山东省自然科学基金(Y2008C50)
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 相关作者：李堂陈志红田飞徐爱晶宋青更多>>
- 相关机构：青岛大学医学院附属医院广州市儿童医院靖江市人民医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子1基因对胰岛β细胞的保护作用被引量：4
- 2012年
- 背景:研究表明自身高表达胰岛素样生长因子1的小鼠对药物诱导糖尿病有一定的预防作用。目的:观察腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子1基因对胰岛β细胞损伤的保护作用。方法:①体外实验:以Ad-rIGF-1、Ad-eGFP直接感染鼠胰岛β细胞标准细胞株-R1Nm5F细胞,然后两组再分别加入0,1.5mmol/L链脲佐菌素。②体内预防实验:将60只昆明小鼠随机分为空白对照组(不做任何处理)、糖尿病对照组(制作糖尿病模型)、空载体对照组(仅腹腔注射Ad-eGFP重组腺病毒液)、Ad-rIGF-1组(于糖尿病模型制作前2周腹腔注射Ad-rIGF-1重组腺病毒液)。③体内治疗实验:将75只昆明小鼠随机分组:空白对照组(不做任何处理)、糖尿病对照组、胰岛素组、Ad-rIGF-1组、Ad-rIGF-1联合胰岛素组。后3组制作糖尿病模型后给予相应干预。结果与结论:①鼠胰岛素样生长因子1在胰岛β细胞有效表达,并具有抑制链脲佐菌素诱导胰岛β细胞凋亡的作用。②Ad-rIGF-1组糖尿病发病率低,平均血糖水平低,胰腺炎症浸润程度轻。③与糖尿病对照组、胰岛素组相比,Ad-rIGF-1组和Ad-rIGF-1联合胰岛素组胰腺炎症浸润程度轻,鼠胰岛素样生长因子1在胰岛局部高表达;胰岛素组、Ad-rIGF-1组、Ad-rIGF-1联合胰岛素组血清C-肽水平低,组间比较无明显差别(P>0.05)。表明胰岛β细胞局部表达鼠胰岛素样生长因子1能够保护胰岛β细胞功能,提高细胞存活率,预防和减轻链脲佐菌素诱导的昆明小鼠1型糖尿病。但鼠胰岛素样生长因子1基因转导与胰岛素皮下注射联合应用对糖尿病早期残存胰岛细胞功能的保护效果不明显。
- 宋青乔凌燕田飞陈志红李堂
- 关键词：胰岛素样生长因子1腺病毒链脲佐菌素昆明小鼠1型糖尿病
- 腺病毒介导的白介素10基因转导对鼠胰岛β细胞的保护作用被引量：1
- 2011年
- 目的观察腺病毒介导的白介素10(IL-10)基因转导对体外及体内胰岛β细胞的保护作用。方法用携带有IL-10基因的重组腺病毒载体感染RINm5F细胞、昆明小鼠及链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠,ELISA检测IL-10基因表达、胰岛素水平,病理切片及免疫组化观察胰岛炎积分。结果 RINm5F细胞中检测到IL-10基因及蛋白的有效表达,含IL-10的重组腺病毒(Ad-IL-10)可抑制STZ致细胞凋亡作用。昆明小鼠腹腔注射Ad-IL-10后,再经STZ诱发为1型糖尿病,Ad-IL-10组胰岛炎积分明显降低。经STZ诱导的早期1型糖尿病小鼠,Ad-IL-10组与其他组相比平均血糖水平差别无统计学意义,小鼠胰岛炎症浸润程度与糖尿病对照组差别无统计学意义。结论腺病毒介导的IL-10可在胰岛RINm5F细胞有效表达,并且具有抗凋亡的能力。IL-10基因能够保护胰岛β细胞功能,促进胰岛素分泌,减少小鼠的胰岛炎和糖尿病的发生。IL-10基因对于已发生1型糖尿病早期的昆明小鼠无显著的治疗作用。
- 张芳萍徐爱晶刘栋田飞陈志红李堂
- 关键词：腺病毒白介素101型糖尿病小鼠
- 腺病毒介导胰岛素样生长因子-1基因对链脲佐菌素诱发1型糖尿病大鼠的保护作用被引量：1
- 2010年
- 目的观察腺病毒介导胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因对链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠1型糖尿病(T1DM)的预防保护作用,比较肌肉注射、腹腔注射及胰腺被膜下注射3种不同注射途径的效果。方法4～6周龄SD雄性大鼠90只,随机分为糖尿病对照组(A组)、空白对照组(B组)、腺病毒空载体对照组(C组)、肌肉注射含有IGF-1基因的重组腺病毒(Ad-rIGF-1)组(D组)、腹腔注射Ad-rIGF-1组(E组)、胰腺被膜下注射Ad-rIGF-1组(F组),每组各15只。A组、B组不做任何处理,C组注射含空载体(Ad-eGFP)的重组腺病毒液0.1mL,D组、E组、F组注射含Ad-rIGF-1的重组腺病毒液0.1mL。