国家自然科学基金(81271990)
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
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- E-Cadherin与干细胞的调控研究进展
- 2013年
- 干细胞是一类分化程度低，具有分化成不同类型细胞潜能且可自我更新的一类细胞。粘附分子是指由细胞产生、存在于细胞表面、介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合的一类分子。粘附分子可以使干细胞锚定于niche中，为干细胞-niche信号传递搭建平台，同时提供了极性线索引导干细胞分裂，对干细胞的对称和不对称分裂的选择及其连续、长期的自我更新起重要作用。
- 陈栋李少华
- 关键词：E-CADHERIN干细胞
- E-cadherin重组慢病毒载体的构建及表达
- 2014年
- [目的]构建E-cadherin过表达和RNAi慢病毒载体,转染A549肿瘤细胞,观察E-cadherin的表达。[方法]根据Gene Bank E-cadherin的序列,选择设计两条序列和一条无关RNAi序列作为对照,通过Mlu I和Nde I两个酶切位点,将设计好的siRNA片段插入包装质粒PHR-SIN-CSGW-H1a(PHR)构建E-Cadherin RNAi慢病毒载体PHR-EA、PHR-EB。PCR扩增E-cadherin基因与pc DNA3.1质粒使用Bam HI、Xho I双酶切,连接鉴定后,亚克隆至慢病毒载体PHR,构建-E-cadherin过表达慢病毒载体PHR-E-cadherin。慢病毒包装后,感染A549肿瘤细胞,观察表达。[结果]成功构建E-cadherin过表达和RNAi慢病毒载体,并分别经PCR和质粒酶切鉴定。RTPCR检测E-cadherin的干扰和过表达情况,两个E-cadherin的RNAi病毒感染细胞后,都能使目的基因表达下调,而E-cadherin过表达慢病毒转染后细胞的E-cadherin表达明显提高了。Western Blot检测证实E-cadherin的表达确实被慢病毒所上调和干扰。[结论]成功构建出E-cadherin基因过表达和RNAi慢病毒载体,并在A549肿瘤细胞中成功表达,为进一步转染神经干细胞观察其生物学影响及对脊髓损伤修复的效果奠定基础。
- 陈栋吴众罗林杰刘杰李少华
- 关键词：E-CADHERIN基因RNA干扰过表达神经干细胞
- E-钙粘附素/β-连环素复合体对孕鼠神经干细胞迁移和归巢的影响
- 2014年
- [目的]干细胞的微环境是影响干细跑行为的关键因素之一，微环境中的粘附分子E-钙粘附素是其重要组成部分，在微环境中扮演重要角色，它功能的发挥离不开β-连环素，常作为一种复合体研究他们的功能。本课题采用实时定量PCR技术测量神经干细胞在原代和传代4—6代后E-钙粘附素和β-连环素的表达量是否有所变化，同时在蛋白表达水平借助流式细胞技术测量β-连环素相应的表达变化，进而判断这两种粘附分子在神经干细胞的传代过程中有何影响，为神经干细胞的迁移、植入的研究打下基础。[方法]孕鼠神经干细胞若干，为了说明前后实验细胞均为神经干细胞，本实验在取得细胞之时，立刻取少量神经干细胞行特异性Nestin染色，证明其并未分化。取一部分进行实时定量PCR检测E-钙粘附素和β-连环素的含量，毕竟这是在RNA水平借助实时定量PCR来测量的，为了佐证本结论，在蛋白水平借助流式细胞计数测量β-连环素的含量变化，β-连环素是一种胞浆蛋白，在细胞核内也有少量的表达，且核内核外保持一种动态的平衡，口-连环素处于E-钙粘附素／β-连环素复合体的核心部位，它表达的变化也间接体现了E-钙粘附素／β-连环素复合体的变化。剩余的继续培养，保持传代不分化，传代4—6代，即2周左右，再一次重复前面的操作，统计前后的结果有无差别。[结果]原代及传代培养形成的克隆球进行神经干细胞特异性抗体巢蛋白（Nestin）免疫荧光染色时发绿色荧光，呈阳性反应。应用实时定量PCR技术发现神经干细胞传4—6代后，E-钙粘附素和β-连环素的含量明显增多，且差别具有统计学意义（P〈0．05）；相应的流式细胞技术测量β-eat的含量变化，发现β-连环素的含量也明显增多，且差别同样具有统计学意义（P〈0．01）。[结论]试验中神经干细�
- 吴众崔银江刘杰王建广陈栋余磊张磊李少华
- 关键词：E-钙粘附素Β-连环素神经干细胞
- 后踝骨折及后Pilon骨折的鉴别诊断及治疗进展被引量：8
- 2017年
- 后踝骨折是由于踝关节受到旋转暴力所致下胫腓后韧带牵拉引起后踝撕脱性骨折,是一种低能量损伤,一般不累及关节面。后Pilon骨折是由于踝关节受到旋转暴力联合垂直压缩暴力导致胫骨远端后方的关节内骨折,由Hansen于2000年首次提出,易误诊。本文对后踝骨折及后Pilon骨折的定义、损伤机制、临床分型、检查及鉴别诊断、手术指征、手术时机、手术入路、复位顺序、固定方式、并发症及预后作一综述。
- 林途刘杰李少华
- 关键词：后踝骨折内固定
