧/复氧(H/R)损伤的作用及其机制。方法建立无外钙(零钙液)的心肌细胞H/R模型,于缺氧液及复氧液中加入1×10-6mol/L的F2。倒置显微镜下观察细胞形态结构及搏动的变化;采用蛋白印迹法检测心肌细胞磷酸化ERK(p-ERK1/2)、总ERK1/2蛋白表达的变化。结果零钙液H/R可引起培养心肌细胞形态结构呈损伤性改变,包括胞体收缩、伪足减少和搏动无力;零钙液H/R可引起培养心肌细胞p-ERK1/2表达增加,但不影响总ERK表达,即可激活培养心肌细胞ERK1/2;F2可以改善零钙液H/R状态下心肌细胞形态结构的损伤。F2对零钙液H/R心肌细胞p-ERK1/2高表达具有抑制作用,但不影响总ERK的表达。结论 F2可通过非外钙依赖机制拮抗心肌细胞H/R损伤,这可能与其抑制零钙液H/R状态下ERK1/2的激活密切相关。
- 张艳美陈高勇李伟秋徐涵郑燕珊刘幸平郑付春
- 关键词：氟哌啶醇缺氧复氧
- Egr-1介导缺氧复氧心肌细胞氧化应激的研究
- 2015年
- 目的探讨心肌细胞缺氧复氧(H/R)时是否存在异常的ROS/JNK/Egr-1信号通路。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为以下组别:对照(control)组、control+ROS激活剂黄嘌呤氧化酶/次黄嘌呤(con+XO/HX)组、H/R组、H/R+ROS清除剂依达拉奉(EDA)组、H/R+ROS清除剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)组、H/R+JNK抑制剂SP600125组。建立心肌细胞H/R模型,采用不同浓度的EDA(2×10-6、2×10-5、2×10-4M)、NAC(5×10-4、2×10-3M、8×10-3M)、XO/HX(1m U/m L/1.2×10-4M,3m U/m L/3.6×10-4M,5m U/m L/6.0×10-4M)、SP600125(2×10-5M)处理细胞。流式细胞仪法检测H9c2心肌细胞内ROS水平。Western blot方法检测心肌细胞Egr-1、p-JNK、JNK蛋白表达的变化。结果 H/R组ROS水平及Egr-1蛋白表达均显著高于control组(P<0.05);2种中、高浓度的ROS清除剂EDA和NAC均能明显降低H/R所致的ROS的高水平和Egr-1蛋白的高表达(均P<0.05)。而2种低剂量的ROS清除剂对H/R所致的Egr-1蛋白表达以及ROS水平的影响差异无统计学意义。ROS水平与Egr-1蛋白表达呈高度正相关(r=0.91,P<0.01)。XO/HX各浓度组JNK激活程度显著高于对照组,且随着XO/HX浓度的增加,JNK激活程度越明显(均P<0.05)。H/R组JNK激活水平显著高于control组,使用ROS清除剂EDA与NAC和JNK抑制剂后,JNK活性明显降低(P<0.05)。H/R组Egr-1蛋白表达水平显著高于control组,而JNK抑制剂可以显著抑制H/R所致Egr-1蛋白的高表达(P<0.05)。结论 H/R可导致H9c2心肌细胞ROS/Egr-1信号通路激活,JNK的活化于此通路中起了重要的介导作用。
- 郝思远廖晗李振鹏李伟秋徐涵张艳美
- 关键词：缺氧复氧氧化应激早期生长反应基因-1C-JUN氨基末端激酶心肌细胞
