国家重点基础研究发展计划(2006CB101804)
- 作品数：10 被引量：59H指数：5
- 相关作者：相建海李富花王志勇姚翠鸾张继泉更多>>
- 相关机构：中国科学院中国科学院研究生院集美大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 凡纳滨对虾C-型凝集素LvLec2对不同刺激的免疫应答被引量：10
- 2010年
- 克隆获得了与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)C-type lectin 3同源的C-型凝集素LvLec2基因序列,并通过Real-time PCR研究了其在脂多糖(lipopolysaccharide,简称LPS)、灭活溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)和白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,简称WSSV)刺激后的转录表达变化。结果表明,LvLec2编码157个氨基酸,含有1个糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,简称CRD),其CRD结构域中具有决定糖结合特异性的基序"EPS"(Glu118-Pro119-Ser120)序列。系统进化树分析表明LvLec2与已发表的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)C-型凝集素亲缘较远。LPS、灭活溶壁微球菌和WSSV刺激后,LvLec2基因在肝胰脏中的转录表达有明显的变化但表达模式不同。LvLec2可能作为模式识别受体参与了对虾对病原的识别或防御。
- 罗展张继泉李富花柳承璋相建海
- 关键词：基因克隆免疫应答
- 中国明对虾线粒体MnSOD在大肠杆菌中的重组表达、产物纯化及活性测定被引量：4
- 2008年
- 采用 PCR 方法扩增编码中国明对虾线粒体锰超氧化物歧化酶(MnSOD)成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体 pCR^RT7/NT TOPO^R TA 中进行体外重组表达。重组质粒转化大肠杆菌 BL21(DE3)pLvsS 后,经 IPTG 诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白。对重组蛋白进行 LC-ESI-MS 分析的结果表明,融合蛋白的三个肽段与中国明对虾线粒体MnSOD 相应肽段完全一致。将重组蛋白通过金属螯合柱进行纯化,进而透析、复性,最后获得了活性高达2373U/mg 的重组蛋白。中国明对虾线粒体 MnSOD 的成功表达,为深入研究其在中国明对虾免疫反应和抗氧化胁迫中的作用奠定了基础。
- 张庆利李富花黄冰心周茜相建海
- 关键词：中国明对虾锰超氧化物歧化酶纯化活性分析
- 凡纳滨对虾精氨酸激酶的分离纯化及性质研究被引量：5
- 2008年
- 经过CM-纤维素批量层析、Separdex G-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析等步骤,从凡纳滨对虾肌肉组织分离得到精氨酸激酶,经SDS-PAGE检测达到电泳纯,分子量约为40kDa。对该酶的性质进行分析结果表明,精氨酸激酶的最适作用温度为55℃,当温度高于65℃时,酶活力显著下降;pH8时酶活力较高,低浓度的精氨酸对酶活力有促进作用,高浓度时表现抑制作用,而底物类似物精胺和氨基胍则对酶促反应表现出完全的抑制。NaCl,KCl对酶的活力具有促进作用,低浓度(10mmol.L-1)MgCl2对酶活力表现出激活作用,而CuCl2与MnCl2则表现出完全抑制酶活力,CaCl2与ZnCl2在低浓度时对酶活力无明显影响,但是随着浓度升高,对酶具有抑制作用。
- 姚翠鸾王志勇张瑞英韩学哲张子剑孔鹏冀培丰黄珊珊
- 关键词：凡纳滨对虾精氨酸激酶纯化
- 甲壳动物精氨酸激酶的结构与功能被引量：27
- 2008年
- 精氨酸激酶(arginine kinase)是调节无脊椎动物能量代谢的重要酶,在调节无脊椎动物体内磷酸精氨酸与ATP之间的能量平衡过程中具有重要作用.甲壳动物是节肢动物门内最重要的类群之一,并具有重要的经济价值.来源于甲壳动物的精氨酸激酶是一个单亚基酶,现已得到了广泛研究.本文综述了甲壳动物体内精氨酸激酶的分子构象、序列特征、特异表达及生物学功能和分子结构与功能之间的关系等方面的研究进展,为深入研究甲壳动物的能量代谢调控机制提供必要的参考.另外,还对甲壳动物精氨酸激酶的重要性和研究中存在的问题进行了讨论.
