国家自然科学基金(39830420)
- 作品数：19 被引量：128H指数：8
- 相关作者：隋延仿叶菁曲萍郭爱林张立红更多>>
- 相关机构：第四军医大学北京大学邮电总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性细胞毒性T细胞表位的预测及合成鉴定被引量：13
- 2003年
- 目的 采用表位重建技术 ,对预测MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位结合活性进行研究。方法 用SYFPEITHI超基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法 ,筛选新的MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位作为候选表位。对预测的抗原表位进行多肽合成 ,并用HPLC进行纯化 ,质谱法 (MS)鉴定。候选表位与HLA A2位点的亲和力及结合稳定性用竞争结合抑制实验、T2结合稳定性实验及MHC 肽复合体稳定性实验测定。结果 用表位预测法筛选MAGE n抗原 5个HLA A2限制性CTL表位为候选表位。QLVFGIEVV(15 9 16 7)、IMPKTGFLI(195 2 0 3)和FLIIVLVMI(2 0 1 2 0 9) 3个表位具有较高的HLA A2结合力 (IC50 <15 μM)和结合稳定性 (DT5 0 >6h) ,可作为MAGE n抗原HLA A2限制性CTL候选表位进行进一步研究。结论 表位预测结合表位重建方法可提高肿瘤抗原CTL表位研究的效率。MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位经免疫学鉴定后 ,可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究 ,为临床肝癌特异性治疗奠定基础。
- 董海龙隋延仿叶菁李增山曲萍张秀敏陈广生禄韶英
- 关键词：肿瘤抗原MAGE-NHLA-A2细胞毒性免疫学鉴定
- 肝癌相关肿瘤抗原HLA-A2限制性CTL表位的预测被引量：8
- 2003年
- 目的 :预测肝癌肿瘤抗原的HLA A2限制性CTL表位 .方法 :选择与肝癌相关的肿瘤抗原MAGE 1,MAGE 3 ,MAGE 8,p5 3及AFP为研究目标 ,采用SYFPEITHI基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法进行HLA A 0 2 0 1限制性CTL表位预测 .结果 :共预测出与肝癌相关的肿瘤相关抗原的 3 5个HLA A2限制性CTL表位 .结论 :两种预测方法结果的一致性较好 ,所预测的 3 5个肿瘤抗原HLA A2限制性CTL表位经实验筛选、鉴定后 ,可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究 。
- 董海龙隋延仿
- 关键词：抗原肝细胞肿瘤T淋巴细胞表位
- 细胞因子及抗-CD3单抗对外周血单个核细胞活化作用被引量：1
- 2002年
- 孙婧陈红松张毅高燕王松霞李若冰王宇
- 关键词：细胞因子外周血单个核细胞诱导活化
- 液-质联用分析肝癌细胞HLA-A2类分子递呈的抗原肽被引量：3
- 2001年
- 目的 寻找MHCⅠ类分子递呈的、T淋巴细胞识别的肝癌抗原肽。方法 人肝癌细胞系hHCC以枸橼酸 磷酸盐 (pH3 .3 )液洗脱 ,洗脱物经粗分离 ,得到相对分子质量 (Mr) <50 0 0的各种多肽组分混合液 ;取各组分多肽分离液分别与抗原加工缺陷细胞 (T2 ,HLA A2 )进行细胞表位重建 ,加入特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL) ,5 1Cr释放法测杀伤活性 ;选活性值高的抗原肽组分进行反相高效液相色谱 质谱 (RP HPLC MS)检测 ,对活性峰手工读谱分析其一级结构 ;最后进行氨基酸同源性分析。结果 酸洗 1 0 10 hHCC细胞 ,样品蛋白质浓度 2mg/ml;通过RP HPLC MS检测 ,其质谱图经手工解析 ,氨基酸序列为SXXVHXNEV ,X =1或L ;氨基酸同源性分析证明SXXVHXNEV为SLIVHLNEV ,是肝细胞生长因子受体的第 1 0 75～ 1 0 83肽段 ,第 1 0 80位点发生突变 ,由F变为L ,由HLA A2分子递呈。结论 细胞膜温和酸洗技术结合RP HPLC MS联用技术 ,是寻找肝癌抗原肽的有效方法 ,尚未见相同研究报道。发现的肝癌抗原肽SLIVHLNEV是肝细胞生长因子受体的突变物 ,可能具有重要生物学意义。
