国家自然科学基金(81271979)
- 作品数：13 被引量：28H指数：4
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- 成骨前体细胞对乳腺癌细胞表达骨拟态特性及增殖的影响被引量：1
- 2016年
- 目的通过共培养体系探讨成骨前体细胞MC3T3-E1对MDA-MB-231乳腺癌细胞表达骨拟态特性及增殖的影响。方法实验组将MC3T3-E1及MDA-MB-231细胞采用transwell小室共培养,上室接种MC3T3-E1成骨细胞,下室接种相同数量的MDA-MB-231细胞。对照组上、下室均采用相同数量及密度的MDA-MB-231细胞。实时荧光定量PCR、Western blot法检测实验组及对照组骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的基因及蛋白的表达差异,采用CCK-8法检测各组增殖的差异,结晶紫染色法检测细胞集落形成差异。结果与对照组相比,实验组OCN、OPN、OPG的基因及蛋白表达均有明显的上调(P<0.05),MDA-MB-231细胞的增殖能力明显增高(P<0.01);实验组MDA-MB-231细胞集落形成数量及大小均优于对照组。结论短期共培养后MC3T3-E1成骨细胞可促进乳腺癌MDA-MB-231细胞表达骨拟态特性,并可促进其增殖及细胞集落形成。
- 马敏胡旭陈武桂邱浩臧乐源胡建新周跃初同伟
- 关键词：乳腺癌MDA-MB-231
- CD147在肿瘤骨转移中作用的研究进展被引量：1
- 2013年
- CD147分子是一种广泛存在于人体各组织器官的属于免疫球蛋白超家族的糖蛋白,参与机体多种生理过程.CD147已被证实在多种体内外肿瘤细胞中表达增加,促进肿瘤的侵袭和转移,并促进肿瘤骨转移中破骨细胞的活化.其与肿瘤骨转移的关系是目前肿瘤细胞生物学研究领域的热点之一.
- 王汝杰初同伟
- 关键词：CD147肿瘤转移破骨细胞
- Jagged1活化Notch通路促进破骨细胞分化并抑制其增殖被引量：4
- 2014年
- 目的 观察Jagged1通过活化Notch通路对人外周血CD14＋单核细胞破骨分化、增殖的影响.方法 免疫组织化学法检测Jagged1在肺癌骨转移标本中的表达,Ficoll法联合磁珠分选法分离人外周血CD14＋单核细胞,分别加入Jagged1重组蛋白、Jagged1重组蛋白及γ-分泌酶抑制剂（DAPT）分组培养,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测组织蛋白酶K（CK）、抗酒石酸性磷酸酶（TRAP）、降钙素受体（CTR）及Notch靶基因发状分裂相关增强子-1（HES-1）、HES相关YRPW主题-1（HEY-1）mRNA的表达,TRAP染色鉴定破骨细胞,扫描电镜检测破骨细胞溶骨功能.细胞计数法（CCK-8）检测CD14＋单核细胞增殖.结果 Jagged1在肺癌骨转移标本中高表达,癌旁组织无或低表达;Jagged1组TRAP、CK、CTR及HES-1、HEY-1 mRNA的表达、TRAP＋细胞数较对照组及DAPT组明显升高（P＜0.05）,而DAPT组与对照组比较均无明显变化;细胞培养48 h,Jagged1组细胞增殖较对照组及DAPT组明显抑制.结论 Jagged1通过活化Notch通路促进破骨前体细胞分化、抑制其增殖.
