河北省科技厅资助项目(07276170)
- 作品数：8 被引量：29H指数：4
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- 相关机构：河北医科大学河北医科大学第三医院石家庄幼儿师范高等专科学校更多>>
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- 罗格列酮对高脂喂养大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β_1表达和细胞外基质沉积的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨高脂饮食对大鼠肾小管上皮细胞固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和细胞外基质(ECM)沉积的影响以及罗格列酮的干预治疗。方法:给予Wistar大鼠高脂饲料喂养并进行罗格列酮灌胃治疗3个月,进行血液生化检测。油红O检测肾脏脂质沉积情况,Masson染色检测肾脏细胞外基质沉积,SREBP-1、TGF-β1和FN蛋白表达检测采用免疫组织化学和Western blotting,原位杂交用于检测SREBP-1mRNA的表达。结果:罗格列酮有效避免了高脂饮食导致的大鼠血糖、血胰岛素和血甘油三酯的升高;高脂喂养组大鼠肾脏小管上皮细胞内出现了明显脂滴,小管外间质细胞外基质沉积增多,罗格列酮干预减少了脂滴和基质沉积;SREBP-1蛋白和RNA在高脂喂养组均呈高表达,明显强于正常对照组,经罗格列酮处理表达有显著下降,蛋白前体和成熟片段分别下降了27.39%和27.32%;致纤维化因子TGF-β1和细胞外基质成分之一的纤维黏连蛋白(FN)在高脂喂养大鼠肾脏的高表达均被罗格列酮干预治疗所避免,TGF-β1表达在罗格列酮干预组较高脂组降低了19.14%。结论:罗格列酮可有效避免高脂饮食造成的大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1高表达、脂质沉积和细胞外基质堆积。
- 郝军曹延萍朱琳刘淑霞段惠军
- 关键词：罗格列酮细胞外基质
- 高糖对人肾小球系膜细胞SREBP-1、FAS表达的影响
- 2009年
- 目的探讨高糖环境中人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)SREBP-1、FAS表达。方法体外培养HMC细胞,随机分为正常糖组、高糖组,免疫细胞化学、Western Blot和RT-PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)和脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)表达。采用脂质体转染技术将特异性SREBP-1质粒引入细胞内并进行表达,进一步采用RT-PCR方法检测脂肪酸合酶FAS的表达。结果与正常糖组比较,高糖培养的人肾小球系膜细胞固醇调节元件结合蛋白1前体和成熟体以及FAS mRNA表达均升高,差异有统计学意义。质粒转染后HMC细胞经免疫组化和Western blot检测证实特异性质粒能够在细胞内高表达SREBP-1蛋白,进一步对FAS的检测证实了FAS mRNA表达升高。结论高糖可诱导人肾小球系膜细胞固醇调节元件结合蛋白1和FAS表达增强且SREBP-1和FAS之间存在有直接关系。
- 郝军朱琳赵松刘巍要红叶刘淑霞段惠军
- 关键词：高糖人肾小球系膜细胞脂肪酸合成酶
- 靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响被引量：10
- 2009年
- 目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并最终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2。体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Westernblot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义。进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少。结论有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成。
- 郝军石宏赵松任韫卓段惠军
- 关键词：人肾小管上皮细胞脂肪酸合成酶
- 固醇调节元件结合蛋白1对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子β1和纤连蛋白表达的影响被引量：1
- 2009年
- 肾小球硬化和肾小管间质纤维化是糖尿病肾病的重要病理特征。转化生长因子β1（TGF-β1）可通过多种信号转导途径介导细胞外基质的沉积而引起纤维化。
- 郝军戎赞华刘淑霞任韫卓赵松段惠军
- 关键词：转化生长因子Β1肾小管上皮细胞糖尿病大鼠结合蛋白1肾小管间质纤维化固醇
- SREBP-1在1型糖尿病大鼠肾脏的表达和胰岛素的干预性研究被引量：8
- 2009年