- 隋延仿郭爱林叶菁曲萍张晓楠张立红
- 关键词：HLA-A2高效液相色谱-质谱MHCI类分子
- 肝癌热休克蛋白-抗原肽复合物的构建及诱导CTL反应的初步研究被引量：14
- 2001年
- 目的:研究体外构建热休克蛋白-抗原肽复合物的方法,观察其在体外的抗肿瘤作用。方法:用经43℃热处理1小时的人肝细胞悬液,经过裂解液裂解,60%～80%饱和硫酸铵沉淀,用SephadexG-100柱制备,取分子量为70KD组份,Westernblot进行性质鉴定。应用多肽解离液处理该组份,SephadexG-25柱过滤获得未结合多肽的蛋白分子,使其在体外与肝癌抗原肽SLIVHLNEV结合,构建成热休克蛋白-抗原肽复合物。应用此复合物刺激树突状细胞,激活同源外周血T淋巴细胞产生肿瘤特异性杀伤T淋巴细胞(CTL),应用MTT法检测其对T2细胞及肿瘤细胞的杀伤活性。结果:所得蛋白经电泳及Westernblot进行蛋白分子量及性质鉴定为热休克蛋白70。SephadexG-25柱双分离法证实应用上述方法成功构建了肝癌热休克蛋白70-抗原肽复合物,用该复合物负荷树突状细胞在体外可以诱导出较强的肝癌抗原肽特异性CTL,可以杀伤负荷有该肽的T2细胞及递呈该肽的肿瘤细胞系。结论:体外构建的热休克蛋白-抗原肽复合物可以增强抗原肽诱导CTL反应能力,热休克蛋白是良好的T细胞免疫佐剂,有可能在肿瘤疫苗治疗中发挥重要作用。
- 郭爱林隋延仿张立红曲萍王小平叶菁
- 关键词：热休克蛋白肝癌抗原肽树突状细胞
- MAGE-3抗原肽体外诱导肝癌患者免疫应答的研究被引量：5
- 2003年
- 的 利用载有MAGE 3抗原肽的树突状细胞 (DC)活化原发性肝细胞癌 (HCC)患者T淋巴细胞 ,探讨是否可以体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)应答。方法 通过逆转录多聚酶链反应和测序分析MAGE 3多肽表位密集区的核苷酸变异状况 ;体外培养HLA A2表型的HCC患者及正常献血员外周血来源的DC ,并经孵育携带MAGE 3 HLA A2抗原肽FLWGPRALV ,用以活化T淋巴细胞 ,利用特异性杀伤实验检测CTL应答。结果 中国HCC患者表达的MAGE 3序列高度保守。用特定细胞因子和无血清培养基可成功培养HCC患者外周血来源的DC。经多肽冲击的DC诱导 ,3例HCC患者和 3例正常献血员中各有 2例产生CTL免疫应答。结论 载有MAGE 3抗原肽的DC可以体外诱导特异性的CTL免疫应答。提示HLA A2限制性的MAGE 3抗原肽经DC递呈可以作为有潜力的肝癌免疫治疗疫苗。
- 陈红松李若冰魏来费然彭吉润王宇
- 关键词：免疫应答树突状细胞HCC细胞毒T淋巴细胞
- 黑色素瘤抗原-3基因在肝细胞癌中的研究被引量：16
- 2000年
- 目的 检测黑色素瘤抗原 3(melanomaantigen 3 ,MAGE 3)mRNA在肝细胞癌 (HCC)中的表达 ,探讨用MAGE 3基因编码蛋白作为疫苗对HCC患者进行免疫治疗在理论上的可行性。 方法 用RT PCR方法对 45例HCC患者癌组织和相应癌旁肝组织以及 16例肝硬化组织和 12例正常肝组织的MAGE 3mRNA表达情况进行研究 ,对 3例RT PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA序列测定 ,并以测序证实为MAGE 3基因的cDNA片段为模板合成 [α32 P]标记的探针 ,进行Southern杂交。同时用ELISA方法对其中 43例HCC患者进行HLA 1 A及B位点分型。 结果 45例HCC患者中 ,35例 (78% )MAGE 3mRNA表达阳性 ,癌旁组织有 6例阳性 (13% ) ,病理检查证实这 6例癌旁组织中都有明显的异型增生 ,而非HCC患者的肝硬化及正常肝组织均不表达 ;DNA测序 ,3例PCR产物中的目的基因片段均证明为MAGE 3cDNA序列 ;Southern杂交结果和RT PCR电泳结果完全一致 ;HCC患者中常见HLA类型为A2 (5 3 5 % ) ,A11(2 5 6 % ) ,A2 4 (2 0 9% ) ,A33(2 0 9% ) ,B13(2 8 3% ) ,B35(2 3 2 % ) ;MAGE 3的表达与肿瘤直径 ,AFP水平等临床指标无相关关系。 结论 MAGE 3在肝细胞癌中呈高比例表达 ,这使得以此抗原用于HCC患者的免疫治疗成为可能 ;一些细胞有异型增生的癌旁组织中表?
