卫生部科学研究基金(wkj-2008-2-031)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：杭州师范大学临床医学院附属医院温州医科大学更多>>
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- FXYD5基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究
- 2014年
- 目的构建大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因真核表达载体,研究其对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(CRL-1444)的体外作用。方法以含FXYD5全长cDNA的pBluescriptⅡKS(+/-)载体为模板,并用PCR方法扩增,将其连接于真核表达质粒pcDNA3.1(+),PCR、双酶切和测序鉴定后,用脂质体包裹转染大鼠胸主动脉细胞,转染重组真核表达载体为实验组(PF组),转染空质粒PCDNA3.1(+)为阴性对照组(NC组)和未做处理的为空白对照组(BC组)。Real-time PCR定量检测各组FXYD5的表达水平,并研究该基因对CRL-1444细胞膜钠钾泵(Na^+-K^+-ATPase)活性、细胞增殖能力、迁移力的影响。结果重组的真核表达载体pcDi4A3.1(+)-FXYD5构建成功,PF组FXYD5的表达水平较BC组上调17.312倍(P<0.05),PF组的细胞膜Na^+-K^+-ATPase活性高于BC组和NC组(均P<0.05),细胞增殖能力和迁移力均高于NC组(均P<0.05)。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-FXYD5,并在CRL-1444细胞中使FXYD5基因的表达水平增加,且增强CRL-1444细胞膜的Na^+-K^+-ATPase活性、细胞增殖和迁移能力。
- 王本极潘嘉林黄晓燕施翔翔程碧环金胜威杨德业
- 关键词：真核表达载体血管平滑肌细胞钠钾泵
