国家自然科学基金(30770638)
- 作品数：13 被引量：24H指数：5
- 相关作者：王芹李进刘强唐卫生穆传杰更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院放射医学研究所天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金中国医学科学院放射医学研究所基金更多>>
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- 腺病毒介导的人Rb94基因抑制食管癌细胞生长的研究
- 目的研究含有Rb94基因的重组腺病毒表达载体(Ad-Rb94)抑制人食管癌细胞生长的作用。方法Ad-Rb94重组体于体外转染食管癌细胞EC-9706,用MTT比色法和流式细胞术观察EC-9706细胞的生长曲线和细胞周期的...
- 王芹李进岳井银穆传杰唐卫生
- 关键词：RB94基因食管癌腺病毒载体
- 文献传递
- 腺病毒介导的人视网膜母细胞瘤94基因对人食管癌细胞辐射增敏作用的研究
- 2011年
- 目的探讨重组腺病毒人视网膜母细胞瘤94基因（Ad—Rb94）对吖射线杀伤人食管癌EC109细胞的增敏作用。方法将Ad—Rb94体外转染后的EC109细胞，按数字随机表法，分为空白对照组、Ad-LacZ对照组、Ad-Rb94组、照射组和Ad—Rb94联合照射组，观察EC109的细胞的抑制率、细胞周期和Rb蛋白的表达。结果Ad-Rb94组、照射组和Ad—Rb94联合照射组对EC109细胞生长均具有抑制作用，Ad—Rb94联合照射组的抑制效应最强，明显高于Ad—Rb94组和照射组（F=23．31，P〈0．05）。Ad—Rb94联合照射组EC109细胞出现明显的G2期阻滞，G2期细胞所占比例达50％。Ad-Rb94联合照射组表达Rb蛋白的细胞明显增加，阳性率达71％，较Ad—Rb94组和照射组差异有统计学意义（x^2=8．31和6．73，P〈0．05）。结论Rb9d基因联合照射能明显提高对人食管癌细胞的辐射增敏性。
- 陈凤华李进张恒王欣茹邵盈吴丽芬姜恩海王芹
- 关键词：基因治疗食管癌
- 采用Gateway^(TM)系统构建人Rb94基因重组腺病毒载体被引量：6
- 2010年
- 目的采用GatewayTM技术构建人Rb94基因重组腺病毒载体(Ad-hRb94)。方法从人类胚胎中提取总RNA,经反转录得到目的 cDNA,PCR扩增Rb94目的基因片段。设计含有attB侧翼序列的引物,用于重组片段的PCR扩增,在BP重组酶的作用下,将含attB位点的PCR产物与受体载体pDONRTM221发生重组反应,产生入门克隆。在LR重组酶作用下,将入门克隆与带attR1、at-tR2位点的目的载体Ad/CMV/V5-DEST体外重组形成表达克隆Ad-hRb94。经PCR和测序鉴定,将Ad-hRb94线性化后转入293A细胞进行病毒的包装、扩增及病毒滴度测定。结果经PCR和测序证实目的基因Rb94片段按正确方向重组入目的载体中,带Rb94基因的目的载体在293A细胞中包装成功,获得高滴度的病毒颗粒,滴度为9.41×1010pfu/ml。结论本实验利用GatewayTM技术成功构建了Ad-hRb94,为进一步进行肿瘤基因治疗研究奠定了实验基础。
- 李进王芹宋力刘强王月英唐卫生张宁王蕾
- 关键词：重组腺病毒
- 腺病毒介导人Rb94基因对食管癌细胞的生长作用观察被引量：5
- 2008年
- 目的观察含有视网膜母细胞瘤（Rb）94基因的重组腺病毒表达载体（Ad-Rb94）对人食管癌细胞生长的抑制作用。方法将Ad-Rb94于体外转染食管癌细胞EC-9706（Ad-Rb94组）,设对照腺病毒组（Ad-lacZ组）和空白对照组,用MTT比色法和流式细胞仪观察EC-9706细胞的生长曲线和细胞周期。结果Ad-Rb94组EC-9706细胞在转染后第3天开始生长缓慢,在转染后第5天本组细胞的生长与Ad-lacZ组和空白对照组相比明显受抑制（P〈0.05）。Ad-Rb94组G1期细胞比空白对照组增加14%-19%,G2期和S期细胞分别减少4%-6%和10%-13%。结论腺病毒介导的外源性Rb94基因可有效转染人食管癌细胞,并对其生长有抑制作用。
