国家自然科学基金(30901535)
- 作品数：16 被引量：35H指数：5
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- 相关机构：上海交通大学医学院附属第三人民医院武汉大学上海交通大学更多>>
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- SLC22A18基因启动子甲基化与胶质瘤SLC22A18表达的关系被引量：7
- 2011年
- 目的探讨胶质瘤中SLC22A18基因启动子甲基化与其表达的关系。方法选取上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科自2006年9月至2009年6月、武汉大学中南医院神经外科自2002年9月至2005年6月间手术切除的胶质瘤标本30例，另选10例行内减压术颅脑损伤患者的正常脑组织作为对照。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测标本中SLC22A18基因启动子甲基化的状态．RT—PCR和Western blotting分别检测SLC22A18 mRNA和蛋白的表达。体外培养胶质瘤U251细胞于含2μmol／L去甲基化药物5-aza-2-deoxycytidine的培养液（实验组）中，同时设普通培养液作对照，培养3、5、7d后进行细胞计数并应用Western blotting检测SLC22A18蛋白的表达。结果MSP检测结果显示15例胶质瘤组织出现甲基化．对照脑组织均表现出非甲基化；15例甲基化胶质瘤组织中SLC22A18mRNA、蛋白的表达明显低于对照脑组织。培养5、7d实验组U251细胞计数少于对照组，差异有统计学意义f氏0．05）。培养7dWestern blotting检测结果发现实验组细胞SLC22A18蛋白的表达明显高于对照组。结论观c22AJ8基因启动子甲基化导致其表达下调；去甲基化药物能恢复U251细胞SLC22A18的表达，并抑制U251细胞增殖。
- 楚胜华马延斌冯东福张红李志强江普查
- 关键词：SLC22A18甲基化神经胶质瘤聚合酶链反应
- SLC22A18基因表达对胶质瘤细胞生物学特性的影响被引量：9
- 2011年
- 目的观察SLC22A18基因表达对人胶质瘤U251细胞生物学特性的影响。方法U251细胞分别转染peDNA3．SLC22A18和peDNA3表达质粒后，筛选3个表达不同水平SLC22A18的U251克隆和2个不表达SLC22A18的U251克隆，研究SLC22A18蛋白表达水平对U251细胞黏附、迁移及聚集能力的影响。结果与不表达SLC22A18的U251细胞比较，表达SLC22A18的U251细胞在附着后1h和4h时的细胞黏附能力均显著增强，分别平均增强65．7％和26．5％（P〈0．01），而其细胞过河实验显示过河时间平均延长67．8％（P〈0．05），并且细胞迁移能力平均下降71．5％（P〈0．01）。同时，SLC22A18表达诱导显著的同源细胞聚集，聚集指数平均下降53．2％（P〈0．01）。结论SLC22A18蛋白表达显著抑制人胶质瘤U251细胞的恶性生物学特性。
- 楚胜华冯东福马延斌张红邱建华朱志安
- 关键词：胶质瘤生物学
- 靶向异性核基质结合区结合蛋白-1的RNA干扰对人胶质瘤裸鼠移植瘤的影响
- 2015年
- 组织特异性的核基质结合区结合蛋白质-1（SATB1）与胶质瘤的增殖、侵袭等密切相关[1].为了解SATB1和胶质瘤的关系,我们通过RNA干扰技术和裸鼠内U251成瘤实验,观察SATB1在裸鼠体内是否敲低,以及对U251裸鼠移植瘤的影响.
