广东省自然科学基金(7002329)
- 作品数：3 被引量：10H指数：3
- 相关作者：张白杜万根平顾晓琼赵明光伍时冠更多>>
- 相关机构：广州市妇女儿童医疗中心广州市儿童医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小干扰RNA对川崎病血清诱导血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的观察川崎病急性期血清对血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响以及MMP-9小干扰RNA（siRNA）对上述过程的调节作用。方法构建MMP-9 siRNA质粒，脂质法转染血管内皮细胞（ECV-304）。ECV-304细胞培养分为川崎病血清＋siRNA阴性对照组、正常血清组、川崎病血清＋MMP-9 siRNA1组、川崎病血清＋MMP-9 siRNA2组、川崎病血清＋人血丙种球蛋白组、川崎病血清组。应用逆转录聚合酶链式反应检测MMP-9 mRNA的表达，免疫印迹法检测MMP-9蛋白的表达。结果川崎病血清组和川崎病血清＋siRNA阴性对照组的MMP-9mRNA、MMP-9蛋白表达分别是2．49±0．03、1．20±0．04和2．45±0．03、1．15±0．03，均较正常血清组（1．21±0．03、0．52±0．03）明显增高（均P〈0．01）。川崎病血清＋MMP-9siRNA1组（0．78±0．03、0．31±0．02）、川崎病血清＋MMP-9 siRNA2组（0．74±0．04、0．28±0．04）及川崎病血清＋人血丙种球蛋白组（1．58±0．03、0．88±0．04）的MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白表达与川崎病血清组及川崎病血清＋siRNA阴性对照组比较均明显减少（均P〈0．01）。结论川崎病急性期血清能诱导血管内皮细胞的MMP-9表达增高，可能参与川崎病冠状动脉损伤的发生。构建的MMP-9 siRNA能显著抑制MMP-9 mRNA和蛋白的表达。
- 陈兆鸿万根平顾晓琼
- 关键词：小分子干扰黏膜皮肤淋巴结综合征基质金属蛋白酶9
- 丙种球蛋白及甲强龙抑制川崎病患者PBMC释放TNF-α的作用被引量：3
- 2010年
- 目的探讨丙种球蛋白及甲强龙抑制川崎病(KD)患者外周血单个核细胞(PBMC)释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的作用。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离22例KD患者1、1例发热患者、15例正常人抗凝血的PBMC,用乙酰肉豆蔻佛波酯(PMA)刺激,加入丙种球蛋白和或甲强龙,分空白组、PMA组、PMA+丙种球蛋白组、PMA+甲强龙组、PMA+丙种球蛋白+甲强龙组5组进行PBMC培养48 h,收集上清液,ELISA法测定上清液中TNF-α含量。结果 KD组TNF-α含量均高于发热对照组和正常对照组(P<0.05),差异有统计学意义;KD组中,PMA+丙种球蛋白组、PMA+甲强龙组、PMA+丙种球蛋白球+甲强龙组与PMA组比较(P<0.05),差异有统计学意义;KD组中,冠脉扩张组TNF-α含量明显高于冠脉正常组(P<0.05),差异有统计学意义。结论丙种球蛋白及甲强龙有效抑制KD患者PBMC释放TNF-α,抑制TNF-α释放可能是丙种球蛋白、甲强龙治疗川崎病的作用机制之一。
- 顾晓琼万根平伍时冠赵明光张白杜
- 关键词：丙种球蛋白甲强龙川崎病外周血单个核细胞肿瘤坏死因子-Α
- 分离人外周血单个核细胞和粒细胞一步法与两步法比较被引量：3
- 2013年
- 目的比较Ficoll一步法和Ficoll两步法的体外分离效果,优化分离人外周血单个核细胞(PBMC)和粒细胞的方法和条件。方法取EDTA抗凝血,分别用Ficoll一步法和Ficoll两步法分离PBMC和粒细胞,用血细胞分析仪进行细胞计数和分类,计算回收率和纯度,评价两种方法的分离效果。结果一步法获得PBMC回收率(82.38±13.57)%,粒细胞回收率(36.22±19.46)%,PBMC纯度(75.5±16.26)%,粒细胞纯度(58.2±27.11)%,而二步法获取PBMC回收率(32.93±51.81)%,粒细胞回收率(1.01±2.25)%,PBMC纯度(42.7±45.72)%,粒细胞纯度(3.2±7.12)%。经卡方检验,Ficoll一步法和Ficoll两步法的分离回收率χ2=21.06,纯度χ2=10.892两者均有统计学差异(P<0.01)。结论 Ficoll一步法获得PBMC和粒细胞回收率和纯度明显高于Ficoll两步法,同时,Ficoll一步法分离过程简单化、有利缩短工作时间、提高工作效率,与Ficoll两步法相比除了简化操作外,也减少了耗材,降低了试验成本,对同时分离人PBMC和粒细胞较适用。
- 张白杜顾晓琼赵明光刘云锋梁肖云
- 关键词：粒细胞外周血单个核细胞细胞分离