- 王芹李进赵艳芝岳井银穆传杰唐卫生
- 关键词：视网膜母细胞瘤基因食管肿瘤病毒载体
- Ad-Rb94联合γ射线照射对食管癌细胞生长的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨人视网膜母细胞瘤94基因重组腺病毒载体（Ad-Rb94）联合γ射线对人食管癌细胞体外生长的抑制作用.方法 采用随机数字表法将培养细胞分为空白对照组、β-半乳糖苷酶基因重组腺病毒载体（Ad-LacZ）对照组、Ad-Rb94组、γ射线照射组和Ad-Rb94联合γ射线照射组（联合组）,Ad-LacZ和Ad-Rb94于体外转染人食管癌EC109细胞系,转染6 h后进行4 Gy 137Csγ射线照射,用噻唑蓝法检测细胞的生长抑制率.结果 Ad-Rb94组、γ射线照射组和联合组对EC109细胞生长均具有抑制作用,其中,联合组抑制率最高（40.30±4.2）%,明显高于Ad-Rb94组（18.3±0.4）%和γ射线照射组（27.40±2.9）%（x2=7.91,x2=5.82,P＜0.05）;γ射线照射组与Ad-Rb94组比较差异具有统计学意义（x2=5.12,P＜0.05）.结论 Ad-Rb94联合γ射线照射对食管癌细胞的抑瘤作用具有协同效应,能有效地抑制肿瘤细胞的生长.
- 陈凤华李进谭志军姜恩海宋力王欣茹王芹
- 关键词：食管肿瘤基因疗法放射疗法
- Rb94基因联合放射治疗对荷瘤裸小鼠食管癌细胞生长的抑制作用被引量：2
- 2017年
- 目的:探讨人视网膜母细胞瘤Rb94基因联合电离辐射对荷瘤裸小鼠食管癌细胞生长的抑制作用,阐明Rb94基因与放射治疗(放疗)抑制肿瘤细胞生长的协同作用。方法:将食管癌K150细胞接种于BALB/c-nu裸小鼠建立肿瘤模型。实验分为对照组(未进行处理)、Ad-LacZ组(为含LacZ基因但不含Rb94基因的对照腺病毒,分别于0、3和7d以Ad-LacZ感染瘤体)、Ad-Rb94组(分别于0、3和7d以Ad-Rb94感染瘤体)、照射组(分别于1、4和8d进行4Gyγ射线局部照射瘤体)和Ad-Rb94联合照射组(联合组,Ad-Rb94感染后进行4Gyγ射线局部照射瘤体)。检测各组小鼠食管癌瘤体体积、瘤体质量、肿瘤生长抑制率和肿瘤组织中ABL及JNK的表达水平,并对肿瘤组织进行病理学分析。结果:与对照组比较,Ad-Rb94组、照射组和联合组裸小鼠肿瘤生长速度缓慢,肿瘤生长出现抑制效应;治疗第15天联合组小鼠肿瘤体积明显小于Ad-Rb94组和照射组,与对照组和Ad-LacZ组比较差异有统计学意义(F=26.7,F=23.8,P<0.01)。治疗结束后联合组小鼠瘤体质量最轻,肿瘤生长抑制率高达81.16%,明显高于Ad-Rb94组(57.84%)和照射组(38.20%)(P<0.01)。与对照组比较,联合组小鼠肿瘤组织中ABL和JNK的表达水平明显升高(P<0.01)。与其他组比较,联合组肿瘤细胞有较少的核分裂和较浅的核深染。结论:Rb94基因联合放疗对荷瘤裸小鼠肿瘤的生长抑制具有协同作用。
- 王芹杜利清王彦徐畅李进刘强
- 关键词：RB94基因荷瘤裸小鼠食管肿瘤
- Rb94基因联合放射后荷瘤裸鼠食管癌细胞的的病理改变
- 2016年
- 目的探讨视网膜母细胞瘤Rb94基因与放射联合应用后裸鼠种植瘤组织的病理变化。方法将食管癌K150细胞接种裸鼠建立肿瘤模型,实验分为对照组、Ad-Lac Z组、Ad-Rb94组、照射组和Ad-Rb94联合照射组(简称联合组),观察食管癌细胞的病理改变。结果对照组和Ad-Lac Z组生长活跃,而Ad-Rb94组和照射组肿瘤细胞出现生长抑制和凋亡;与其他组相比,联合组有较少的核分裂、较浅的核深染。结论 Rb94基因与放疗联合应用对肿瘤生长具有协同抑瘤效应,显著增加食管癌治疗的疗效。
- 杨文延王彦徐畅杜利清孙志娟李进刘强王芹
- 关键词：视网膜母细胞瘤基因裸鼠
- 人RB94基因重组腺病毒表达载体的构建及扩增
- 目的:构建携带人Rb94基因的重组腺病毒载体并扩增,为研究Rb94基因-放射治疗肿瘤奠定基础。方法:将已构建好的pENTR1A-Rb94穿梭质粒与腺病毒表达载体(pAd/CMV/V5-DEST)进行LR重组,构建含Rb9...