- 楚胜华朱志安
- 关键词：裸鼠移植瘤核基质结合区人胶质瘤结合蛋白-1SATB1靶向
- 5-Aza-CdR上调裸鼠胶质瘤SLC22A18基因的表达及其对胶质瘤的抑制作用
- 2011年
- 目的探讨去甲基化药物5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胶质瘤U251细胞SLC22A18表达及对肿瘤生长的影响。方法皮下接种法建立胶质瘤U251细胞裸鼠种植瘤模型,随机分为实验组(12只)和对照组(12只)。实验组裸鼠皮下注射5-Aza-CdR,对照组裸鼠皮下注射等量PBS。4周后处死裸鼠,观察胶质瘤的生长情况,用逆转录PCR技术及免疫组织化学技术检测SLC22A18mRNA及蛋白的表达。结果用药4周后,对照组SLC22A18mRNA表达极低(0.132±0.056),而实验组表达明显增强(0.552±0.124),两者相差显著(P<0.01);对照组几乎检测不到SLC22A18蛋白表达,而实验组可检测到SLC22A18蛋白明显表达;用药4周后实验组肿瘤的体积为(982.52±415.45)mm3,对照组为(1468.56±642.34)mm3,两者相差显著(P<0.05)。结论 5-Aza-CdR能上调裸鼠皮下种植胶质瘤U251细胞的SLC22A18表达,抑制胶质瘤的生长,其机制可能为5-Aza-CdR使甲基化的SLC22A18启动子去甲基化表达,恢复SLC22A18的表达,从而抑制胶质瘤生长。
- 楚胜华马延斌冯东福张红邱建华朱志安
- 关键词：胶质瘤U251细胞裸鼠
- SLC22A18基因转染对胶质瘤细胞G2期阻滞的影响
- 2011年
- 近年来研究结果表明SLC22A18可能在肿瘤发生中起着抑制作用。在前期研究中发现SLC22A18基因表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖，该研究进一步探索SLC22A18抑制U251细胞的增殖的分子机制。
- 张红楚胜华马延斌冯东福邱建华朱志安
- 关键词：G2期阻滞胶质瘤细胞基因转染U251细胞抑制胶质瘤
- SLC22A18表达抑制胶质瘤细胞增殖的分子机制被引量：1
- 2012年
- 有研究表明，SLC22A18表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖和恶性生物学特征^[1-2]，推测SLC22A18调控U251细胞重要细胞周期调控蛋白p21和p27是其抑制U251细胞增殖的主要机制。本研究旨在探讨SLC22A18表达抑制胶质瘤U251细胞增殖的分子机制，揭示SLC22A18的基因功能。
- 楚胜华马延斌冯东福邱建华张红朱志安
- 关键词：抑制胶质瘤细胞增殖分子机制U251细胞细胞周期调控
- 沉默特异性核基质结合区结合蛋白-1对胶质瘤U251细胞侵袭的影响被引量：6
- 2014年
- 目的 探讨特异性核基质结合区结合蛋白-1（SATB1）短发夹核糖核酸（shRNA）对人胶质瘤U251细胞侵袭的影响及其机制.方法 构建针对SATB1的shRNA重组质粒,采用电穿孔的方法转染U251细胞中,分为对照组、空载体转染组、重组质粒转染组,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞SATB1 mRNA水平的变化,采用Western blot检测各组细胞SATB1蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测细胞外基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9浓度的变化;采用划痕实验和Transwell实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果 转染后48 h,SATB1-shRNA重组质粒转染组细胞外MMP-2的浓度为（69.4±3.5） μg/L,较对照组的（152.5±2.6）μg/L和空载体转染组的（150.5±5.2）μg/L明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.转染后48 h,ELISA法检测SATB1-shRNA重组质粒转染组细胞外MMP-9的浓度为（40.6±2.4） μg/L,较对照组的（86.7±6.7）μg/L和空载体转染组的（89.8±10.5）μg/L明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.与对照组、空载体转染组比较,重组质粒转染组U251细胞SATB1、MMP-2和MMP-9的表达下降,而基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）和SLC22A18表达上调,差异有统计学意义（P＜0.05）.划痕实验和Transwell实验显示重组质粒转染组细胞侵袭能力明显减弱.结论 针对SATB1的RNA干扰可以明显抑制U251胶质瘤细胞SATB1的表达,对U251胶质瘤细胞的侵袭能力产生明显抑制作用.