- 王汝杰邓小军刘复州邱浩邹传奇陈培王洪凯张莹初同伟周跃
- 关键词：JAGGED1破骨细胞NOTCH细胞分化
- PDGF-D抗体对体外破骨前体细胞分化过程影响的相关研究被引量：2
- 2013年
- 目的:用外源性血小板衍生生长因子-D抗体(Platelet-derived growth factor D antibody,PDGF-DAb)体外刺激外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨前体细胞分化过程的影响。方法:采集血并分离单个核细胞,将所得细胞分为三组:诱导组(PDGF-D+PBMCs)、阻断组(PDGF-D+PDGF-D Ab)和对照组(细胞培养基+PBMCs)。于第15天应用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和骨吸收实验观察破骨样细胞(Osteoclastlike cells,OLCs)的分化及活性;Real-time PCR检测OLCs标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9(Matrix metalloproteinases 9)mR-NA的表达;Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果:TRAP染色和骨吸收实验见诱导组有大量具有骨吸收功能的OLCs,而阻断组和对照组均未见。阻断组和对照组TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的相对表达量均显著低于诱导组(P<0.05),且二组间无显著差异(P>0.05)。对照组和阻断组中Cathepsin K蛋白(Western blot检测)和MMP-9(ELISA检测)表达均低于诱导组(P<0.05),且两组间无显著差异(P>0.05)。结论:外源性PDGF-D抗体可阻断由PDGF-D诱导的PBMCs向OLCs分化过程。
- 刘栓得黄晨许红飞胡旭张超初同伟
- 关键词：PBMCS
- 单纯经后路与经前路矫治脊柱半椎体畸形矫形效果的比较被引量：1
- 2014年
- 目的比较单纯经后路和经前路切除半椎体短节段固定的近、远期手术矫形效果及并发症发生率。方法笔者对自2000-01—2013-06采用单纯经后路和经前路切除半椎体短节段固定治疗的脊柱半椎体畸形各8例进行回顾性分析。结果全部患者获得随访6~110个月,平均62.9个月。经后路(A组)与经前路(B组)侧凸Cobb角末次随访矫正率分别为(53.38±21.54)%、(23.75±21.18)%;后凸Cobb角末次随访矫正率分别为(56.86±11.88)%、(3.63±20.44)%。A组侧、后凸矫形效果及躯干平衡的恢复明显优于B组。所有患者围手术期无神经系统并发症发生,无伤口愈合不良、椎弓根切割、钉棒断裂等。末次随访时未见假关节形成及其他并发症发生。结论对于半椎体畸形所致先天性脊柱侧后凸畸形患者,采用后路半椎体切除椎弓根钉固定系统矫形效果确切,术中出血少、手术时间短,明显优于单纯经前路单钉棒固定手术的矫形效果。
- 邹传奇邱浩王如杰刘复州周跃初同伟
- 关键词：脊柱畸形半椎体畸形前后路联合
- siRNA沉默Sema 4D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响被引量：4
- 2015年
- 目的:观察siRNA沉默信号素4D(semaphorin 4D,Sema 4D)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响。方法:构建靶向Sema 4D基因的siRNA,脂质体法转染MDA-MB-231细胞系,通过实时荧光定量-PCR、Western blotting检测干扰效率,筛选有效序列。siRNA有效干扰MDA-MB-231细胞Sema 4D表达后,CCK-8法及Transwell迁移实验检测细胞增殖及迁移能力的变化。结果:Sema 4D siRNA转染MDA-MB-231细胞后Sema 4D的(mRNA及蛋白)表达水平明显下降(P<0.05),其中以siRNA-C最明显(P<0.05);与空白、阴性对照组相比,siRNA-C沉默MDA-MB-231细胞Sema 4D表达可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖(均P<0.05),同时明显减弱细胞的迁移能力[穿膜细胞数:(105.60±12.07)vs(196.20±9.04)、(186.40±6.69)个,均P<0.05]。结论:siRNA沉默Sema 4D可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并抑制细胞迁移,可作为乳腺癌基因治疗的潜在位点。
- 陈武桂沈伟伟胡旭卓云云毛德举初同伟
- 关键词：SIRNA乳腺癌迁移
- 后路半椎体切除矫治先天性脊柱侧后凸的疗效分析被引量：4
- 2014年
- 目的通过对本院经后路一期半椎体切除矫治先天性脊柱侧后凸畸形患者的分析,探讨术后近远期矫形效果。方法 2008-2013年我院共对先天性脊柱半椎体畸形患者经后路半椎体切除植骨融合内固定术35例,男22例,女13例;年龄5-48岁,平均17.06岁。术前、术后即刻和随访时均拍摄脊柱正侧位X线片,并测量半椎体所致侧、后凸Cobb角等评估指标,分别计算它们的改善率,记录围手术期及远期并发症。结果手术时间1.75-5.83 h,平均3.68 h。术中出血量60-2 000 mL,平均767.78 mL。全部病例随访13-60个月,平均35.8个月。手术前、后及末次随访侧凸Cobb角分别为（44.41±18.49）°、（13.07±9.11）°、（15.54±8.94）°,术后即刻矫正率为（71.32±16.94）%,最终矫正率（64.35±19.53）%。手术前、后及末次随访后凸Cobb角分别为（34.58±26.18）°、（10.36±11.94）°、（11.94±11.81）°,术后即刻矫正率（67.91±21.89）%,最终矫正率（58.56±30.88）%。头侧出现新的后凸畸形1例,植骨不融合1例,通过二次手术,延长固定节段,畸形得到明显矫正。末次随访时均无椎弓根切割、神经系统并发症发生,无切口愈合不良、钉棒断裂及假关节形成等。结论对于先天性脊柱半椎体侧后凸畸形患者,采用一期经后路半椎体切除安全有效,具有手术时间短、出血量少、对脏器损伤小、并发症发生率低等优点。