- 目的探讨1型糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)的表达以及胰岛素处理的影响。方法以Wistar大鼠建立链脲佐菌素1型糖尿病模型并随机分为正常对照组,糖尿病模型组和胰岛素处理组。喂养2 wk后处死,测定肾皮质组织甘油三酯含量,油红O染色检测脂质沉积的部位;免疫组织化学、Western blot和原位杂交检测肾脏SREBP-1表达。结果与正常对照组相比,1型糖尿病大鼠肾脏甘油三酯含量明显升高,油红O检测示脂质沉积定位于肾近曲小管上皮细胞,肾小球内未见着色。胰岛素处理明显降低了甘油三酯含量,和糖尿病模型组相比差异有统计学意义。免疫组织化学检测SREBP-1定位于大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达量明显高于正常组和胰岛素处理组。Western blot证实了SREBP-1蛋白前体片段和成熟片段在糖尿病组的高表达,前体片段积分光密度比值为0.673±0.027,成熟片段为0.670±0.028,分别是正常组的1.86倍和1.77倍;胰岛素处理后SREBP-1蛋白前体片段表达下降了52.8%,成熟片段表达量下降了30.9%。原位杂交结果证实SREBP-1 mRNA定位于近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);胰岛素处理后其表达明显下降。结论1型糖尿病大鼠肾近曲小管上皮细胞SREBP-1 mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏脂质沉积,胰岛素处理可有效降低SREBP-1mRNA和蛋白表达。
- 郝军朱琳戎赞华段惠军
- 关键词：糖尿病脂质沉积胰岛素
- 高脂喂养大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1、α-SMA的表达和细胞外基质沉积被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨高脂喂养对大鼠肾脏小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1、α-SMA表达和细胞外基质(ECM)的影响。方法:高脂饲料喂养大鼠12周后,油红O检测肾脏脂质沉积,Masson染色检测肾小管间质细胞外基质沉积,免疫组化、Western blot和原位杂交检测SREBP-1、TGF-β1、α-SMA和FN的表达。结果:高脂喂养后大鼠体重明显增加,血糖、甘油三酯和胰岛素均升高,油红O检测显示大鼠肾小管上皮细胞内出现明显脂滴。SREBP-1蛋白和mRNA在肾小管上皮细胞内表达,高脂组高于正常对照组,分别是正常组的1.88倍和1.85倍;TGF-β1和α-SMA也定位于肾小管上皮细胞胞浆并出现上调。Masson染色显示高脂喂养大鼠肾间质ECM沉积增多,纤维粘连蛋白FN检测也显示模型组表达强于对照组。结论:高脂饮食喂养可能通过上调肾脏小管上皮细胞SREBP-1表达使细胞内脂滴沉积,并进一步诱导TGF-β1、α-SMA合成而导致细胞外基质堆积。
- 郝军刘淑霞韦金英要红叶段惠军
- 关键词：肾小管上皮细胞细胞外基质
- 高糖通过SREBP-1促进人肾小管上皮细胞转化生长因子β1和纤维黏连蛋白表达
- 2009年
- 高糖刺激人肾小管上皮细胞（HKC）48h后，固醇调节元件结合蛋白1（SREBP-1）、转化生长因子β（TGF—β1）和纤维黏连蛋白（FN）表达增加（均P〈0．01）。以RNA干扰技术下调SREBP-1表达后，高糖刺激的TGF-β1和FN蛋白表达分别减少17．9％和24．6％（均P〈0．01）。
- 郝军张金平谷江波刘淑霞段惠军
- 关键词：高糖人肾小管上皮细胞转化生长因子Β1纤维黏连蛋白
- SREBP-1和SREBP-2在Ⅰ型糖尿病大鼠肾脏中的表达被引量：7
- 2009年
- 目的:探讨糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-1和-2(SREBP-1,SREBP-2)的表达。方法:以Wistar大鼠建立链脲佐菌素Ⅰ型糖尿病模型,测定肾组织甘油三酯和胆固醇含量,采用油红O染色检测脂质沉积的定位;用免疫组织化学和Western blotting检测SREBP-1、SREBP-2蛋白的表达;SREBP-1 mRNA测定采用原位杂交技术。结果:成功构建了Ⅰ型糖尿病大鼠模型,甘油三酯含量在1、2、4、8周均出现了明显升高,而肾脏胆固醇含量没有明显变化。油红O检测发现糖尿病大鼠肾脏近曲小管上皮细胞内出现明显脂滴,而肾小球内未见有脂滴染色。免疫组织化学检测发现,SREBP-1定位于糖尿病大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞浆,肾小球内未见有棕黄色颗粒。Western blotting进一步检测了SREBP-1蛋白的表达,结果发现糖尿病大鼠肾组织在4个时点均呈高表达,相似地,SREBP-1 mRNA的检测应用原位杂交技术,结果证实其定位于肾小管上皮细胞胞浆,而肾小球内未见着色。与正常对照组相比,糖尿病组大鼠肾脏SREBP-1 mRNA表达明显升高,差异显著。结论:Ⅰ型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1 mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏代谢异常。
- 郝军王晨吴海江赵松段建召史永红段惠军
- 关键词：糖尿病肾病
