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国家自然科学基金(31100528)

作品数:3 被引量:2H指数:1
相关作者:徐春艳孙丽华何建华许新磊李健更多>>
相关机构:中国科学院上海应用物理研究所更多>>
发文基金:国家自然科学基金中国科学院知识创新工程领域前沿项目更多>>
相关领域:生物学更多>>

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 3篇生物学

主题

  • 2篇蛋白
  • 1篇亚胺
  • 1篇原子
  • 1篇天花粉
  • 1篇天花粉蛋白
  • 1篇酮亚胺
  • 1篇鸟嘌呤
  • 1篇切除
  • 1篇切除修复
  • 1篇球菌
  • 1篇重原子
  • 1篇嘌呤
  • 1篇位点
  • 1篇位点分析
  • 1篇酶基因
  • 1篇酶基因克隆
  • 1篇结合蛋白
  • 1篇花粉
  • 1篇花粉结构
  • 1篇还原酶

机构

  • 2篇中国科学院上...

作者

  • 2篇何建华
  • 2篇孙丽华
  • 2篇徐春艳
  • 1篇周欢
  • 1篇杨敏
  • 1篇郁峰
  • 1篇陈亚星
  • 1篇刘亚辉
  • 1篇李健
  • 1篇许新磊

传媒

  • 1篇微生物学通报
  • 1篇核技术
  • 1篇Nuclea...

年份

  • 2篇2014
  • 1篇2012
3 条 记 录,以下是 1-3
排序方式:
1.9分辨率μ-crystallin蛋白晶体结构及其酮亚胺还原酶活性位点分析被引量:2
2012年
采用不同的结晶条件生长了μ-crystallin晶体(CRYM)并解析了人源CRYM与NADPH复合物晶体结构(PDB code 2I99),将分辨率由2.6提高至1.9,修正了2I99的结构。CRYM单体相较2I99结构少3个β折叠和一个310螺旋。NADPH Pro-R面具有多个保守位点可能参与酮亚胺还原酶活性,通过与同源蛋白OCD和AlaDH比对,推测了底物结合位点和催化位点。
许新磊李健孙丽华徐春艳何建华
Using Xe as a heavy atom for phase determination of protein trichosanthin structure
2014年
Under gas pressures of 1–3 MPa, xenon can be bound to discrete sites in hydrophobic cavities of protein,so as to use Xe as a heavy atom for determining phases in protein crystallography. Using single anomalous scattering diffraction method, we demonstrate that an interpretable electron density map can be obtained for protein trichosanthin from a single xenon derivative. We found, for the first time, a pre-existing hydrophobic cavity just under the protein surface of trichosanthin.
陈亚星李敏军郁峰刘科徐春艳孙波周欢徐琴何建华
关键词:重原子花粉结构天花粉蛋白反常散射
火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶基因克隆、表达纯化和酶学性质研究
2014年
【目的】在大肠杆菌中表达火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,纯化得到重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,在此基础上系统研究火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学特征。【方法】构建8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶重组表达质粒,将重组质粒转化Escherichia coli Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达重组蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白;最后利用含8-氧鸟嘌呤损伤的寡核苷酸作为底物,测定8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学性质。【结果】在大肠杆菌中成功诱导表达了重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,经Ni2+亲和纯化后蛋白纯度大于95%。在体外鉴定了重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学性质。结果表明重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶可以切除DNA中的8-氧鸟嘌呤(8-Oxo-G,GO)损伤碱基,并且具有AP裂解酶活性。重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶催化反应的最适pH值和温度分别是pH 8.5和55°C。除Zn2+对火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶促反应有明显的抑制作用外,实验中测定的其它二价离子(Mn2+,Mg2+,Ca2+,Ni2+,Co2+,Cu2+)对其没有明显的影响。离子强度在50-100 mmol/L范围内对其酶促反应影响不大,超过100 mmol/L时有明显的抑制作用。与8-氧鸟嘌呤互补的碱基差异对火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶切除8-氧鸟嘌呤损伤的效率影响不大;但与单链DNA相比,双链DNA是优选底物,切割效率如下:GO/C≈GO/G≈GO/T≈GO/A>GO/-。【结论】在大肠杆菌中成功表达,并Ni2+亲和纯化了火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,生化研究表明制备的重组蛋白具有8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶活性,可能负责切除火球菌基因组DNA中的8-氧鸟嘌呤损伤。
周欢杨敏陈亚星刘亚辉孙丽华徐春艳郁峰何建华
关键词:碱基切除修复
共1页<1>
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