- 邹传奇邱浩张正丰周跃初同伟
- 关键词：先天性脊柱侧凸脊柱后凸半椎体切除植骨融合
- 肺癌细胞条件培养液活化Notch通路促进破骨细胞分化被引量：1
- 2014年
- 目的 :体外检测肺腺癌A549细胞条件培养液(conditioned medium,CM)对人外周血CD14+单核细胞破骨分化和增殖的影响,探讨Notch通路相关因子在其中所起的作用。方法 :用含巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)的α-MEM细胞培养液培养健康成人外周血CD14+单核细胞,作为对照组;用M-CSF和人肺腺癌A549细胞CM培养人外周血CD14+单核细胞,作为A549 CM组;用M-CSF、A549细胞CM和γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸t-丁酯{N-[N-(3,5-dil uorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT}培养人外周血CD14+单核细胞,作为DAPT组。各组均在培养6 d后加入核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)继续培养。实时荧光定量-PCR法检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)、降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)及Notch靶基因HES-1、HEY-1的mRNA表达;TRAP染色法检测破骨细胞形成;扫描电子显微镜下观察破骨细胞溶骨功能;免疫荧光法检测Notch活性片段NICD的表达情况;CCK-8法检测CD14+单核细胞增殖情况。结果 :A549 CM组TRAP、CK和CTR表达水平以及TRAP+多核细胞数、溶骨面积和细胞核内Notch活性片段NICD的荧光强度均较对照组明显上调(P<0.05),而DAPT组较A549 CM组明显下调,但仍高于对照组(P<0.05);A549CM组HES-1和HEY-1 mRNA的表达水平明显高于DAPT组和对照组(P<0.05),后2者无明显差异;A549CM组细胞增殖率高于对照组,而DAPT组的细胞增殖率最高。结论 :肺腺癌A549 CM可能通过活化Notch通路,促进CD14+单核细胞向破骨细胞分化;同时Notch通路活化可抑制CD14+单核细胞增殖。
- 王汝杰沈伟伟黄晨刘复州胡旭张超初同伟周跃
- 关键词：破骨细胞NOTCH细胞分化
- 血小板衍生生长因子D对体外破骨细胞分化过程的影响被引量：1
- 2013年
- 目的用外源性血小板衍生生长因子D(platelet-derived growth factor D,PDGF-D)体外刺激外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨细胞(osteoclasts,OCs)分化过程的影响。方法采集外周血并分离单个核细胞,实验分为3组:阳性对照组为NF-κB配体激活因子(receptor or activator of NF-κB Ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)联合诱导,阴性对照组(细胞培养基)和实验组(PDGF-D)。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察各组破骨细胞前体细胞向破骨样细胞(osteo-clast like cells,OLCs)的分化情况,Real-time PCR检测破骨细胞标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9mRNA的表达情况,Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果①TRAP染色可见阳性对照组和实验组的OLCs显著多于阴性对照组。②阳性对照组和实验组TRAP、Cathepsin K、MMP-9mRNA的相对表达量均显著高于阴性对照组(P<0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P>0.05)。③阳性对照组和实验组MMP-9(ELISA检测)、Cathepsin K蛋白(Western blot检测)表达均显著高于阴性对照组(P<0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P>0.05)。结论外源性PDGF-D可在无RANKL/M-CSF的条件下于体外独立诱导破骨前体细胞向OLCs分化。
- 刘栓得初同伟张超黄晨余世明周跃
- 关键词：破骨细胞
- 有限稀释法分选人骨肉瘤143-B干细胞及鉴定
- 2015年
- 目的:探索人骨肉瘤143-B干细胞的分选及鉴定方法。方法:采用有限稀释法对143-B细胞进行干细胞的分选,并检测所获取细胞表面干细胞标志物Nanog和OCT4的表达水平;对所获取的细胞进行成骨及成脂诱导分化,以检测其是否具有多向分化的潜能;动物成瘤实验鉴定细胞的成瘤能力,耐药实验检测顺铂对细胞半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)的影响。结果:分选获得的单克隆143-L细胞具有较高的成球能力;143-L细胞表面Nanog和OCT4 m RNA和蛋白的表达水平均明显高于亲代143-B细胞;对其进行成骨及成脂多向诱导分化成功。143-L细胞的成瘤能力及耐药能力(顺铂对143-B及143-L细胞的IC50值分别为0.83和2.51μg/m L)均明显高于143-B细胞。结论:有限稀释法可以用于143-B细胞干细胞的分选。
- 毛德举胡旭张莹沈伟伟陈武桂陈培何建荣卓云云张超初同伟
- 关键词：骨肉瘤肿瘤干细胞