1周后,A组、D组、E组及F组腹腔注射STZ50mg.kg-1诱发糖尿病,每周测定体质量、血糖。5周后,处死大鼠,取其胰腺做病理切片及免疫组织化学法观察胰腺炎症浸润程度和IGF-1局部表达程度;取下腔静脉血,测定IGF-1和胰岛素水平。结果D组、E组、F组与A组比较,糖尿病发病率低,平均血糖水平低,但血糖水平明显高于B组和C组。胰腺切片HE染色显示D组、E组、F组胰腺炎症浸润程度较A组轻,但明显重于B组、C组,免疫组织化学法显示D组、E组、F组IGF-1胰岛局部高表达,与A组、B组、C组比较有统计学差异;D组、E组、F组血清胰岛素水平相对较A组高,且与B组、C组比较无统计学差异;各组之间血清IGF-1水平比较无统计学差异。结论IGF-1基因对STZ诱导的SD大鼠T1DM有一定的预防作用,但与IGF-1注射途径无明显相关。
- 解秀文田飞陈志红李堂
- 关键词：胰岛素样生长因子-1腺病毒链脲佐菌素1型糖尿病
- 腺病毒介导的IL-10基因对1型糖尿病发病早期NOD鼠胰岛β细胞的保护作用
- 2014年
- 目的：观察腺病毒介导的IL-10（Ad-mIL-10）基因干预对1型糖尿病（T1DM）发病早期的非肥胖型糖尿病（ NOD）鼠胰岛β细胞的保护作用。方法选取17～20周龄近期发病（诊断为T1DM不超过3 d）的雌性NOD小鼠12只，随机分为A、B组（各6只），A组发病后立即予腹腔注射0．1 mL的Ad-mIL-10，B组未予任何干预；另选取相同周龄未发病的NOD鼠6只为C组，未予任何干预。实验前及实验开始后的第1、2、3周记录小鼠体质量、尿糖及血糖；第3周时处死全部小鼠，摘眼球法取全血并测血清 IL-10、IFN-γ、IL-4和 C肽；取胰腺做病理切片，HE及免疫组化染色，观察小鼠胰岛炎性浸润程度及IL-10基因在胰腺的表达情况。结果与B组相比，A组胰腺局部IL-10高表达、血清IL-10水平升高（P＜0．01）；A组血清IFN-γ水平较B组降低、IL-4及IL-10水平较B组升高、IFN-γ／IL-4较B组降低，两组相比， P均＜0．01；A组血清C肽水平较B组升高，两组相比，P＜0．01。结论 Ad-mIL-10基因干预可对自然发病NOD小鼠发挥一定的免疫调节作用，一定程度上改善其胰岛β细胞功能。
- 李诚林晓杰陈燕燕张丽娟李堂
- 关键词：糖尿病1型糖尿病
- 腺病毒介导的白细胞介素10基因转移对胰岛β细胞凋亡及胰岛素释放的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 了解鼠白细胞介素10（mIL-10）基因转移对RINm5F胰岛β细胞凋亡及胰岛素释放功能的影响,以探讨其对1型糖尿病的潜在治疗价值.方法 携带有IL-10基因的重组腺病毒载体Ad-mIL-10感染RINm5F细胞（Ad-mIL-10组）,并设置重组腺病毒载体（Ad-eGFP）组及未感染组为对照,通过RT-PCR、Western印迹及酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测IL-10基因和蛋白表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析细胞活力,放射免疫法行胰岛素释放实验.检测加入白细胞介素1-β（IL-1β）诱导细胞破坏后,Ad-mIL-10对培养上清中一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）水平的影响,Hoechst33258核染色分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞表面Fas表达.结果 RINm5F细胞中检测到mIL-10基因及蛋白的有效表达,培养液中町测得IL-10蛋白.IL-10重组腺病毒感染胰岛β细胞后仍具有在高糖浓度下刺激胰岛素分泌的功能.将IL-1β作用于细胞后,Ad-mIL-10组NO、NOS水平低于未感染组及Ad-eGFP组[NO水平（nmol/10^6 cells）：52.9±3.2比227.3±26.4、235.1±28.6,均P＜0.05;NOS水平（U/10^6 cells）：9.3±1.2比29.8 ±2.5、30.5±2.8,均P＜0.05].Fas表达阳性细胞数明显低于未感染组及Ad-eGFP组（24.6%±1.0%比33.3%±5.1%、32.6%±1.1%,均P＜0.05）;细胞凋亡率也低于其他两组（9.4%±1.1%比19.2%±2.2%、20.6%±2.3%,均P＜0.05）.结论 携有mIL-10基因的重组腺病毒可在RINm5F细胞有效表达,通过抑制IL-1β诱导的Fas表达而起到抗凋亡作用,胰岛细胞生理功能不受影响.
