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间日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定被引量：6: 2010年; 目的研制间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)单克隆抗体,并对抗体特性进行了初步鉴定。方法用纯化的重组PvLDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,测定其免疫球蛋白亚类及效价,结合ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果共获得5株稳定分泌抗PvLDH重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别为6D1、6D2、5A10、5C7、4A8。5株单抗培养上清的ELISA效价为1∶512～1∶1024,腹水效价为1∶12800～1∶25600,其中5C7、6D1经Western-blot鉴定能与天然的恶性疟原虫和间日疟原虫的LDH发生特异性反应。结论本研究方法成功制备并获得了针对PvLDH的单克隆抗体,为进一步研究疟疾诊断试剂奠定了基础。; 孙莉李明吴英松周志成廖小青郝文波; 关键词：间日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体

间日疟原虫乳酸脱氢酶GST融合表达载体的构建及表达: 2010年; 目的构建间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)融合表达载体,并表达PvLDH的GST融合蛋白。方法将PvLDH基因片段克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建PvLDH/pGEX-4T-1融合表达载体,IPTG诱导表达目的基因,SDS-PAGE电泳分析表达产物,Western blot检测其抗原性。结果成功构建了PvLDH/pGEX-4T-1融合表达系统,在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达,表达产物能与恶性疟原虫和间日疟原虫感染患者血清反应,而不与正常人血清反应。结论间日疟原虫LDH蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物具有良好的抗原性。; 周志成孙莉吴英松廖小青郝文波; 关键词：间日疟原虫乳酸脱氢酶

间日疟原虫乳酸脱氢酶的表达、纯化及免疫活性的鉴定被引量：5: 2008年; 目的在大肠杆菌中表达间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,对重组蛋白进行纯化并测定其免疫活性。方法将构建的LDH/pGEX-4T-1重组菌BL21接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,ELISA检测血清效价,Western-blotting鉴定其免疫活性。结果重组质粒在大肠杆菌中表达PvLDH与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在,经复性、纯化后免疫小鼠,能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,ELISA法测效价为1∶51200,Western-blotting结果显示该血清能特异性与间日疟和恶性疟患者全血发生反应,而不能与正常人起交叉反应。结论PvLDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性和免疫原性。; 孙莉郝文波吴英松王穗海李明; 关键词：恶性疟原虫乳酸脱氢酶免疫活性

疟原虫免疫胶体金试剂盒的研制及性能评价被引量：3: 2010年; 疟疾是严重威胁人类生命和健康的世界性公共卫生问题。WHO将发展准确、快速诊断疟疾的技术视为防治疟疾优先考虑的对策之一。疟疾一般发生在贫困地区，方便和价廉是卫生保健工作者首先要考虑的因素。因此，利用免疫层析试条技术开发快速诊断疟疾试剂盒，能更好地满足患者需求，具有良好的应用前景。; 周志成郝文波吴英松章平郝芬李明; 关键词：免疫层析试条疟原虫卫生保健工作者公共卫生问题

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广东省医学科学技术研究基金(A2006365)