- 李进王芹岳井银穆传杰唐卫生
- 关键词：基因治疗RB94基因腺病毒表达载体
- 文献传递
- Ad-Rb94联合照射对体外人大肠癌细胞的抑瘤作用
- 2014年
- 目的 探讨人视网膜母细胞瘤Rb94基因重组腺病毒载体（Ad-Rb94）联合γ射线照射对体外人大肠癌细胞生长的联合抑瘤作用及其机制.方法 将Ad-Rb94于体外转染大肠癌HT29细胞,转染后12h进行4Gy ^137Csγ射线照射.实验分组为5组：对照组、β-半乳糖苷酶基因重组腺病毒载体组（Ad-lacZ组）、Ad-Rb94组、照射组和Ad-Rb94联合照射组.用噻唑蓝法检测HT29细胞的生长,用流式细胞术检测HT29细胞的细胞周期和细胞凋亡的变化.结果 当Ad-Rb94有效转染HT29细胞后,从转染第4日开始,照射组和联合照射组细胞生长速率较对照组和Ad-lacZ组缓慢;与Ad-Rb94组和照射组相比,Ad-Rb94联合照射组细胞的生长表现出更强的抑制效应（t=15.02、17.30,P＜0.01）.细胞周期结果表明,与对照组、Ad-lacZ组和Ad-Rb94组相比,照射组大量细胞停留在G2期,各组间差异有统计学意义（t=18.65、15.23、16.38,P＜0.01）;但Ad-Rb94联合照射组停留在G2期细胞更多（约40％）,远高于照射组（t=7.78,P＜0.05）.细胞凋亡结果表明,与对照组相比,Ad-Rb94组和照射组细胞凋亡率明显增加（t=16.19、10.72,P＜0.01）;Ad-Rb94联合照射组细胞凋亡率最高（21％）,与Ad-Rb94组和照射组相比,差异有统计学意义（t=6.17、9.25,P＜0.05）.结论 腺病毒介导的Rb94基因联合照射对大肠癌细胞的抑瘤作用具有协同效应,其机制可能是促进细胞G2期阻滞和凋亡.
- 王芹王敬敏徐畅王彦杜利清樊飞跃刘强
- 关键词：基因疗法大肠肿瘤腺病毒
- Rb94基因联合放射治疗对卵巢癌细胞生长的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨外源性Rb94基因联合放疗对卵巢癌细胞生长的抑制作用,为肿瘤的Rb94基因-放射治疗提供实验依据。方法:应用携带Rb94基因的复制缺陷型腺病毒(Ad-Rb94)于体外转染卵巢癌细胞株ES-2,用MTT比色法和流式细胞术观察Rb94基因联合放疗后ES-2细胞的生长曲线和细胞周期的变化。结果:Ad-Rb94基因组、单纯放疗组和Ad-Rb94基因联合放疗组ES-2细胞生长均明显受到抑制,与Ad-lacZ组和空白对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。其中联合放疗组ES-2细胞生长最为缓慢,与Ad-Rb94基因组和单纯放疗组比较均有显著性差异(P<0.05)。Ad-Rb94组和放疗组大量的ES-2细胞停留在G1期,而G2期和S期细胞明显减少,联合治疗组细胞停留在G1期最多。结论:腺病毒介导的外源性Rb94基因可明显抑制ES-2细胞的生长,与放射治疗联合应用具有相加和协同效应。
- 王芹李进赵艳芝岳井银穆传杰唐卫生史文琴李静
- 关键词：RB94基因腺病毒载体卵巢癌细胞