- 蔡胜利赵海涛冷希圣程继华龚顺友彭吉润丛旭王宇芮静安回允中杜如昱陈慰峰
- 关键词：肝细胞癌DNA
- 树突状细胞负载肝癌抗原肽疫苗体外诱导特异性免疫学反应的研究被引量：4
- 2003年
- 目的 :研究树突状细胞 (dendriticcell,DC)负载肝癌抗原肽EPVTKAEML体外诱导特异性CTL的能力及其抑癌效果。方法 :用顺序特异引物聚合酶链反应技术 (PCR SSP)选择HLA B7表型供者 ,从脾组织中分离、培养DC EPVTKAEML特异性CTL。用51Cr释放法检测CTL的杀伤活性 ,并用抗HLA I分子单抗 (mAb)进行杀伤抑制实验。结果 :找到 4例HLA B7杂合子供者 ,用DC负载HLA B7限制的抗原肽EPVTKAEML可诱导特异性CTL反应 ,对肝癌细胞HHCC有较强的杀伤作用。结论
- 曲萍隋延仿郭爱林曹云新董海龙禄韶英叶菁张秀敏
- 关键词：树突状细胞疫苗抗原肽肝癌
- 肿瘤特异性肿瘤/睾丸抗原在肝癌组织中的表达被引量：21
- 2003年
- 目的 研究7种主要肿瘤/睾丸(CT)抗原MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在原发性肝细胞癌(HCC)患者癌组织中的表达、编码基因的变异状况及与临床指标的关系。 方法 收集30例肝癌患者的癌和癌旁组织,采用特异性引物逆转录聚合酶链反应检测7种CT抗原的表达,并对PCR产物进行测序分析。结果 在30例HCC患者中,MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在癌组织中的表达率分别为66.7％、70.0％、20.0％、36.7％、40.0％、33.3％和33.3％,而癌旁没有表达。癌组织中至少表达1种、2种和3种CT抗原的阳性率分别为90.0％、70.0％和53.5％。我国肝癌表达的7种CT抗原编码基因与国外报道的相比,同源性非常高。MAGE-10和SCP-1的表达与甲胎蛋白的水平相关,MAGE-3和SSX-2表达与平均年龄相关。 结论 7种CT抗原在HCC患者癌组织中均有表达,阳性率为20.0％-70.0％,其编码基因序列高度保守。一些CT抗原的表达与临床指标存在相关性。
- 陈红松覃柳亮丛旭王瑜费然蒋栋曹骥苏建家魏来陈慰峰王宇
- 关键词：肝细胞癌肿瘤特异性抗原睾丸抗原编码基因基因表达
- 一个新的MAGE-1表位为肝癌细胞表面HLA-B7分子递呈被引量：14
- 2001年
- 目的 :肿瘤抗原的存在是机体识别肿瘤并激活免疫系统的物质基础 ,机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主 ,故寻找被T细胞识别的肝癌细胞抗原肽 ,为肝癌免疫治疗奠定基础。方法 :对于肝癌细胞系HHCC(HLA A2 ,A2 9,B7,B5 1) ,应用细胞膜酸洗技术使抗原肽从细胞膜表面脱落 ,经过凝胶层析 ,反相高效液相色谱层析得到不同组份多肽 ,高效液相色谱 质谱仪联用技术获得抗原肽的一级结构 ,通过氨基酸锚定位点分析 ,预测其HLA配体类型 ;互联网上氨基酸同源性分析确定其同源性序列 ;人工合成抗原肽 ,HLA同型树突状细胞递呈合成抗原肽刺激特异性CTL反应 ,51Cr杀伤实验检测CTL对肿瘤细胞系的杀伤作用。结果 :经过反相高效液相色谱层析后可以获得 10多个组份 ,其中一个组份经过液质联用鉴定和氨基酸同源性分析确定其序列为EPVTKAEML ,是黑色素瘤抗原 1,MAGE 1(12 1 12 9)表位 ,由HLA B7分子递呈 ,体外诱导实验表明其可以诱导出较强的CTL反应。结论 :液质联用技术是寻找抗原肽的有效方法 ,MAGE 1抗原肽EPVTKAEML对于HLA B7阳性及MAGE
- 郭爱林隋延仿叶菁曲萍张晓楠张立红张敏卢兴森
- 关键词：肝癌液质联用技术抗原肽MAGE-1