- 徐爱晶陈志红田飞阎丽华李堂
- 关键词：基因疗法白细胞介素10细胞凋亡
- 腺病毒介导的鼠IL-10基因对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞的保护作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨腺病毒介导的鼠IL-10(Ad-rIL-10)基因对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病早期胰岛β细胞的保护作用。方法随机将46只NOD小鼠分为4组:生理盐水对照组10只、糖尿病对照组12只、空载体对照组12只、Ad-rIL-10组12只。除生理盐水对照组外,其他组腹腔注射环磷酰胺诱导糖尿病早期模型。成模后,Ad-rIL-10组立即给予腹腔注射含Ad-rIL-10的重组腺病毒液0.1 mL、空载体对照组给予含Ad-eGFP的重组腺病毒液0.1 mL,其他组给予等量生理盐水。每周检测小鼠体质量、血糖。3周后处死小鼠,留取小鼠血清标本,采用ELISA法测定血清C肽、IFN-γ、IL-4及IL-10水平;制作胰腺标本,免疫组化法观察小鼠胰腺炎症浸润程度和rIL-10局部表达情况。结果与生理盐水对照组相比,成模后其他组血糖水平、体质量变化有明显差异(P均<0.05),血清IFN-γ水平明显增高(P均<0.05),而IL-4、IL-10和C肽水平明显降低(P均<0.05)。糖尿病对照组、Ad-rIL-10组、空载体对照组血糖水平、体质量、胰岛炎症浸润程度及血清学指标变化不明显。结论 Ad-rIL-10基因对NOD小鼠1型糖尿病早期胰岛炎症无明显减轻作用,对残余胰岛β细胞无明显保护作用。
- 陈燕燕张芳萍宋青乔凌燕刘栋田飞徐爱晶陈志红李堂
- 关键词：白细胞介素10腺病毒基因治疗NOD小鼠
- 胰岛素样生长因子Ⅰ基因转移对NOD鼠胰岛炎及胰岛β细胞凋亡的保护作用被引量：1
- 2011年
- 探讨腺病毒介导的胰岛素样生长因子Ⅰ（Ad-IGF—Ⅰ）对NOD鼠胰岛炎及胰岛β细胞凋亡的影响。结果发现Ad-IGF—Ⅰ可减少糖尿病的累积发病率，降低胰岛炎积分、促进胰岛β细胞增殖，减少β胞凋亡率，使Fas、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的蛋白低表达，Bcl-xl蛋白高表达。提示Ad—IGF—Ⅰ可减少NOD鼠胰岛炎，通过Fas和Bcl-xl途径发挥抗凋亡作用。
- 徐爱晶陈志红田飞阎丽华李堂
- 关键词：细胞凋亡
- 黄芪对小鼠胰岛炎及胰岛β细胞凋亡的保护作用被引量：9
- 2013年
- 目的探讨黄芪在体内对胰岛β细胞的保护作用。方法将56只健康雄性昆明小鼠随机分为对照组、糖尿病（DM）对照组及不同剂量黄芪干预组。不同剂量黄芪预处理小鼠，链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导DM发生，观察DM发生情况；硝酸还原酶法检测各组小鼠血清中一氧化氮（NO）水平；化学比色法检测血清中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性；ELISA法检测血清胰岛素水平；病理切片观察胰岛炎积分；末端脱氧核苷酰基转移酶介导dUTP切口末端标记法检测胰岛β细胞凋亡。结果1．DM对照组小鼠于STZ注射1周后开始发病。黄芪大剂量[30g/（kg·d）]组于STZ注射2周后开始发病，与DM对照组比较，DM发生延缓，DM发病率显著降低（P〈0．01）。黄芪小剂量[15g／（kg·d）]组于STZ注射1周后开始发病，与DM对照组比较，DM发病率有所降低，但差异无统计学意义（P〉0．05）。2．与DM对照组比较，黄芪大剂量组显著降低iNOS活性和NO水平（P均〈0．01），同时降低胰岛炎积分和胰岛β细胞凋亡率（P均〈0．01）。黄芪小剂量组上述指标均有所降低，但差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论在体内黄芪对胰岛β细胞具有保护作用，与降低iNOS活性、减少NO生成，抑制胰岛β细胞凋亡有关；并可改善机体清除自由基能力，有效预防和延缓DM的发生。
- 郝萌萌李蕾陈志红李堂
- 关键词：胰岛Β细胞一氧化氮凋亡小鼠