- 姚翠鸾王志勇相建海
- 关键词：精氨酸激酶甲壳动物
- 重组WSSV囊膜蛋白VP281和VP31的抗菌功能初步分析被引量：1
- 2012年
- 为了解白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)两种囊膜蛋白VP281和VP31的功能,本实验对二者进行了原核重组表达。利用一种组成型分泌原核表达质粒pBTA1为表达载体,构建了组成型分泌WSSV囊膜蛋白rVP281、rVP28以及rVP28与增强型绿色荧光蛋白rEGFP融合蛋白的重组大肠杆菌菌株DH5α,分别命名为DhpVP281、DhpVP28和DhpVP28-EGFP。3种重组菌在LB固体培养基上生长12 h的菌落直径分别为(164.84±28.44)、(560.47±46.04)和(548.21±58.54)μm,生长19 h的菌落直径分别为(436.31±47.56)、(1 136.90±110.88)和(1 083.33±109.83)μm,生长24 h的菌落直径分别为(594.19±57.17)、(1 251.19±188.86)和(1 264.29±172.78)μm;显示在所有培养时间,DhpVP281的菌落均显著小于DhpVP28或DhpVP28-EGFP的菌落(P<0.05),推测rVP281的表达可能抑制大肠杆菌的生长。以pBTA1为表达载体,未能成功构建组成型分泌rVP31的重组DH5α。为了解其原因,使用pET-30a(+)为表达载体,构建了表达rVP31包涵体的重组菌株BL21(DE3)pLysS。将rVP31蛋白纯化并复性后,采用牛津杯法,检测到rVP31蛋白对溶壁微球菌具有抗菌作用。在动物病毒中发现具有抗菌作用的囊膜蛋白,可以增加有关WSSV的病毒学方面的知识。
- 孙玉苗李富花相建海
- 关键词：白斑综合征病毒囊膜蛋白抗菌活性
- 中国明对虾囊胚和原肠胚细胞的分离和培养被引量：1
- 2009年
- 尝试了多种方法分离中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)囊胚细胞和原肠胚细胞并进行了细胞培养。结果表明,解剖法适用于囊胚细胞,自行设计的压片法适用于原肠胚细胞。在培养起始阶段,通过降低血清浓度和缩小培养体系可使中国明对虾囊胚细胞和原肠胚细胞迅速贴壁并铺展,囊胚细胞铺展后有明显的生长晕,中后期原肠胚细胞较易达到半汇聚状态。值得注意的是,中国明对虾囊胚细胞在不同培养液中培养可发生形态上的分化。本实验方法有望用于对虾细胞分化机理和对虾细胞建系的研究。
- 余黎明张晓军田丽萍张成松金松君相建海
- 关键词：囊胚原肠胚细胞培养
- 中国明对虾凝血栓蛋白基因全长cDNA的克隆及其表达特征
- 2006年
- 获得了中国明对虾凝血栓蛋白（TSP）基因全长cDNA,该基因由2868个碱基组成,具有一个2763bp的开放阅读框,编码920个氨基酸,其中包含21个氨基酸组成的信号肽.中国明对虾TSP由四类不同的结构域组成,从N端开始顺序为几丁质结合结构域,EGF-like结构域,Type Ⅲ repeat和TSP carboxyl-terminal domain（TSP-C结构域）.结构域分析发现,中国明对虾的N端不具有TSP N-terminal domain（TSPN结构域）,但有一个几丁质结合结构域,其C端的Type Ⅲ和TSP-C结构域非常保守.该基因在弧菌感染后的对虾淋巴器官和肝胰脏中的表达量显著增加,并具有不同的时空表达趋势,提示中国明对虾TSP基因在免疫反应中具有重要作用.
- 王兵李富花谢玉素相建海
- 关键词：中国明对虾弧菌感染基因表达
- 中国明对虾caspase基因的克隆与表达分析被引量：6
- 2010年
- 利用细胞凋亡来清除多细胞器官受损伤或有害的细胞,为动物发育过程中保持机体平衡起到关键作用。为了研究细胞凋亡在甲壳类动物应对病毒感染后所起到的作用,作者利用同源克隆技术获得了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)caspase基因(FcCasp)的cDNA序列,并分析了该基因在对虾受到白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,简称WSSV)刺激后的表达变化规律。结果表明,该基因的cDNA含有954个核苷酸,编码317个氨基酸,具有caspase家族典型的QACRG五肽蛋白酶活性位点(190-194氨基酸)。对注射了WSSV的中国明对虾FcCasp的表达进行分析,在5个时间点取其肝胰脏样本,经real-time PCR检测发现,WSSV刺激3 h后,对虾肝胰脏中FcCasp的表达呈现显著性上调,说明FcCasp的表达与WSSV感染密切相关,提示FcCasp基因与细胞凋亡相关。
- 宋光年金松君张继泉相建海
- 关键词：基因克隆CASPASE
- 凡纳滨对虾精氨酸激酶的多克隆抗体制备及组织特异性表达分析被引量：10
- 2009年
- 精氨酸激酶(arginine kinase,AK)在调节无脊椎动物磷酸精氨酸与ATP之间能量平衡的过程中具有重要作用。在前期工作基础上,设计特异引物,以凡纳滨对虾肌肉组织cDNA为模版,克隆得到了1071bp的凡纳滨对虾精氨酸激酶的完整开放阅读框;将它克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上,转化BL21(DE3)菌株,经诱导后表达出GST-AK融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗血清,经检测该抗原与抗体识别良好。利用得到的抗体对凡纳滨对虾AK在蛋白质水平上的特异性表达进行分析发现,精氨酸激酶在对虾的肌肉、心脏、神经、血细胞和胃组织中具有高的表达量,而在眼柄、肝胰腺、鳃和皮肤组织中表达量较低。为进一步研究精氨酸激酶在对虾体内的功能奠定了基础。
- 姚翠鸾冀培丰孔鹏王志勇
- 关键词：凡纳滨对虾精氨酸激酶多克隆抗体
- 中国明对虾过氧化物还原酶基因在大肠杆菌中的重组表达、产物纯化及活性测定被引量：2
- 2008年
- 采用RT-PCR扩增编码中国明对虾Prx成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pCRT7/NT TOPO TA中进行体外重组表达。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS后,经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白。对重组蛋白进行LC-ESI-MS分析,结果表明融合蛋白的4个肽段与中国明对虾Prx相应肽段完全一致。将重组蛋白通过金属螯合柱进行纯化,进而透析、复性,最后获得了具有较高过氧化物酶活性的重组Prx。
- 张庆利李富花张继泉蒋昊相建海
- 关键词：中国明对虾纯化活性
