国家高技术研究发展计划(2006AA02Z249)
- 作品数：14 被引量：40H指数：4
- 相关作者：刘正初段盛文郑科冯湘沅成莉凤更多>>
- 相关机构：中国农业科学院麻类研究所湖南农业大学广西大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家麻类产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 欧文氏杆菌CXJZ11-01基因组文库的构建被引量：6
- 2008年
- 采用改良鸟枪法构建了草本纤维精制高效菌种CXJZ11-01的基因组文库,通过透明圈法筛选到了2个木聚糖酶基因阳性克隆。
- 石君刘正初成莉凤段盛文郑科冯湘沅胡镇修
- 关键词：基因组文库木聚糖酶基因
- 清洁型草本纤维生物提取工艺的污染机理研究被引量：14
- 2008年
- 【目的】研究草本纤维生物提取过程中的物质变化规律,为草本纤维生物提取废水处理提供依据。【方法】在草本纤维原料生物脱胶、生物制浆过程中,分别采用高锰酸钾法、重量法、膜分离技术、DNS和考马斯亮蓝比色法测定了各类物质的变化规律。【结果】草料发酵阶段微生物可消耗占草料总量10%左右的非纤维素物质;发酵以后通过水洗可除去占草料总量15%以上的非纤维素物质,其中分子量大于10kD的颗粒状物质占90%,分子量小于10kD的水溶性还原糖和蛋白质仅占10%。由此可以肯定,生物提取工艺不仅从源头上大幅度减少了污染物的排放量,而且因为该工艺中废水的水质单一、废水中污染物多呈颗粒状,可以通过物理分离方法除去,污染处理负荷大幅度减轻。【结论】草本纤维生物提取工艺,可以减少30%～60%有机污染物排放量,其污染物90%来自原料中的大分子颗粒或块状有机物脱落物。
- 刘正初张运雄冯湘沅段盛文郑科胡镇修
- 关键词：污染机理
- 不同地点筛选纤维素酶产生菌的研究进展被引量：7
- 2012年
- 纤维素酶在能源、饲料、食品、纺织、造纸等方面广泛应用,对改善目前资源紧张、粮食短缺的状况,人类可持续发展和寻找替代能源有重要意义。为了更好的选育到适合需求的高产纤维素酶菌株,综述了筛选土壤、腐殖质、粪便及酒曲等固体环境样品、温泉和极地海洋等液体环境样品和昆虫、动物体内、植物组织、真菌等生物体内样品,以得到纤维素酶高产菌株的研究,其中来自不同土壤样品中的纤维素产生菌最多。为了找到理想的高产菌株,还需在以下几个方面加强研究:(1)在纤维素酶最有利的生长的环境条件下进行筛选;(2)同时筛选几种类似功能的酶用于相关方面的应用研究;(3)筛选不同土壤环境,从中选择出较好的纤维素酶。
- 李琦刘伍生刘正初
- 关键词：纤维素酶菌种纤维素
- β-甘露聚糖酶基因高效表达体系的构建被引量：2
- 2009年
- 为构建β-甘露聚糖酶基因高效表达体系,采用重叠区扩增基因拼接法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CTC S-层蛋白启动子和欧文氏杆菌(Erwinia carotovora)CXJZ95-198 β-甘露聚糖酶基因完整开放阅读框定向连接,得到基因拼接体slp-man。将slp-man克隆到高效表达载体pET-28a+上,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)JM109中。结果表明,β-甘露聚糖酶基因高效表达体系构建成功,重组菌发酵11h酶活达到671.3U·mL-1,是欧文氏杆菌CXJZ95-198的1.48倍。
- 李斌刘正初王溪森石岩
- 关键词：Β-甘露聚糖酶基因重叠区扩增基因拼接法
- BE-91菌株木聚糖酶活力测定条件的优化被引量：3
- 2010年
- 采用单因素试验法和正交试验法对BE-91菌株木聚糖酶活力测定条件进行系统研究,获得优化的木聚糖酶活力测定条件为:按1/9的比值添加稀释100倍的木聚糖酶与预热至62℃的浓度为0.8%的木聚糖底物(用pH值5.4～5.6的0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液配制),62℃水浴准确反应3min,加入2.0mLDNS溶液,沸水浴显色10min,测定波长为540nm。在此优化条件下,测得BE-91菌株木聚糖酶活力达350.24U/mL。
