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不同外植体对橡胶树原生质体分离和再生的影响被引量：5: 2014年; 为了探寻橡胶树原生质体培养再生植株的较佳途径,本研究以橡胶树热研7-33-97花药和内珠被为起始外植体分别诱导愈伤组织,进行悬浮培养建立稳定的胚性悬浮细胞系,并分别对其进行原生质体的分离和培养研究,分析比较不同起始外植体来源原生质体的产量、活力及其在看护培养过程中的分裂生长、体胚发生及植株再生情况。结果显示,在含1.5%纤维素酶、0.15%果胶酶和0.5%离析酶的酶液中酶解处理12 h后,花药和内珠被来源的悬浮细胞原生质体产量分别为7.6×106个/m L PCV和12×106个/m L PCV,平均活力分别为75.2%和83.9%;在看护培养基上这两种来源的原生质体均能发生持续分裂,45 d后从5×105个原生质体形成2 mm以上的小愈伤组织数分别为247个和480个;经体胚诱导培养60 d后获得的体胚数分别为56个和18个,最终花药来源原生质体发育的体胚约有4.7%转化成完整植株,而内珠被来源的原生质体没能得到正常的植株。研究结果表明,经花药培养建立的胚性悬浮细胞系是获得具有植株再生能力原生质体的最佳材料,可为进一步优化橡胶树原生质体培养体系及进行橡胶树品种间体细胞杂交提供依据和参考。; 戴雪梅黄天带李季杨先锋黄华孙; 关键词：橡胶树胚性悬浮细胞系原生质体体胚发生植株再生

橡胶树PR107原生质体的分离和培养研究被引量：1: 2013年; 以橡胶树PR107花药愈伤组织建立的胚性悬浮细胞为材料,进行原生质体的酶解分离和培养研究。结果表明:在酶组合为纤维素酶1.5%+果胶酶0.15%+离析酶0.5%的酶解处理下,继代培养第6天、直径小于0.5 mm悬浮细胞团获得最高产量的原生质体,达到2.2×107个/mL PCV;原生质体在看护培养基上培养1周后观察到细胞开始发生分裂,培养2周后细胞分裂形成含8-10个细胞的小细胞团。看护培养45 d后原生质体持续分裂并发育成肉眼可见的小愈伤组织。; 戴雪梅华玉伟李哲黄天带孙爱花周权男黄华孙; 关键词：橡胶树原生质体分离胚性悬浮细胞

橡胶树热研8-79原生质体培养再生植株被引量：6: 2013年; 【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%+果胶酶0.15%+离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量(3.6×107个/mL PCV);用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。; 戴雪梅李哲华玉伟黄天带孙爱花周权男黄华孙; 关键词：橡胶树胚性悬浮细胞原生质体植株再生

AgNO_3对橡胶树花药愈伤组织形态及体胚发生的影响被引量：4: 2016年; 橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO_3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中。该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L^(-1)AgNO_3预培养35 d后,观察预培养前后愈伤组织表形及其细胞形态的变化,并设计不同浓度AgNO_3及不同处理时间对其进行体胚诱导,90 d后分别统计胚状体总数和正常胚数。结果表明:浅黄色质地柔软的愈伤组织在含AgNO_3的培养基上预培养后能转变成鲜黄色易碎愈伤组织,在倒置显微镜下前者大多表现为不规则多边形,细胞内含物较稀薄;而后者则呈圆形或椭圆形,细胞内含物丰富,属于典型的胚性细胞。在体胚诱导的第1个月添加5 mg·L^(-1)AgNO_3能显著促进体胚的发生,AgNO_3浓度升至10 mg·L^(-1)时体胚发生受到抑制,且畸形胚的形成率显著增加;在含5 mg·L^(-1)AgNO_3的培养基中培养2个月以上,体胚发育明显受阻,大部分形成畸形胚。该研究结果在一定程度上恢复了橡胶树长期继代花药愈伤组织的胚性能力,并提高了其体胚发生频率,为橡胶树花药胚性愈伤组织长期继代培养过程中胚性的保持提供了参考。; 戴雪梅黄天带李季杨先锋辛士超黄华孙; 关键词：橡胶树花药愈伤组织 AGNO3 细胞形态体胚发生

植物组织培养在农业生产中的应用研究进展被引量：19: 2014年; 植物组织培养是指利用细胞全能性培养再生植株的技术,具有快速繁殖、克服杂交不亲和及保存种质资源等优点。现对组织培养在基因工程、种质资源保存、原生体培养与体细胞杂交、单倍体育种、选择离体突变体、脱毒等方面的研究进展进行综述;同时简要介绍了组织培养在工厂化育苗、人工种子繁殖等方面的应用;并对组织培养在植物各领域的应用情况进行了展望。; 周权男张慧君戴雪梅孙爱花黄天带黄华孙华玉伟; 关键词：植物组织培养基因工程植物育种

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中国热带农业科学院橡胶研究所基本科研业务费专项项目(1630022013002)

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