- 楚胜华冯东福朱志安
- 关键词：胶质瘤
- 应用基因芯片筛选不同胶质瘤细胞相关基因被引量：6
- 2012年
- 目的应用高密度寡核苷酸（Oligo）基因芯片技术筛选不同胶质瘤细胞相关基因。方法提取星形胶质细胞瘤CHG-5细胞株（WHO分级Ⅱ级）、星形胶质细胞瘤U373细胞株（WHO分级Ⅲ级）、星形胶质细胞瘤SHG-44细胞株（WHO分级Ⅳ级）和神经胶质细胞U257细胞株的总RNA并逆转录为cDNA，其中cy5、cy3的dNTP分别掺人不同胶质瘤细胞和神经胶质细胞的cDNA，混合后杂交含22000个人类基因人类高密度Oligo基因芯片，经过洗片和扫描，获得荧光信号图像并用计算机分析，抽取4种差异表达基因用聚合酶链反应（PCR）验证它们不同胶质瘤细胞和神经胶质细胞中的差异表达。结果从22000条基因中筛选出差异表达基因242条，其中123条表达上调．119条表达下调，包括细胞凋亡、细胞周期蛋白、细胞骨架和运动蛋白等相关基因。结论基因芯片技术的胶质瘤基因表达谱分析能够高通量筛选胶质瘤相关基因，并高效对基因功能进行研究，有助于认识肿瘤发病机制。
- 张红楚胜华冯东福马延斌邱建华朱志安
- 关键词：胶质瘤基因芯片基因表达
- SATB1基因在星形细胞瘤组织中的表达及与SLC22A18蛋白表达的关系被引量：3
- 2013年
- 目的探讨星形细胞瘤组织中特异性的核基质结合区结合蛋白-1（SATB1）基因、SLC22A18蛋白的表达、与肿瘤恶性程度及两者之间的相互关系。方法选取上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科自2006年9月至2010年6月、武汉大学中南医院神经外科自2003年9月至2006年6月间手术切除的星形细胞瘤标本56例，其中WHO分级I级12例．Ⅱ级13例，Ⅲ级15例，Ⅳ级16例。另选10例行内减压术颅脑损伤患者的正常脑组织作为对照组。应用RT-PCR和Westernblotting分别检测各标本中SATBlmRNA和蛋白的表达，免疫组织化学法检测各标本中SLC22A18蛋白的表达，分析二者与肿瘤恶性程度及两者之间的相互关系。结果RT-PCR与Westernblotting检测显示对照组脑组织中SATB1mRNA和蛋白有少许表达，星形细胞瘤中35例表达阳性；不同级别星形细胞瘤SATBlmRNA和蛋白的阳性表达率、表达值不同，且随着肿瘤病理级别的增高，SATBlmRNA和蛋白的表达值增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。SATB1蛋白的表达值与肿瘤的病理级别呈正相关关系（r=0．987，P=-0．000）；免疫组织化学法检测显示对照组均检测到SLC22A18表达，星形细胞瘤中19例SLC22A18表达阳性。不同级别星形细胞瘤SLC22A18的阳性表达率不同，随着肿瘤病理级别的增高．SLC22A18的阳性表达率降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；SLC22A18表达阴性组中SATB1蛋白阳性表达率（81．1%）显著高于SLC22A18表达阳性组（26.3％），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SATB1基因在星形细胞瘤中表达，提示该基因对星形细胞瘤发生和发展起重要作用；抑癌基因SL22AJ8的失活与SATBJ基因的表达可能在星形细胞瘤的发生中起协同作用。
- 楚胜华马延斌冯东福朱志安李志强江普查
- 关键词：星形细胞瘤SLC22A18
- SLC22A18基因对人胶质瘤U251细胞化疗药物敏感性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨印记基因SLC22A18(solute carrier family 22,member 18)对人胶质瘤U251细胞化疗药物敏感性的影响及耐药机制的研究。方法:采用脂质体转染法将携带有SLC22A18基因的重组质粒pIRES2-EGFP-SLC22A18转入U251细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测SLC22A18 mRNA及蛋白在转染后U251细胞中的表达情况;CCK-8法检测细胞对化疗药物敏感性的变化;FCM法检测SLC22A18表达对细胞凋亡以及对多柔比星在细胞内蓄积浓度的影响。结果:转染SLC22A18基因的U251细胞中有SLC22A18 mRNA及其蛋白的表达;SLC22A18基因转染组U251细胞与对照组细胞比较,U251细胞对紫杉醇的敏感性下降,半数抑制浓度(halfinhibitory concentration,IC50)值上升(t=3.23,P<0.05),对替莫唑胺的敏感性上升,IC50值下降(t=4.28,P<0.05)。SLC22A18基因转染组和空质粒转染组细胞凋亡率分别为(41.35±4.98)%和(6.25±0.82)%,差异有统计学意义(t=12.05,P<0.01)。SLC22A18表达使细胞内多柔比星蓄积浓度明显下降(t=4.25,P<0.05)。结论:SLC22A18表达使人胶质瘤U251细胞对紫杉醇的敏感性下降,对替莫唑胺的敏感性提高,并可能通过降低细胞内化疗药物蓄积产生耐药性。
- 楚胜华朱志安
- 关键词：神经胶质瘤药物耐受性U251细胞