- 张居作徐君飞陈汉忠刘正初戴良英段盛文冯湘沅郑科成莉凤郑霞
- 关键词：正交试验法
- 草本纤维提取专用复合酶工程菌株的构建
- 2009年
- [目的]研究如何构建草本纤维提取工程菌株。[方法]用PCR扩增的方法获得甘露聚糖酶、果胶酶和木聚糖酶DNA片段,连到载体上,获得单质酶表达载体,依次将单质酶载体转入大肠杆菌JM109中,使其共存于同一宿主细胞。[结果]获得了一个果胶酶新基因(EU597234);得到了能同时产甘露聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶3种酶的复合酶工程菌株。[结论]草本纤维生物提取是一个复杂的生物反应过程,构建草本纤维提取菌株既要考虑菌株所产的酶又要考虑菌株本身的生物学特性。
- 王溪森刘正初李斌冯湘沅段盛文郑科成莉凤
- 关键词：菌株果胶酶
- DCE-01菌株果胶酯酶基因克隆与表达被引量：3
- 2013年
- 从麻类脱胶高效菌株DCE-01中克隆果胶酯酶基因并进行原核表达。根据全基因组测序注释结果设计引物,PCR扩增果胶酯酶基因连接到pEASY-E1载体上,导入大肠杆菌进行诱导表达,采用水解圈法进行选择和定量分析。结果表明:克隆出全长1107bp的果胶酯酶基因(GenBank登录号:KC422449),编码368个氨基酸;该基因表达蛋白质序列的前26个氨基酸为信号肽,前导蛋白的分子量约为39.6ku,成熟蛋白为36.9ku,pI为9.1;基因工程菌株以高度酯化橘子果胶为底物的发酵液粗酶活为1.5IU/mL,是原始菌株DCE-01的22.4倍。本研究成功发掘出果胶酯酶基因,其表达产物果胶酯酶能降解高甲氧基果胶,在低甲氧基果胶制备方面具有重要应用前景。
- 成莉凤李琦刘正初段盛文冯湘沅郑科郑霞程毅
- 关键词：果胶酯酶基因克隆原核表达
- 木聚糖酶高产菌株BE-91发酵工艺的优化被引量：6
- 2009年
- 采用因素轮换试验设计和均匀试验设计对现有枯草芽孢杆菌BE-91菌株的发酵工艺进行系统研究,获得木聚糖酶高产的优化发酵工艺为:国产胰蛋白胨1.5%,国产酵母膏0.05%,牛肉膏0.3%,KH2PO40.2%,MgSO40.03%,NaCl 0.5%,吐温80 0.4%,起始pH9.2,摇瓶装液量150 mL/500 mL,接种量3.5%,转速180 r/min,发酵温度37℃。在优化发酵工艺条件下培养BE-91菌株8 h,发酵液木聚糖酶活力达到423.24 U/mL,是优化前酶活力的1.5倍。BE-91菌株在国内已报道菌株中具有发酵周期短、耐热酸性木聚糖酶活力高的特点。
- 徐君飞刘正初张居作戴良英陈汉忠段盛文冯湘沅郑科成莉凤郑霞
- 关键词：木聚糖酶酶活力发酵工艺
- Mini-Tn10转座子构建欧文氏杆菌突变体的研究被引量：1
- 2010年
- 构建细菌突变体是发现新基因、分析基因功能、了解某些生物机理的重要途径。本研究通过转座子Mini-Tn10对迄今报道草本纤维提取效率最高的菌株胡萝卜软腐欧文氏杆菌(Erwinia carotovor)变异菌株CXJZU120进行随机突变,获得5 523个突变体。采用非纤维素降解实效法和水解圈法等功能性鉴定,筛选出3个非纤维素降解活性降低或丧失的突变体,为深入研究非纤维素降解机理,寻找与非纤维素降解相关基因并构建新一代高效菌株奠定了基础。
- 石岩刘正初徐君飞张居作李炫
- 关键词：转座子突变体
- 欧文氏杆菌CXJZ95-198甘露聚糖酶基因N端缺失表达被引量：1
- 2010年
- 用PCR的方法从甘露聚糖酶高产菌欧文氏杆菌CXJZ95-198中克隆到甘露聚糖酶基因manA全长以及其N端缺失81、111、141 bp的片段,连接到pET28a载体再转入大肠杆菌BL21(DE3)中,用透明圈法鉴定其酶活性。结果表明,删除了manA N端111 bp的翻译产物依然具有酶活性,删除了N端141 bp的翻译产物无酶活性,manA N端111～141 bp可能具有重要意义。
- 李炫彭克勤刘正初
- 关键词：甘露聚糖酶
